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        衛(wèi)生學(xué)檢查中和劑頭孢菌素酶作用范圍研究

        2016-09-02 05:32:25沈祝飛王丹丹
        關(guān)鍵詞:衛(wèi)生學(xué)內(nèi)酰胺類抗生素

        吳 揚,余 輝,沈祝飛,王丹丹

        (杭州北望生物技術(shù)有限公司,杭州 310011)

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        衛(wèi)生學(xué)檢查中和劑頭孢菌素酶作用范圍研究

        吳揚,余輝,沈祝飛,王丹丹

        (杭州北望生物技術(shù)有限公司,杭州 310011)

        為給生產(chǎn)廠家選擇頭孢菌素酶提供參考依據(jù),探討頭孢菌素酶去除各種常見頭孢菌素類抗生素抑菌性的能力.采用抑菌圈的方法,對比試驗組和空白對照組頭孢菌素酶對20種頭孢菌素類和3種碳青霉烯類(培南類)藥敏紙片去除抑菌性能力的大小,判斷頭孢菌素酶能否有效地水解各種頭孢菌素β-內(nèi)酰胺環(huán)的酰胺鍵,使其降低或喪失抑菌活性.結(jié)果表明,頭孢菌素酶對大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均有較強的中和能力,對少部分如頭孢曲松等有中和作用,但需要的酶量較大;對碳青霉烯類(培南類)作用很弱.

        頭孢菌素類抗生素;頭孢菌素酶;衛(wèi)生學(xué)檢查;抑菌圈

        頭孢菌素類抗生素屬β-內(nèi)酰胺類抗生素,具有廣譜的抗菌性,殺菌力強,對于敏感菌所致的急性扁桃體炎、急性咽炎、中耳炎、肺部感染、尿路感染、皮膚軟組織感染等疾病療效顯著.中國藥典(2010年版)二部附錄ⅪH “無菌檢查法”和ⅪJ“微生物限度檢查法”中規(guī)定了β-內(nèi)酰胺類抗生素供試品處理方法,要求用β-內(nèi)酰胺酶來處理供試品,以便消除β-內(nèi)酰胺類抗生素的抑菌性,排除其對衛(wèi)生學(xué)檢查結(jié)果的影響,避免造成假陽性的判斷[1-2].雖然各生產(chǎn)廠家對使用β-內(nèi)酰胺酶作為β-內(nèi)酰胺類抗生素的中和劑已成為共識,但目前大多廠家用戶對β-內(nèi)酰胺酶的適用范圍尚不清楚,存在混淆使用的現(xiàn)象[3].本實驗選用β-內(nèi)酰酶中的頭孢菌素酶,對市售常見的20種頭孢菌素類和3種碳青霉烯類(培南類)產(chǎn)品進(jìn)行滅活試驗,為各生產(chǎn)廠家提供參考依據(jù)[4-6].

        1 儀器與試藥

        SW-CJ-1FD單人單面凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備有限公司),DRP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海森信實驗儀器有限公司).

        抗生素藥敏試紙片如表1(購自上海易佰聚貿(mào)易有限公司);頭孢菌素酶(批號:20130723,杭州北望生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),活性>200萬單位);營養(yǎng)瓊脂平皿培養(yǎng)基(自制);供試菌大腸埃希菌(編號BL21,購自浙江省微生物所).

        表1 市售常見頭孢類抗生素藥敏紙片及其含量

        2 方法與結(jié)果

        2.1供試品配制

        取一支頭孢菌素酶(>200萬單位),用無菌水溶解并稀釋至1×105單位∕mL,無菌過濾后在2~8 ℃條件下貯存?zhèn)溆?

        2.2培養(yǎng)基制備

        照中國藥典2010年版附錄ⅪH無菌檢查法項下培養(yǎng)基制備6營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制備方法制備.

        2.3衛(wèi)生學(xué)檢查

        試驗組:營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基滅菌后,冷卻至55~60 ℃.添加頭孢菌素酶至瓊脂培養(yǎng)基中,每皿添加活性均為105單位.平板上涂布50 μL大腸埃希菌懸液;將藥敏紙片貼至平板上,并做好標(biāo)記.

