雷曼紅，姜仁軍，陳生熬

（1.塔里木大學動物科學學院，新疆　阿拉爾　843300；2.塔里木大學生命科學學院，新疆　阿拉爾　843300）

葉爾羌高原鰍“腸積水”病因調查及防治措施

雷曼紅1，姜仁軍2，陳生熬1

（1.塔里木大學動物科學學院，新疆阿拉爾843300；2.塔里木大學生命科學學院，新疆阿拉爾843300）

doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.06.017

葉爾羌高原 鰍 Triplophysa（Hedinichthgs）yarkandensis（Day），屬鯉形目（Cyprinidformes），鰍科（Cobitidae），高原鰍屬（Triplophysa），俗稱“狗頭魚”，廣泛分布于塔里木河流域，因其肉質細膩、味道鮮美、營養(yǎng)價值高，受到廣大消費者的歡迎。由于資源銳減，近年來，有關人員從野外捕撈野生葉爾羌高原鰍進行馴養(yǎng)。人工養(yǎng)殖條件下，該魚夏、秋季常暴發(fā)“腸積水”病，該病發(fā)病快，病死率高，幾乎為100%，給生產造成了嚴重的損失。2014年，筆者項目組對該病從病原菌的分離鑒定、疾病防治措施等方面進行了研究，以期為葉爾羌高原鰍大規(guī)模人工養(yǎng)殖的病害防治提供一定的理論指導。

1　材料及方法

1.1材料

瀕死的葉爾羌高原鰍，來自塔里木大學水產試驗站，體長10～20 cm；健康的葉爾羌高原鰍為來自塔河的野生葉爾羌高原鰍，體長10～15 cm。

1.2癥狀觀察

取瀕臨死亡的病魚數(shù)尾進行體表及體內病癥觀察，以確定該病的典型癥狀。

1.3病原的分離與鑒定

1.3.1病毒學試驗選取瀕死高原鰍肝胰臟，加l mL生理鹽水，在研缽中進行研磨，加入青、鏈霉素溶液，作用15 min后，4 000 r/min離心10 min，之后取上清液，注射10尾健康的高原鰍，每尾0.1 mL，然后飼養(yǎng)在盛有50 L水的魚缸中，觀察7 d。

1.3.2細菌的分離選取有典型病癥的魚，用70%的酒精擦拭體表，無菌操作取其肝胰臟、腎臟，于普通營養(yǎng)瓊脂平板和兔血瓊脂平板上劃線分離，28℃恒溫培養(yǎng)24 h后取優(yōu)勢菌進行純化，最后轉接到兔血瓊脂平板上培養(yǎng)。

1.3.3回染試驗實驗用魚為體長10～15 cm的健康無傷的葉爾羌高原鰍，從塔里木河捕撈，在魚缸飼養(yǎng)30 d后進行回染試驗，設實驗組及對照組。每組實驗魚各10尾，實驗水溫28℃。

用無菌生理鹽水清洗分離菌株的菌苔，用麥氏比濁法測定并調節(jié)菌懸液濃度為6×108cells/mL，然后對高原鰍進行腹腔注射，每尾注射0.1 mL；對照組注射相同劑量的無菌生理鹽水。連續(xù)7 d觀察魚的發(fā)病癥狀及死亡情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出，檢查其體表及內臟器官的病變情況，同時做細菌分離。1.3.4病原菌鑒定將純化的病原菌株置于兔血瓊脂平板上培養(yǎng)，于28℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落特征，然后將病原菌株接種于鮮血瓊脂平板上，28℃條件下培養(yǎng)24 h，挑取單菌落混于生理鹽水中，用可見-紫外分光光度計測量并配成0.5×108cells/mL的菌懸液后，利用全自動微生物分析系統(tǒng)VITEKAMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡（GNI）進行鑒定。

1.3.5藥敏試驗用涂布法接種菌株，然后將藥敏紙片（購自杭州天和微生物試劑有限公司）貼在培養(yǎng)基上，28℃條件下培養(yǎng)24 h后，測定抑菌圈直徑，根據(jù)《現(xiàn)代診斷學手冊》標準，判斷致病菌株對藥物的敏感程度。

2　結果

2.1癥狀

肉眼觀察：病魚腹部異常膨大，腹部兩側有點狀出血，鰓部組織、體表黏液明顯增多。解剖發(fā)現(xiàn)：病魚腹腔中沒有水，即不是“腹水病”。腸道明顯鼓脹，充滿大量淡黃色積水，腸壁很薄，伴有少量氣體，大多數(shù)魚腸道內沒有食物，腸壁明顯充血。肝胰臟呈磚紅色，具淤血斑；腎充血、出血；腹腔內基本上看不到脂肪。

2.2病毒學試驗結果

將10尾注射了滅菌組織懸液的葉爾羌高原鰍飼養(yǎng)兩周，無一發(fā)病，也無其他異常，說明此病不是由病毒引起的。

2.3菌落形態(tài)

