楊小源，殷建峰甘肅省中醫(yī)院，甘肅蘭州730050；2慶陽市中醫(yī)醫(yī)院

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通腦疏脈丸毒理學(xué)及藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

楊小源1，殷建峰2△
1甘肅省中醫(yī)院，甘肅蘭州730050；2慶陽市中醫(yī)醫(yī)院

目的：觀察通腦疏脈丸的急性毒性反應(yīng)、對血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)的影響、對大鼠血小板聚集和解聚的影響。方法：對通腦疏脈丸進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，因未測出小鼠致死劑量，無法測定LD50，故改測最大給藥量；藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)采用通腦疏脈丸高劑量組、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5 g/kg（體質(zhì)量）、2.5 g/kg（體質(zhì)量）。結(jié)果：小鼠灌胃給藥通腦疏脈丸，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，1日最大給藥量為67.9g/kg（體質(zhì)量），是臨床人日用量的136倍；通腦疏脈丸高、低劑量可使經(jīng)腎上腺素和冰水處理后造成的血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度明顯降低（P＜0.05），與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。通腦疏脈丸高、低劑量對ADP誘導(dǎo)大鼠全血血小板聚集有明顯抑制作用，能明顯降低1、6分鐘電阻值，與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：通腦疏脈丸1日內(nèi)劑量過大口服是安全的，能明顯降低大鼠全血及血漿黏度，抑制血小板聚集和促進(jìn)血小板解聚，有改善血液流變學(xué)異常的作用。

通腦疏脈丸；毒理學(xué)；藥效學(xué)

通腦疏脈丸系慶陽市中醫(yī)醫(yī)院科研攻關(guān)課題，純中藥制劑，項(xiàng)目編號：慶陽市科技計(jì)劃項(xiàng)目KZ2015-29。通腦疏脈丸由麻黃、細(xì)辛、桂枝、當(dāng)歸、干姜、川芎、葛根、赤芍、桃仁、紅花、甘草等11味中藥組成，其主要功效為溫通振陽、化瘀通絡(luò)。用于治療缺血性腦中風(fēng)引起的半身不遂，肢體麻木，言語不利，口眼歪斜等癥狀。本文就通腦疏脈丸毒理學(xué)、藥效學(xué)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)藥物通腦疏脈丸（甘肅省慶陽市中醫(yī)院提供生產(chǎn)，批號：150401）；復(fù)方丹參片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)，批號：G4A040）；鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號：150411）；肝素鈉注射液（2 mL/支（12500單位），江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：1503102）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠，BALB/c，SPF級，雌雄各辦，體質(zhì)量18～22 g，蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號：SCXK（甘）2013-0002，醫(yī)用動(dòng)物合格證號：62000800000063；Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（甘）2013-0002，醫(yī)用動(dòng)物合格證號：62000800000066。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器NXE-1B型錐板粘度計(jì)（成都儀器廠提供）；WNG-201型紅外血漿黏度計(jì)（成都儀器廠提供）；BS110S型sartorius電子天平（北京賽多利斯天平有限公司提供）；QX-200全血血小板聚集儀（上海醫(yī)大儀器廠提供）。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1急性毒性實(shí)驗(yàn)

1.4.1.1LD50測定［1-3］預(yù)實(shí)驗(yàn)：取小鼠15只，雌雄各半，隨機(jī)分為A、B、C 3組，每組5只。各組小鼠禁食不禁水16小時(shí)后分別灌胃給藥，A、B、C組分別按0.04 mL/g體質(zhì)量灌胃56.6%、28.3%、14.2%的通腦疏脈，各組均給藥1次，觀察給藥后7天內(nèi)小鼠死亡情況。

1.4.1.2最大給藥量測定［4］取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組20只。各組小鼠禁食不禁水，16小時(shí)后，按最大可給藥體積0.04 mL/g體質(zhì)量灌胃56.6%（最大可給藥濃度）通腦疏脈丸，實(shí)驗(yàn)各組分別于1日內(nèi)給藥3次（間隔6小時(shí)）、2次（間隔6小時(shí)）、1次。觀察記錄各組小鼠給藥后7天內(nèi)的反應(yīng)情況，以不產(chǎn)生死亡的最大劑量為最大給藥量，并按下式計(jì)算相當(dāng)于臨床1日給藥量倍數(shù)：

1.4.2血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度測定取正常喂養(yǎng)1周后的大鼠50只，隨機(jī)分為5組，分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、高劑量組、低劑量組，每組10只。各組大鼠給予普通飼料、自由飲水。正常對照組和模型對照組灌胃蒸餾水，陽性藥對照組灌胃復(fù)方丹參片0.72 g/kg（體質(zhì)量）（相當(dāng)于臨床用量15倍），受試藥高、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5 g/kg（體質(zhì)量）（相當(dāng)于臨床用量15倍）、2.5 g/kg體質(zhì)量（相當(dāng)于臨床用量15倍），均為0.01 mL/g（體質(zhì)量）。各組每日給藥2次，連續(xù)給藥10日。除空白對照組外，從給藥第2日起，給藥30分鐘后，其余各組大鼠皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液0.000 8 mL/g（體質(zhì)量），共2次，間隔4小時(shí)，在2次注射腎上腺素之間（前后各間隔2小時(shí)），將大鼠浸入4℃冰水中5分鐘，連續(xù)2日，建立血瘀型模型［3-6］。實(shí)驗(yàn)前12小時(shí)禁食不禁水，各組大鼠從股動(dòng)脈取血，用肝素抗凝，錐板黏度計(jì)和血漿黏度計(jì)測定大鼠全血黏度和血漿黏度。