        空白對照組:方法同試驗組,但培養(yǎng)基中不加入頭孢菌素酶,空白組各藥敏紙片均應(yīng)有抑菌圈.

        將上述試驗組和空白對照組置培養(yǎng)箱中,(37 ± 1) ℃培養(yǎng)18~24 h后觀察結(jié)果,以抑菌圈的大小判定供試品是否具有中和抗生素活性的能力.見表2.

        表2 105單位/皿酶量對定量藥敏紙片中抗生素的分解效果

        -:無分解作用;+:較弱分解作用;++:中等分解作用;+++:較強分解作用;

        選出上述2.3試驗中有抑菌圈的抗生素,加大平皿中的加酶量,方法同上,觀察結(jié)果,以抑菌圈的大小判定供試品是否具有中和抗生素活性的能力.見表3.

        結(jié)果表明:頭孢菌素酶對大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均有較強的中和能力,少部分如頭孢曲松、頭孢呋辛等有中和能力但需要的酶量較大.頭孢菌素酶對碳青霉烯類(培南類)中和作用很弱.

        表3 抑菌圈測量

        -:無分解作用;+:較弱分解作用;++:中等分解作用;+++:較強分解作用;

        3 結(jié) 語

        原料藥和制劑的衛(wèi)生學(xué)檢查(無菌檢查和微生物限度檢查), 是評價藥品生產(chǎn)過程中是否受到嚴(yán)重衛(wèi)生污染的重要依據(jù).但在實際檢測工作中, 由于抗生素藥品本身的抑菌性,對檢查結(jié)果的判斷產(chǎn)生影響,而選擇哪種中和劑需要在檢查過程中進(jìn)行大量的方法學(xué)驗證,給檢驗工作帶來一定的難度.通過以上研究,可以清楚的了解頭孢菌素酶對哪些頭孢類抗生素有較好的中和作用,為各頭孢菌素類抗生素生產(chǎn)廠家提供了參考依據(jù).

        [1]中華人民共和國藥典編委會. 中國藥典二部(附錄)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010. 103-107.

        [2]中華人民共和國藥典編委會. 中國藥典二部(附錄)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010. 107-116.

        [3]張峰, 袁菊萍. 不同廠家頭孢他啶體外抑菌作用及藥物費用分析[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報, 2008, 27(4): 478-479.

        [4]李夏林, 覃曉. 注射用頭孢呋辛鈉無菌檢查的方法學(xué)驗證[J].中國醫(yī)藥科學(xué), 2012, 11(2): 112-113.

        [5]佘月坤, 田勇. 頭孢菌素類抗生素膠囊劑控制菌檢查方法的探討[J]. 藥物分析雜志, 2009, 29(6): 1049-1050.

        [6]孫春艷, 張春瑛, 沈佳特, 等. 注射用頭孢菌素?zé)o菌檢查的方法學(xué)驗證[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報,2007, 26(9): 1089-1091.

        Probe into hygiene inspection neutralizer scope of cephalosporins

        WU Yang, YU Hui, SHEN Zhu-fei, WANG Dan-dan

        (Hangzhou Lion Biotechnology Co., Ltd, Hangzhou 310011, China)

        To provide the manufactures reference for choosing cephalosporinase as a neutralizing agent of cephalosporins’ hygiene inspection, the ability of cephalosporinase removing commercial common cephalosporins’ antibacterial abilitiy was investigated. Using cephalosporinase as a neutralizer, the size of inhibiting zone of all kinds of cephalosporin sensitive test paper was observed after neutralization, which can judge the strength of hydrolysis cephalosporins’ beta lactam amide linkage leading to the reduce of antibacterial ability of cephalosporins. Results indicated that cephalosporinase has great effect of neutralization on most kinds of cephalosporin. It also has effect on ceftriaxone, but need more amount of cephalosporinase. The neutralization effect of cephalosporinase on carbapenems(imipenem) is very weak.

        cephalosporins; cephalosporinase; hygienic inspection; inhibiting zone

        2015-11-10.

        吳揚(1976-),男,工程師,研究方向:中藥制藥.

        R927

        A

        1672-0946(2016)04-0433-02

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