從病魚肝胰臟中分別分離到2株優(yōu)勢菌XJ-I 和XJ-II。菌株XJ-I和XJ-II在血瓊脂平板上培養(yǎng)24 h后均形成圓形、邊緣整齊、表面光滑、隆起、有光澤、不易挑取的菌落。

2.4人工回歸感染

將分離純化的菌株XJ-I和XJ-II進行人工回歸感染實驗。結果表明，菌株XJ-I和XJ-II對葉爾羌高原鰍均具有致病作用（表1），而且實驗致死魚體死亡癥狀與自然發(fā)病魚體死亡癥狀基本相同。另外，從人工感染的病魚的肝胰臟中又分離到與實驗菌株形態(tài)及菌落特征一致的菌株。由此表明，該病是由菌株XJ-I和XJ-II感染引起的。見表1。

2.5病原菌鑒定

表1　細菌的形態(tài)、菌落特征和致死情況

對供試菌株進行革蘭染色、顯微鏡觀察及氧化發(fā)酵試驗，發(fā)現(xiàn)2株菌均為革蘭陰性桿菌，無莢膜，無芽孢。氧化酶、觸酶陽性，葡萄糖發(fā)酵型，經(jīng)全自動微生物分析系統(tǒng)VITEK-AMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡（GNI）鑒定，2株菌均屬于嗜水氣單胞菌群，菌株XJ-I和XJ-II與《伯杰氏細菌手冊》上描述的嗜水氣單胞菌模式菌株（Aeramonas hydrophila）的生理生化形狀基本一致（表2）。

2.6藥敏實驗

菌株對16種藥物的藥敏實驗結果見表3。在16種藥物中，菌株對新霉素、慶大霉素、奈啶酸、氟哌酸、恩諾沙星、磺胺對甲氧嘧啶6種藥物高度敏感。

3　討論

目前，尚無葉爾羌高原鰍“腸積水”病的相關資料報道。葉爾羌高原鰍生活在淡水中，體液滲透壓大于體外養(yǎng)殖水體滲透壓，為了平衡體內外滲透壓，體外水分子通過鰓、皮膚進入體內，而不是口腔吞咽的環(huán)境中的水分子進入腸道，所以，腸道內的積水應該來自葉爾羌高原鰍機體的組織液。筆者認為有如下幾個方面的原因引起：①養(yǎng)殖水溫升高，葉爾羌高原鰍機體免疫力下降，條件致病菌有可能乘機而入。該病的發(fā)病時間呈現(xiàn)明顯的季節(jié)性，通常集中在水溫25℃以上的夏、秋季發(fā)病，而在水溫較低的冬、春季節(jié)，幾乎無該病的發(fā)生。由于葉爾羌高原鰍是冷水性魚類，水溫可能是誘導該病發(fā)生比較重要的因素之一，可能是水溫升高造成葉爾羌高原鰍魚體新陳代謝紊亂，導致胃、腸的蠕動頻率和蠕動幅度降低，腸中的水分不能及時排出體外從而形成積水。由于消化道積水的存在，引起攝食量降低，所以，患病的葉爾羌高原鰍消化道中食物很少或沒有，這使病情更加惡化，免疫力下降。嗜水氣單胞菌是典型的條件致病菌，一般在魚體免疫力下降時才會感染發(fā)病。②養(yǎng)殖密度高，水中的溶解氧偏低，魚體機能下降。葉爾羌高原鰍是需氧較高的魚類，溶氧一般不能低于5 mg/L。據(jù)觀察，密度高的養(yǎng)殖池的“腸積水”病就較為嚴重，而密度低的魚池發(fā)病率較低。因此，養(yǎng)殖密度也可能是影響該病發(fā)生的重要因素之一。

表2　VITEK-AMS儀鑒定結果

表3　菌株XJ-I和XJ-II的藥敏實驗結果

關于葉爾羌高原鰍的“腸積水”病的致病機制有待進一步研究。目前國內外對葉爾羌高原鰍病原微生物的研究、可供參考的文獻資料甚少，根據(jù)筆者對葉爾羌高原鰍長期養(yǎng)殖的經(jīng)驗，總結出以下綜合防治措施，供參考。

高溫季節(jié)采取必要的降溫措施，在魚池上方蓋遮陽網(wǎng)。同時，在魚池種植空心菜、水葫蘆等水生植物，改善水質。

定期往魚池潑灑芽孢桿菌等微生物制劑，促進魚池的有機物分解。同時，在飼料中定期拌喂復合維生素、乳酸菌和酵母菌，提高高原鰍的體質，促進餌料的消化吸收。

國家自然科學基金項目（31360635）；新疆生產建設兵團基本科技計劃項目（2013BA005）；新疆生產建設兵團塔里木畜牧科技重點實驗室項目（201505）

（2015-11-17）