李昌紅，車玲玉，宋丹陽，白云

(華北理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北唐山063000)

?

宮頸癌組織中HSG、Ki67表達觀察

李昌紅，車玲玉，宋丹陽，白云

(華北理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北唐山063000)

目的觀察宮頸癌組織中細胞增殖抑制基因(HSG)和增殖細胞核抗原(Ki67)的表達變化。方法采用免疫組織化學(xué)的方法檢測72例宮頸癌組織，51例CIN(CINⅠ級27例、CINⅡ級10例、CINⅢ級14例)，25例正常宮頸組織中HSG、Ki67的表達。結(jié)果宮頸癌組織、CINⅠ組織、CINⅡ組織、CINⅢ組織、正常宮頸組織中HSG陽性表達率分別為20.83%、44.44%、30.00%、28.75%和60%(15/25)；Ki67陽性表達率分別為88.89%、51.85%、60%.00、85.71%和48.00%。宮頸癌組織中HSG陽性表達率低于CINⅠ組織、正常宮頸組織(P均<0.05)；Ki67陽性表達率高于CINⅠ組織、CINⅡ組織、正常宮頸組織(P均<0.01)。HSG、ki67表達與宮頸癌臨床分期和分化程度有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、病理類型及淋巴轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論宮頸癌組織中HSG陽性表達率降低，Ki67陽性表達率升高，HSG、Ki67的異常表達可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

宮頸癌；細胞增殖抑制基因；線粒體融合蛋白2；增殖細胞核抗原

在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中，宮頸癌的發(fā)病率和病死率居第二位，嚴(yán)重威脅患者生命。細胞增殖抑制基因(HSG)又稱線粒體融合蛋白2(Mfn2)，定位于人1號染色體短臂36.22，此區(qū)域易發(fā)生基因突變，出現(xiàn)異位或缺失[1]。HSG常存在于線粒體外膜，與線粒體的融合功能有關(guān)，對維持線粒體正常形態(tài)和功能有重要作用[2,3]。增殖細胞核抗原(Ki67)是一種DNA結(jié)合蛋白，參與細胞合成代謝功能，與多種腫瘤的發(fā)病有關(guān)。目前，國內(nèi)外未見HSG在宮頸癌中的相關(guān)研究報道。我們觀察了宮頸癌組織中HSG、Ki67的表達變化，探討HSG、Ki67在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　材料與方法

1.1宮頸病變組織標(biāo)本來源收集2010年7月～2015年7月華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院婦科手術(shù)切除的宮頸癌組織標(biāo)本72例、CINⅠ組織標(biāo)本27例、CINⅡ組織標(biāo)本10例、CINⅢ組織標(biāo)本14例、正常宮頸組織標(biāo)本25例。宮頸癌患者中，F(xiàn)IGO分期Ⅰ期32例、Ⅱ期19例、Ⅲ～Ⅳ期21例。四類標(biāo)本來源、患者年齡等臨床資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2試劑與儀器兔抗人HSG單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，鼠抗人Ki67多克隆抗體、SP-9001免疫組化染色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，OLYMPUS光學(xué)顯微鏡華北理工大學(xué)提供。

1.3HSG、Ki67檢測采用免疫組化法。將脫蠟完全的標(biāo)本進行抗原修復(fù)，暴露抗原決定簇，過氧化氫溶液除去內(nèi)源性氧化酶；滴加一抗Ki67，置于4 ℃的冰箱中過夜；將5 μL的HSG與1 000 μL的稀釋液均勻混合配制成二抗(HSG)，置于4 ℃冰箱中過夜；DAB顯色劑顯色，用蒸餾水洗去DAB顯色劑，然后進行脫水，風(fēng)干；中性樹脂封片，封片完成后在顯微鏡下觀察。HSG陽性表達為細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒；Ki67陽性表達為細胞核出現(xiàn)棕色顆粒；計算陽性細胞百分比，0～5%為陰性，>5%～10%為弱陽性，>10%～60%為陽性，>60%為強陽性，弱陽性～強陽性判定為蛋白表達陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗及Fisher′s檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1宮頸病變組織及正常宮頸組織中HSG、ki67的表達變化宮頸癌組織、CINⅠ組織、CINⅡ組織、CINⅢ組織、正常宮頸組織中HSG陽性表達率分別為20.83%(15/72)、44.44%(12/27)、30.00%(3/10)、28.75%(4/14)和60.00%(15/25)；Ki67陽性表達率分別為88.89%(64/72)、51.85%(14/27)、60.00%(6/10)、85.71%(12/14)和48.00%(12/25)。宮頸癌組織中HSG陽性表達率低于CINⅠ組織、正常宮頸組織(P均<0.05)；Ki67陽性表達率高于CINⅠ組織、CINⅡ組織、正常宮頸組織(P均<0.01)。

