劉坦河南省洛陽市鄭州大學附屬洛陽中心醫(yī)院檢驗科，河南洛陽471009

酶聯(lián)免疫法在結核病檢測中重要價值

劉坦
河南省洛陽市鄭州大學附屬洛陽中心醫(yī)院檢驗科，河南洛陽471009

目的分析結核感染酶聯(lián)免疫法在結核病檢測中的重要價值。方法選取該院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似結核病患者作為對象進行研究，對其實施結核感染酶聯(lián)免疫法試驗與結核菌素試驗，記錄兩種檢測方法結果，并比較兩種方法特異度、敏感度、假陽性率、假陰性率、陽性似然比（LR+）及陰性似然比（LR-）。結果結核菌素試驗結果顯示陰性25例，陽性37例，結核分歧桿菌培養(yǎng)陰性24例，陽性38例；結核感染酶聯(lián)免疫法結果顯示陰性16例，陽性46例，結核分歧桿菌培養(yǎng)陰性13例，陽性49例；結核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結核菌素試驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；結核感染酶聯(lián)免疫法診斷陽性似然比（LR+）為11.94、陰性似然比（LR-）為0.99。結論結核感染酶聯(lián)免疫法檢測敏感性更高，且檢測即時性好，適用于結核病檢測，臨床價值較高。

結核感染酶聯(lián)免疫法；結核菌素試驗；結核病

［Abstract］Objective To analyze the important value of tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay in de‐tecting bacillary phthisis.M ethods 62 cases of patients suspected with bacillary phthisis admitted and treated in our hospi‐tal from March 2013 to May 2014 were selected as the research objectes,and were given tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay test and tubercalin test,the detection method results were recorded,and the specificity, sensitivity,false positive rate,false negative rate,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio were compared be‐tween the twomethods.Results The tubercalin test results showed that 25 cases were negative,37 cases were positive,24 negative cases and 38 positive caseswere cultivated bymycobacterium tuberculosis,the tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assaymethod results showed that 16 caseswere negative and 46 caseswere positive,and 13 negative cases and 49 positive cases were cultivated bymycobacterium tuberculosis,and the specificity and sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay were obviously better than those of tubercalin test,and the difference has statis‐tical significance,P《0.05,the diagnostic positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay were respectively 11.94 and 0.99.Conclusion The detection sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay is higher,and the detection instantaneity is better,and it is suitable for bacillary phthisis detection with higher clinical value.

［Key words］Tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay;Tubercalin test;Bacillary phthisis

盡管結核疫苗的應用及有效藥物的控制使其有一定緩解趨勢，但由于近年來人口大量流動，隨著人類免疫缺陷病毒及結核分歧桿菌耐藥菌株感染率上升，結核病死率逐漸升高[1]?？焖贉蚀_檢測為控制結核病的關鍵，因此高效、準確的檢測方法顯得極為重要，傳統(tǒng)結核病檢測方法效果均不佳[2]。目前，結核感染酶聯(lián)免疫法準確率較高、即時性較好，包涵性較強，結果受致病性非結核分歧桿菌干擾較小，同時不受接種卡介苗影響，檢測過程操作簡單，不受檢測人員影響[3-4]。該研究分析結核感染酶聯(lián)免疫法在結核病檢測中的重要價值，結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取該院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似結核病患者作為對象進行研究，其中男36例，女26例，年齡39~72歲，平均年齡（48.76±6.95）歲，臨床癥狀胸腔積液20例、肺部感染性病變21例，腹腔積液5例，發(fā)熱16例，病程6 d~4個月，平均病程（1.25±0.71）月。納入標準：①存在呼吸道癥狀：胸痛、咳血、咳痰、咳嗽、不同程度胸悶、呼吸困難等癥狀。②順應性較好。③影像學檢測胸部有陰影。

1.2檢驗方法

結核感染酶聯(lián)免疫法檢測：采集患者4mL外周靜脈血，予以肝素抗凝，分別裝入P、T、N 3種培養(yǎng)管內，P管是陽性對照培養(yǎng)管，其中添加非特異性刺激原植物雪球凝集素；T管是測試培養(yǎng)管，其中添加結合特異性抗原CFP-10、ESAT-6；N管是本地對照培養(yǎng)管。分裝前混勻3次以上，將其放置37℃恒溫箱內培養(yǎng)，24 h后取出放入離心機，5 000 r/min，離心血清，依據試劑盒說明書進行INF-γ雙抗體定量測試。依據刺激培養(yǎng)系統(tǒng)中升高的INF-γ的含量，判斷患者是否為結核感染。結核菌素試驗檢測：在患者前臂皮內注射純化蛋白衍生物0.1 mL（含20個結素國際單位PPD），72 h后檢測反應結果，統(tǒng)計硬結平均直徑。

