閆釗

摘要：主要以甘肅徽縣地區(qū)引進(jìn)的良種“保加利亞”玫瑰作為研究對(duì)象進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，3月中下旬、6月10～25日這兩段時(shí)間最適宜采摘玫瑰外植體；枝條中部、上部這兩個(gè)部位最適合建立無(wú)菌體系；最佳的外植體擴(kuò)繁培養(yǎng)基是交互使用0.1mg/LI-BA+MS+1.0mg/L BA.0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA+MS、0.2mg/L NAA+1.0mg/L BA+MS這三種培養(yǎng)基，而1/2M5+0.8～1.0mg/LIBA培養(yǎng)基是最適合生根的。只要通過(guò)科學(xué)煉苗，玫瑰花的移栽成活率可以超過(guò)90%。

關(guān)鍵詞：玫瑰花：組織培養(yǎng)：研究分析

玫瑰也被稱(chēng)為刺玫瑰，是一種薔薇科薔薇屬植物，大概高2m左右的直立灌木，葉片像羽狀，玫瑰枝干比較粗壯，大概有5～9枚小葉，整個(gè)形狀為橢圓狀倒卵形或者橢圓形。玫瑰中含有很多天然礦物質(zhì)（108種），而且富含很多種天然維生素以及清毒養(yǎng)顏成分，還具有人體必需的18種氨基酸，另外玫瑰的藥用價(jià)值也很高。因此玫瑰產(chǎn)業(yè)具有很好的發(fā)展前景，非常有必要探索玫瑰快速繁育技術(shù)，提高玫瑰組織培養(yǎng)效益的途徑。

1 材料以及方法

1.1 研究試驗(yàn)材料

本次研究試驗(yàn)材料選自甘肅徽縣地區(qū)從外引進(jìn)的優(yōu)良玫瑰苗，已經(jīng)栽培了2年多。

1.2 試驗(yàn)方法

每個(gè)試驗(yàn)處理都采用單因子試驗(yàn)方法，各試驗(yàn)處理接種數(shù)量為10瓶，需要試驗(yàn)2次。具體的試驗(yàn)方法如下：①獲得外植體。隨機(jī)選取一些沒(méi)有病蟲(chóng)害、健壯的玫瑰苗作為本次研究標(biāo)的物，采用合理的殺菌脫毒處理培養(yǎng)措施后當(dāng)作培養(yǎng)母株。外植體選擇2015年抽生的腋芽飽滿(mǎn)枝條或者3月中旬一直到7月下旬沒(méi)有萌發(fā)的1年生枝條。②建立無(wú)菌體系。及時(shí)把采摘的外植體材料送回實(shí)驗(yàn)室，一定要將水分流失減少到最低限度，使材料保鮮，在流水狀態(tài)下沖洗9～10min，將水分濾干之后再把多余的枝葉等去除，然后剪成一段長(zhǎng)1～1.5cm，并且上面有1～2個(gè)芽的莖段或者莖尖，一定要注意下切口應(yīng)該斜剪，上切口平剪，將其放置于無(wú)菌瓶中，然后放在無(wú)菌臺(tái)上。進(jìn)行接種前應(yīng)該采用0.1%～0.2%HgCl₂溶液來(lái)浸泡材料，注意浸泡的時(shí)候千萬(wàn)不能隨意晃動(dòng)裝有外植體的無(wú)菌瓶，從而確保能夠完全消毒。消毒之后應(yīng)該采用無(wú)菌水仔細(xì)沖洗7～8次，將材料表面上殘留的HgCl₂溶液徹底消除，把水分濾干之后放在培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)。③培養(yǎng)條件。選擇在徽縣苗木組培中心進(jìn)行試驗(yàn)，調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度為2000Lx，光照時(shí)間連續(xù)10～12h，培養(yǎng)室溫度保持在21±2℃。選擇的培養(yǎng)基應(yīng)該添加葡萄糖20kg/L，瓊脂5.5kg/L，培養(yǎng)基的pH值為5.9。

2 試驗(yàn)結(jié)果以及分析

2.1 外植體外部因素對(duì)于初代培養(yǎng)的主要影響

在3月5日～7月5日這段時(shí)間內(nèi)，每隔5d在選定的玫瑰植株上采摘1次外植體，然后分別根據(jù)枝條上部、中部、下部進(jìn)行相應(yīng)的處理，放置在20kg/L葡萄糖+1.0mg/L BA+MS+瓊脂5.5kg/L的培養(yǎng)基中接種進(jìn)行初代培養(yǎng)，連續(xù)觀察25d，并且詳細(xì)記錄。結(jié)果表明，3月中下旬、6月10日至25日這兩段時(shí)間最適宜采摘玫瑰外植體，把這段時(shí)間采摘的外植體帶回實(shí)驗(yàn)室后通過(guò)相應(yīng)的殺菌處理進(jìn)行初代培養(yǎng)之后，具有很高的新芽抽生率，而且建立無(wú)菌體系的難度相對(duì)比較小，其中枝條中部、上部最適合建立無(wú)菌體系，通常情況下枝條下部的芽抽生速度相對(duì)比較慢，同時(shí)也出現(xiàn)嚴(yán)重的污染。