2.2HSG、Ki67表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系HSG、Ki67表達與宮頸癌臨床分期和分化程度有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、病理類型及淋巴轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

表1　HSG/Mfn、Ki67表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3　討論

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是非常復(fù)雜的病變過程，與多種抑癌基因表達、調(diào)控密切相關(guān)[4]。HSG是一種由75個氨基酸組成的、具有抑制細胞增殖作用的融合蛋白，也是一種高度保守的跨膜GTP酶。HSG可使多種腫瘤傳代細胞系的細胞周期停滯在G0/G1期，誘導(dǎo)細胞凋亡；能抑制ras蛋白，調(diào)節(jié)ERK/MARP通路，控制線粒體融合[5]；HSG還參與調(diào)節(jié)多種生理病理過程[6]，如細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝、增殖及凋亡等[7]。目前認(rèn)為HSG基因在腫瘤中的作用是促進腫瘤細胞凋亡并抑制腫瘤細胞增殖[8]。本研究結(jié)果顯示，HSG在宮頸癌組織中的陽性表達率低于正常宮頸組織和CIN組織，且與宮頸癌臨床分期、分化程度有關(guān)，提示HSG低表達的宮頸癌惡性程度更高、侵襲能力更強，其在宮頸癌的浸潤和轉(zhuǎn)移方面起著重要作用[9]。HSG是潛在的抑癌基因，具有抗腫瘤效應(yīng)，也是一種潛在的生物標(biāo)志物[10]，可能有助于宮頸癌的早期診斷或預(yù)后判斷。

Ki67是一種增殖細胞相關(guān)的核蛋白質(zhì)，它有提示細胞增殖活躍程度的作用，在宮頸癌及CINⅢ存在異?；钴S的細胞增殖群體,且在CINⅡ以上的級別越高,細胞增殖越活躍。Ki67在細胞增殖中也不可或缺[11]，作為細胞增殖標(biāo)記物,Ki67起作用于增殖周期中的人類細胞,其半衰期短檢測結(jié)果明顯優(yōu)于半衰期長的，能較全面的反映細胞群體的增殖活性，因此Ki67在惡性腫瘤中常呈高表達[12]。Ki67在細胞增殖的各期(G1、S、G2和M)中均有表達，但在細胞靜止期G0期不表達。在病理報告中的指數(shù)高低與許多腫瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。已有研究[13]顯示，Ki67與乳腺癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分級、分期、預(yù)后等密切相關(guān)。Ki67還被認(rèn)為是反映宮頸癌細胞增殖活性的敏感、準(zhǔn)確的生物學(xué)指標(biāo)[14]。此外，Ki67的表達水平也有助于腫瘤患者預(yù)后評價及治療方案的制定[15，16]。本研究中，Ki67在宮頸癌組織中高表達，在CIN組織中的陽性表達率隨級別增高而增高，這與雷蕾[17]、徐秋霞等[18]研究結(jié)果一致，提示隨著宮頸病變程度的加重，Ki67表達逐漸增強，細胞增殖活性增大，最終導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)病。我們還發(fā)現(xiàn)，Ki67在宮頸癌組織中的表達與臨床分期和分化程度有關(guān)，Ki67的表達水平與宮頸癌病情和患者預(yù)后密切相關(guān)。

結(jié)合上述研究結(jié)果，我們認(rèn)為，HSG和Ki67的異常表達可能參與了宮頸癌的發(fā)病，并可能成為宮頸癌診斷和預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。關(guān)于HSG和Ki67在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制及兩者之間的相互作用仍需進一步研究。

[1] Hofmann WK,Takeuchi S,Xie D,et al.Frequent loss of heterozygo-sity in the region of D1 S450 at lp36.2 in myelidysplastic syndromes[J].Leuk Res,2001,25(5):855-858.