1.3觀察指標

記錄兩種檢測方法結果，比較其特異度、敏感度、陽性似然比（LR+）及陰性似然比（LR-）。特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；假陰性率=假陰性例數/金標準陰性例數；假陽性率=假陽性例數/金標準陽性例數；陽性似然比=靈敏度/（1-特異度）；陰性似然比=（1-靈敏度）/特異度。結核病檢測以結核分歧桿菌培養(yǎng)結果為金標準，確診患者是否為結核病。

1.4判定方法

結核感染酶聯(lián)免疫法結果判定[5]，陽性為：P-N≥20 且T-N＜14；陰性為：P-N≥20且T-N≥14；結果不確定：P-N＜20且N＞400。結核菌素試驗結果判定，陽性為：5 mm≤硬結平均直徑＜15 mm；陰性為：硬結直徑在5 mm以下；強陽性為出現水泡雙圈或硬結直徑在15mm以上。

1.5統(tǒng)計方法

采用SPSS17.0軟件對數據分析，計數資料用χ2檢驗，n（%）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1結核感染酶聯(lián)免疫法檢測結果與結核菌素試驗檢測結果

結核菌素試驗結果顯示陰性25例，陽性37例，結核分歧桿菌培養(yǎng)陰性24例，陽性38例；結核感染酶聯(lián)免疫法結果顯示陰性16例，陽性46例，結核分歧桿菌培養(yǎng)陰性13例，陽性49例。診斷結果詳見表1、表2。

表1　結核菌素試驗檢測結果（n）

表2　結核感染酶聯(lián)免疫法檢測結果（n）

2.2比較結核感染酶聯(lián)免疫法檢測與結核菌素試驗檢測

結核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結核菌素試驗結果，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3　比較結核感染酶聯(lián)免疫法檢測與結核菌素試驗檢測

3　討論

結核病是易發(fā)于青年群體中慢性、緩發(fā)性傳染病，全年均可發(fā)病，16~36歲為結核病高發(fā)年齡段，結核病潛伏期一般為6周左右，多發(fā)生于肺部，骨骼、皮膚、腸、腹膜、腦膜、頸淋巴均可繼發(fā)感染，其傳染的主要方式為呼吸道傳播，傳染源為排菌的肺結核患者。近年來，結核病發(fā)病率日益增長[6]。臨床上結核病多呈慢性過程，但也有少數患者發(fā)病急促。其臨床主要表現為咳血、咳嗽、乏力、低熱等癥狀。健康人感染結核分枝桿菌后不一定發(fā)病，僅在機體免疫力降低時才發(fā)病，全世界每年結核病發(fā)病人數高達1000萬，大約每年有300萬人死于結核病，是病死率最高的單一傳染病，對結核病患者早期準確檢測對改善預后具有重要意義[7]。臨床上多應用結核菌素試驗檢測結核病，但其檢測準確度不高，本研究應用結核感染酶聯(lián)免疫法檢測結核病，檢測結果較可靠。

