張桐煒，谷　建

(遼寧省營(yíng)口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 營(yíng)口 115000)

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不同冷凍稀釋液的配方對(duì)遼寧絨山羊精子活率的影響

張桐煒，谷建

(遼寧省營(yíng)口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 營(yíng)口 115000)

為了使遼寧絨山羊精液在冷凍保存時(shí)具有更好的活性，本實(shí)驗(yàn)采用一步稀釋法，通過(guò)檢測(cè)精子活率的方法比較六種冷凍稀釋液。篩選出了適合遼寧絨山羊精液冷凍的最佳基礎(chǔ)冷凍稀釋液配方(100mL)：Tris 3.44g，檸檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黃15%，甘油5%。

遼寧絨山羊；精液；冷凍稀釋液；配方；篩選

遼寧絨山羊主要分布在遼寧東部山區(qū)以及遼東半島地區(qū)，是在特定的歷史和地域條件下，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自然選擇和人工選育所形成的絨肉兼用型絨山羊品種。具有體格大、抗逆性強(qiáng)、產(chǎn)絨量髙、絨纖維細(xì)長(zhǎng)、絨毛比例高、絨毛潔白、手感柔軟等優(yōu)良品質(zhì)[1]。并且續(xù)山羊品種具有穩(wěn)定的遺傳特性，攜帶有其他續(xù)山羊品種所沒(méi)有的獨(dú)特基因，是培育優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，改良低產(chǎn)絨山羊的寶貴遺傳資源。遼寧絨山羊是我國(guó)重點(diǎn)保護(hù)的家養(yǎng)動(dòng)物品種，是我國(guó)政府明令禁止出口的少數(shù)幾個(gè)品種之一[2]。

羊精液的冷凍保存不僅能提高種公羊的利用率，而且能降低繁殖成本，對(duì)人工授精技術(shù)的推廣應(yīng)用，對(duì)養(yǎng)羊生產(chǎn)的發(fā)展都產(chǎn)生了巨大的推動(dòng)作用[3]。

1　實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物：遼寧絨山羊種公羊7只，該7只種公山羊?yàn)?～5歲發(fā)育良好、體格健壯、性機(jī)能旺盛。

主要試劑：果糖，海藻糖，蔗糖，Tris(三羥甲基氨基甲烷)，檸檬酸為進(jìn)口分裝；甘油，葡萄糖，乙二醇，DMSO，乳糖，EDTA，檸檬酸鈉，青霉素，鏈霉素，維生素E，SOD(過(guò)氧化物歧化酶)，F(xiàn)ITC-PSA(異硫氰酸熒光素豌豆凝集素)，羅丹明123，PI(碘化丙啶)，卵黃(新鮮雞蛋)

實(shí)驗(yàn)器材：電子天平、OLYMPUS CH20顯微鏡、精細(xì)管程序冷凍儀(型號(hào)TSM-140MS，富士平工業(yè)株式會(huì)社)等。

2　試驗(yàn)方法

2.1精液的準(zhǔn)備

用假陰道法采精，采精后立即觀(guān)察精液外觀(guān)性狀并在光學(xué)顯微鏡下檢查精液質(zhì)量，只有精液顏色正常，有云霧狀，精子活力在90%以上時(shí)，才用于實(shí)驗(yàn)。

2.2精子活率的測(cè)定

取1滴待檢查精液稀釋后，置于載玻片上，上覆蓋玻片，借助光學(xué)顯微鏡放大200～400倍，用基礎(chǔ)稀釋液作為稀釋劑(見(jiàn)表1)，以保持正常運(yùn)動(dòng)，計(jì)數(shù)四角及中央五個(gè)方格中的非直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)(包括死精子，擺動(dòng)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的精子)，然后把計(jì)數(shù)板放入90℃保溫箱內(nèi)大約3～5min，殺死全部精子后在顯微鏡下計(jì)出全部精子數(shù)?；盥?(總精子數(shù)-非直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù))/總精子數(shù)×100%。

表1　六種基礎(chǔ)稀釋液配方

2.3結(jié)果與分析

經(jīng)過(guò)SPSS V13.0軟件分析后，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　6種不同配方稀釋液精子解凍后活率

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)注的不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同小寫(xiě)字母表示差異不顯著(P>0.05)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在所選用的6種冷凍稀釋液中。E組稀釋液解凍后精子活率，均顯著高于A(yíng)、C、F組的稀釋液(P<0.05)。與B、D組稀釋液相比效果不顯著(P>0.05)，但各項(xiàng)指標(biāo)都相對(duì)高于B、D組稀釋液。因此篩選出E組冷凍稀釋液，作為遼寧絨山羊精液冷凍稀釋液的配方。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較6種冷凍稀釋液對(duì)精液冷凍解凍后活率，初步篩選出山羊細(xì)管冷凍基礎(chǔ)稀釋液E(100mL)：Tris 3.44g，檸檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黃15%，甘油5%。

[1] 姜懷志，韓迪，郭丹，等.遼寧絨山羊的若干種質(zhì)特性[J].中國(guó)草食動(dòng)物,2010(6):72-75.

[2] 楊秋鳳，劉興偉，楊詠梅,等.遼寧絨山羊年齡與續(xù)毛生產(chǎn)性能的關(guān)系[J].中國(guó)草食動(dòng)物,2008(8):28-30.

[3] 王超，周慶雨.山羊精液冷凍過(guò)程中影響因素分析[J].畜牧與獸醫(yī),1995,27(1)：11-13.

2015-12-31

張桐煒(1983-)，助理獸醫(yī)師，本科，研究方向：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)。

S814.3

A文章編號(hào)：2095-9737(2016)04-0019-01