[2] Rojo M,Legros F,Chateau D,et al.Membrane topology andmito-chondrial targeting ofmitofusins,ubiquitous mammalian homologs of the transmembrane GTPase Fzo[J].Cell Sci,2002,115(8):1663-1674.

[3] Eura Y,Ishihara N,Yokota S,et al.Twomitofusin proteins,mam-malian homologues of FZO,with distinct functions are both required formitochondrial fusion[J].J Biochem,2003,134(3):333-344.

[4] Sehnal B,Driák D,Neumannová H,et al.Prevalence of anal human papillomavirus infection among women and its relation to cervical HPV infection[J].Ceska Gynekol,2012,77(3):210-214．

[5] Chen KH,Guo X,Ma D,et al.Dysregulation of HSG triggers vascular proliferative disorders [J].Nat Cell Biol,2004,6(9):872-883.

[6] Ma LI,Chang Y,Yu L,et al.Pro-apoptotic and anti-proliferative effects of mitofusin-2 via PI3K/Akt signaling in breast cancer cells[J].Oncol Lett,2015,10(6):3816-3822.

[7] Zhang Y,Jiang L,Hu W,et al.Mitochondrial dysfunction during in vitro hepatocyte steatosis is reversed by omega-3 fatty acid-inducedup-regulation of mitofusin[J].Metabolism,2011,60(6):767-775.

[8] Li PT,Zhu SY,Wu XP,et al.Association of Polymorphisms inMitofusin-2 Gene with Type 2 Diabetes in Han Chinese[J].J Bio Med Biotechnol,2012,42(7)：1-7.

[9]鄧秀娟，吳海根.Ki67、PTEN在卵巢漿液性腫瘤中的表達及臨床意義[J].實用癌癥雜志,2011,26(4):365-371．

[10] Sebastian D,Hernandez-Alvarez MI,Segales J,et al.Mitofusin 2(Mfn2)links Mitochondrial and endoplasmic reticulum function with insulin signaling and is essential for normal glucose homeostasis[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2012,109(14):5523-5528.

[11] 劉嶸,濮德敏,祝達,等.uPA、Ki67和VEGF在宮頸癌組織中的表達及相關(guān)性研究[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2014,43(5):516-519.

[12] 黃宇，胡曉樺，劉志輝．Ki-67表達與鼻咽癌、乳腺癌化療療效及預(yù)后的臨床分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(2):641-645．

[13] 常麗琴,吳素慧.Ki67、Sur vivin在早期宮頸癌中的表達與預(yù)后相關(guān)性分析[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2013,3(7):20-22.

[14] Aller R,De Luis DA,Izaola O,et al.Role of -55CT polymorphism of UCP3 gene on non alcoholic fatty liver disease and insulin resistance in patients with obesity[J].Nutr Hosp,2010,25(4):572-576.

[15] Zhang GE,Jin HL,Lin XK,et al.Anti-Tumor Effects of Mfn2 in Gastric Cancer[J].Int J Mol Sci,2013,14(7):13005-13021.

[16] Misko A,Jiang S,Wegorzewska I,et al.Mitofusin 2 is necessary for transport of axonal mitochondria and interacts with the Miro/Milton complex[J].Neuro Sci,2010,30(12):4232-4240.

[17] 雷蕾,葉斌,王西川,等.p16、p53和Ki67在宮頸癌中的表達及其臨床意義[J].實用醫(yī)院臨床雜志，2014,11(4):123-125.

[18] 徐秋霞,關(guān)紅瓊.p16INK4A、p14AR和Ki67在宮頸癌中的表達特點[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010,16(1):17-19.

河北省科技計劃資助項目(13277714D)；華北理工大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新計劃資助項目(X2015176)。

白云(E-mail: baiyun6349@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.27.029

R737.33

B

1002-266X(2016)27-0082-03

2016-01-22)