結核感染酶聯(lián)免疫法通過人體感染結核分歧桿菌后產生的特異性T淋巴細胞檢測，特異性T淋巴細胞易受抗原刺激從而產生INF-γ，與試驗微孔中INF-γ抗體反應，利用催化顯色劑顯示不同顏色，經過酶標儀對吸光度進行檢測，計算INF-γ含量，判斷其是否感染結核分歧桿菌[8]。因此，結核感染酶聯(lián)免疫法與其他檢測方法相比，優(yōu)勢在于檢測快速，無需隨訪判斷，1天內即可確認結果；接種卡介苗無法影響實驗結果；檢測均在體外進行，可反復檢測；檢測包涵性較強，可同時應用于肺外結核檢測；檢測結果不易受常見致病性非結核分歧桿菌影響；檢測過程試驗穩(wěn)定、操作簡便，結果客觀性強，不受醫(yī)務人員主觀因素影響，且結果易于判讀；檢測錯誤率低，使抗藥性降低，節(jié)約醫(yī)療成本。結核菌素試驗為通過對機體細胞免疫功能的檢測來判斷是否感染結核分歧桿菌的方法，實驗所用的純化蛋白衍生物為結核分歧桿菌培養(yǎng)上清液粗提物，包含200種以上的成分[9]。其根據IV型變態(tài)反應原理的皮膚試驗，有結核菌液體培養(yǎng)基中提取結核蛋白，注射于皮內。其機制為機體若感染過結核分歧桿菌，會產生對應致敏淋巴細胞，其可識別結核分歧桿菌或結核桿菌中的特異蛋白成分，再次遇到時，致敏淋巴細胞受刺激產生多種可溶性淋巴因子，進而增加血管通透性，巨噬細胞局部浸潤及聚集，60 h左右，局部產生紅腫硬結，顯示變態(tài)反應陽性。結核菌素試驗廣泛應用于結核病臨床檢測，但其結果顯示陽性時無法區(qū)分是卡介苗接種導致的免疫反應還是結核分歧桿菌自然感染。因此，近年來隨著卡介苗接種的廣泛推行，使結核菌素試驗檢測結核分歧桿菌感染受到一定程度的限制[10]。該研究結果顯示，結核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結核菌素試驗結果，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果充分表明結核感染酶聯(lián)免疫法檢測準確性更高，與此同時，結核感染酶聯(lián)免疫法檢測陽性似然比（LR+）為11.94、陰性似然比（LR-）為0.99，顯著優(yōu)于結核菌素試驗檢測，LR可充分說明檢測結果與檢測方法關系緊密，顯著表明結核感染酶聯(lián)免疫法檢測結核病檢測準確性更加可靠。

綜上所述，結核感染酶聯(lián)免疫法檢測敏感性更高，且檢測即時性好，適用于結核病檢測，盡管試劑盒成本較高，限制其廣泛推廣，但無法掩蓋結核感染酶聯(lián)免疫法檢測準確性較高的優(yōu)勢。

[1]閆國蕊，王勇鳴，楊萍，等.結核抗體聯(lián)合檢測對結核病診斷價值分析[J].中國防癆雜志，2013，35（4）：286-287.

[2]劉永蘭，康素海，楊玉華，等.老年人肺結核發(fā)病特點及防治[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2016，25（2）：64-67.

[3]鄭穎，徐冬梅，丁文杰，等.4種不同檢測方法對肺結核的診斷價值比較[J].中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥，2016，23（1）：65-66.

[4]梁瑞霞，李鑫.結核感染T細胞斑點試驗在結核診斷中的應用[J].中國實用醫(yī)刊，2015，42（8）：24-25.

[5]葉猛，徐貴，何月，等.T細胞酶聯(lián)免疫斑點試驗在結核病診斷中的應用[J].中外醫(yī)學研究，2015，13（30）：57-58.

[6]徐建輝，何燕武，陳海明.38kD-lgG和TSPOT-TB聯(lián)合檢測在結核病診斷中的應用[J].浙江臨床醫(yī)學，2015，25（8）：1268-1269.

[7]黃芳，黨麗云，孫惠平，等.三種分子生物學診斷技術對結核病診斷價值的比較[J].中華結核和呼吸雜志，2015，38 （9）：680-685.

[8]符艷，蔣正華.結核免疫斑點試驗與結核菌素試驗在活動性結核病診斷中的優(yōu)越性對比[J].中國醫(yī)刊，2015，21（8）：54-57.

[9]項薔薇，李海燕，林立，等.TB-IGRA在不同年齡兒童結核病診斷的敏感性和特異性分析[J].浙江臨床醫(yī)學，2016，26 （2）：274-275.

[10]周利君，盧水華.兒童結核病的特點與診治進展[J].醫(yī)藥導報，2016，26（3）：253-256.

Im portant Value of Euzymelinked Immunosorbent Assay in Detecting Bacillary Phthisis

LIU Tan
Department of Clinical Laboratory,Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Luoyang,Henan Province, 471009 China

R7

A

1672-5654（2016）06（a）-0108-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.16.108

劉坦（1983.12-），女，河南洛陽人，碩士，主管技師，研究方向：免疫學。

2016-03-10）