2.2 愈傷組織誘導(dǎo)受到不同激素的影響分析

根據(jù)不同的組織把在初代培養(yǎng)基上生長(zhǎng)比較良好的無(wú)菌苗接種在添加幾種不同濃度激素的MS培養(yǎng)基中，連續(xù)觀察30d，詳細(xì)記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。具體見(jiàn)表1。

根據(jù)表1中的觀察結(jié)果分析，愈傷組織自身的形態(tài)、質(zhì)地對(duì)于器官發(fā)生部位及其能力具有決定性的作用，玫瑰莖尖組織、莖段組織在一定激素誘導(dǎo)下都可以生成愈傷組織，同時(shí)其周?chē)鷷?huì)冒出健康小芽，但是不管添加什么激素，玫瑰葉片都無(wú)法誘導(dǎo)出愈傷組織。其次，如果培養(yǎng)基中沒(méi)有添加激素，不管選用什么樣的玫瑰組織都無(wú)法誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。0.5mg/L NAA培養(yǎng)基、0.1mg/L2，4-D+1.0mg/L BA培養(yǎng)基誘導(dǎo)玫瑰愈傷組織的效果相對(duì)良好，假如用作芽子的大量擴(kuò)繁，最好是采用0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA組合培養(yǎng)基。

2.3 芽分化以及增殖采用不同培養(yǎng)基的影響

在無(wú)菌條件下在培養(yǎng)皿中隨機(jī)切取1.5cm長(zhǎng)的莖段（帶有葉芽）、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌材料莖尖，將其放置在1.0mg/L BA+MS培養(yǎng)基中接種，連續(xù)觀察10d后會(huì)發(fā)現(xiàn)開(kāi)始萌芽，而且抽生出了新芽，待新芽生長(zhǎng)到2cm，將其切下分別放置于1.0mg/L BA+MS+0.1mg/L2，4-D培養(yǎng)基（①）、1.0mg/L BA+MS+0.2mg/L 2，4-D培養(yǎng)基（②）、1.5mg/L BA+MS+0.1mg/L IBA培養(yǎng)基（③）、1.5mg/L BA+MS+0.5mg/L IBA培養(yǎng)基（④）、1.0mg/LBA+MS+0.2mg/L NAA 培養(yǎng)基（⑤）等幾種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，前提條件是其他條件相同，連續(xù)觀察30d，詳細(xì)記錄結(jié)果，具體見(jiàn)表2。

從表2中分析可知，同等條件下，在相同時(shí)間內(nèi)芽分化量較多，長(zhǎng)勢(shì)良好的培養(yǎng)基為①、③、⑤，雖然②號(hào)培養(yǎng)基的芽分化較大，長(zhǎng)勢(shì)也良好，但呈褐化；④號(hào)培養(yǎng)基芽分化量相對(duì)較少，而且芽長(zhǎng)勢(shì)細(xì)弱。為此，玫瑰繼代增殖培養(yǎng)應(yīng)該選擇①號(hào)、③號(hào)、⑤號(hào)培養(yǎng)基，而且交互使用這3種培養(yǎng)基的話有助于壯苗。

2.4 試管苗煉苗移栽

把健壯芽苗隨機(jī)切成2cm左右莖段（帶腋葉）或者莖尖放置在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)，連續(xù)觀察35d后發(fā)現(xiàn)沒(méi)有激素的MS空白培養(yǎng)基無(wú)法誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)基中IBA濃度相對(duì)較低的話，玫瑰生根率也相對(duì)比較低，但是超過(guò)某濃度值，會(huì)對(duì)玫瑰生根產(chǎn)生抑制作用，最佳的IBA濃度在0.8～1.0mg/L之間。試管苗生長(zhǎng)至2cm，苗高3cm多，根數(shù)有2條，而且長(zhǎng)勢(shì)良好，葉片呈綠色的情況，在煉苗處理后就可以移栽。移栽的過(guò)程中一定要采用大量溫水將生根苗根系上的培養(yǎng)基徹底沖洗干凈，然后把玫瑰苗放在添加適量IBA溶液中可提高苗木移栽成活率。

3 結(jié)論

適當(dāng)采用組織培養(yǎng)技術(shù)有利于玫瑰的快速繁育，建立玫瑰無(wú)菌體系的過(guò)程中一定要注意選擇合適的初代培養(yǎng)時(shí)間以及最佳的外植體培養(yǎng)部位。試管苗移栽成活率主要和煉苗方法以及煉苗時(shí)間有關(guān)。玫瑰組織培養(yǎng)過(guò)程中很容易出現(xiàn)苗邊葉黃化，不利于玫瑰組織快速繁育。發(fā)生玻璃化現(xiàn)象可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)瓶的濕度較高或者激素濃度過(guò)高。

（收稿：2016-03-24）