1.4.3大鼠血小板聚集和解聚實(shí)驗(yàn)［5-6］取大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組10只。通腦疏脈丸高、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5、2.5 g/kg（體質(zhì)量）；陽性藥組灌胃復(fù)方丹參片0.72 g/kg（體質(zhì)量）；正常對照組灌胃生理鹽水，均為0.01mL/g（體質(zhì)量）。各組每天灌胃1次，連續(xù)5天。于末次給藥1.5小時(shí)，從頸靜脈取血2 mL放入含25 U/mL肝素5 μL的試管中，混勻。取抗凝血0.5 mL，置硅化管中，加0.5 mL緩沖液，預(yù)熱5分鐘，待電阻值恒定后，以ADP（5 μmoL/L）誘導(dǎo)血小板聚集，讀取1分鐘電阻值。清洗并預(yù)熱電極，讀取6分鐘電阻值。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（χ±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1急性毒性實(shí)驗(yàn)給藥后7天后3組均未出現(xiàn)死亡。見表1。

表1　小鼠LD 50預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2最大給藥量測定給藥后7天3組均未出現(xiàn)死亡，也未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。見表2。

2.3對血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果通腦疏脈丸高、低劑量組可使血瘀證大鼠高、中、低切變率下的全血黏度和血漿黏度明顯降低。高劑量組與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），低劑量組與模型對照組比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2　小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3　通腦疏脈丸對血瘀證模型大鼠全血、血漿黏度的影響mpa·s

2.4對大鼠血小板聚集和解聚的實(shí)驗(yàn)結(jié)果通腦疏脈丸高、低劑量連續(xù)給藥5天，對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯抑制作用，可以顯著降低1分鐘電阻值，高、低2個(gè)劑量組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高、低劑量組對血小板自動(dòng)解聚均有明顯促進(jìn)作用，可以顯著降低6分鐘電阻值，高、低2個(gè)劑量組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4　通腦疏脈丸對大鼠血小板聚集和解聚的影響

3　結(jié)論

對小鼠灌胃給藥通腦疏脈丸，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，1日最大給藥量為67.9g/kg（體質(zhì)量），是人臨床日口服劑量的136倍。對經(jīng)腎上腺素和冰水處理后造成的血瘀證模型大鼠全血和血漿黏度增高，通腦疏脈丸具有明顯降低全血和血漿黏度的作用。通腦疏脈丸還有抑制對ADP誘導(dǎo)大鼠全血血小板聚集和促進(jìn)血小板解聚的作用。

綜上所述，通腦疏脈丸1日內(nèi)劑量過大口服是安全的，其具有降低大鼠全血及血漿黏度，抑制血小板聚集和促進(jìn)血小板解聚的作用。

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：113-118.

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Experimental Study on Toxicology and Pharmacology of TongNao ShuMai Pills

YANG Xiaoyuan1，YIN Jianfeng2△
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Qingyang Municipality Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective：To observe acute toxic reaction of TongNao ShuMai pill and its effects on the hemorheology，platelet aggregation and depolymerization of the rat model of blood-stasis pattern.Methods：Acute toxic test of TongNao ShuMai pill was conducted on the mice，because the lethal dosage and LD50 were not detected out，maximum administration dosage was tested.In the pharmacodynamic study，the rats were divided into low dosage group and high dosage group.They accepted TongNao ShuMai pill in the concentrations of 7.5g/kg body mass and 2.5g/kg body mass respectively.Results：No obvious toxic reaction was found after the mice received intragastric administration of TongNao ShuMai pill.The maximum administration dosage was 67.9g/kg within one day，which was 136 times of human dosage；TongNao ShuMai pill in the low and high dosage could lower the blood and plasma viscosity of the rat model of blood-stasis pattern notably（P＜0.05）which were caused by adrenaline and ice water.Compared with model control group，the differences had statistical meaning（P＜0.05）.TongNao ShuMai pill in the low and high dosage could inhibit whole blood platelet aggregation of ADP-induced rats obviously，and it could obviously decrease one，six resistance values，the difference showed statistical meaning compared with the model control group（P＜0.05）.Conclusion：It's safe to take TongNao ShuMai pill orally in large dose within one day，which could obviously decrease whole blood and plasma viscosity，inhibit platelet aggregation，promote platelet depolymerization and improve abnormal hemorheology.

TongNao ShuMai pill；toxicology；pharmacology

R285.5

A

1004-6852（2016）06-0013-03

2016-02-15

楊小源（1970—），男，副主任中藥師。研究方向：中藥制劑與中藥炮制。

△殷建峰（1969—），男，副主任中藥師。研究方向：中藥制劑與中藥鑒定。