謝文燕　白愛(ài)紅

兩種精子處理方法對(duì)精子活力及正常形態(tài)率影響比較

謝文燕白愛(ài)紅

目的 比較上游法和密度梯度離心法對(duì)正常精液的處理效果。方法 回顧性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素來(lái)我院進(jìn)行IUI的臨床資料，比較上游法和密度梯度離心法后處理前后精子活力及正常形態(tài)率。結(jié)果 兩種方法處理后精子活力和正常形態(tài)精子率均較處理前升高，精子活力的提高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），與上游法相比，密度梯度離心法處理的精液具有更高的密度和正常形態(tài)精子比率（P＜0.05）。結(jié)論 對(duì)正常的精液，兩種處理方法均能得到合適的精子，但對(duì)于液化不好的，或者精子總數(shù)少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度離心法處理精液。

精液處理；上游法；密度梯度離心法

作者單位：漯河市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 漯河 462003

宮腔內(nèi)人工授精（intrauterine insemination，IUI）是將優(yōu)選過(guò)的精子注入女性宮腔內(nèi)，因其操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，是輔助生殖技術(shù)的優(yōu)先選擇項(xiàng)目［1-2］。精液處理是宮腔內(nèi)人工授精的關(guān)鍵步驟，其目的是沒(méi)有精漿，細(xì)胞碎片及病原微生物污染的精子懸液，回收足夠量的正常形態(tài)活動(dòng)力好的精子。目前常用的精液處理方法是上游法和密度梯度離心法。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，目前沒(méi)有公認(rèn)的最佳方法［3-5］。本研究回顧性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素來(lái)我院進(jìn)行IUI的臨床資料，共213周期，通過(guò)比較上游法和密度梯度離心法后精子活力及正常形態(tài)比率，以期尋找最佳的精液處理方法。

1　材料與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2014年1月～2015年12月于我院男方精液常規(guī)正常，因女方因素行IUI的患者，共213周期，96例。其中男方年齡23～39歲，不孕時(shí)間2～10年，原發(fā)性不孕58例，繼發(fā)性不孕38例。根據(jù)精液處理方法分為兩組，其中上游法處理103周期，密度梯度離心法處理110周期。上游組男性中原發(fā)不育31例，繼發(fā)不育15例，平均年齡（30.5±2.7）歲，平均不育年限（3±1.6）年，平均精液體積（3.5±1.9）ml；密度梯度離心組男性中原發(fā)不育27例，繼發(fā)不育23例，平均年齡（31.7±3.2）歲，平均不育年限（4±1.2）年，平均精液體積（4.4±2.1）ml；兩組男性一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2精液采集與處理

1.2.1精液采集 囑男方禁欲3～7 d，IUI當(dāng)日手淫法排精。精液標(biāo)本收集到一次性無(wú)毒取精杯中，37℃放置30 min。

1.2.2精液處理 待液化后分析精液常規(guī)參數(shù)，取10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態(tài)精子比率。

1.2.3上游法 在圓底試管里加入液化后的精液，上層小心加入等體積的培養(yǎng)液（QUINN’S Sperm Washing Medium），把試管45°放置于5% CO2，37℃培養(yǎng)箱中。半小時(shí)后吸取上清液，1 500轉(zhuǎn)/min離心10 min，棄上清。精子團(tuán)用培養(yǎng)液稀釋至0.6 ml備用。處理后精液進(jìn)行常規(guī)參數(shù)分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態(tài)精子比率。1.2.4密度梯度離心法 在離心管中加入2 ml 80%梯度液（PureCeption），再小心加入等體積40%梯度液（PureCeption），把液化后的精液小心加入液面上。1 800轉(zhuǎn)/min離心15 min，棄上清液，僅留最底層精子團(tuán)。用2 ml培養(yǎng)液懸浮，再次1 200轉(zhuǎn)/min離心5min。棄上清，精子團(tuán)用培養(yǎng)液稀釋至0.6 ml備用。

1.2.5處理后精液進(jìn)行常規(guī)參數(shù)分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態(tài)精子比率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

兩組處理前后精液參數(shù)結(jié)果：兩組方法處理前，精液密度、活力、正常形態(tài)率間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t精液密度=1.108 3，t活力=0.857 1，t正常形態(tài)率=0.993 7，P＞0.05）。兩組方法處理后，活力均較處理前明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t上游法=14.564 5，t密度梯度離心法= 12.707 3，P＜0.05）；正常形態(tài)精子比例有升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t上游法=3.564 6，t密度梯度離心法=6.786 1，P＜0.05）。兩種方法處理后的精子活力相似，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.082 7，P ＞0.05）。上游法處理后精液密度低于梯度離心法處理的精液密度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=5.287 6，P＜0.05）。上游法處理后正常形態(tài)精子比率低于密度梯度離心法，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.7840，P＞0.05），見(jiàn)表1。

3　討論

精液處理是人工授精取得成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。其目的是獲得足夠數(shù)量的活動(dòng)力好的精子，并使之同時(shí)獲能。把處理好的精子懸液注入女性宮腔內(nèi)，縮短精子在女性生殖道內(nèi)游動(dòng)距離，以期提高妊娠率。

表1　兩組處理前后精液參數(shù)比較

本文中兩種方法處理后的精子數(shù)量均能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，但上游法回收的精子數(shù)少于密度梯度離心法，這是因?yàn)樯嫌蔚幕厥章室蕾囉诰訄F(tuán)表面積和精子活動(dòng)力，由于細(xì)胞團(tuán)有多層細(xì)胞，有潛在運(yùn)動(dòng)能力的精子可能處在細(xì)胞團(tuán)內(nèi)部，不能達(dá)到與培養(yǎng)液接觸的界面［6］。采用上游法處理精液能達(dá)到去除精漿及精漿內(nèi)抑制受精的物質(zhì)，如前列腺素、異性蛋白、抗精子抗體及各種非精子細(xì)胞成分［7］。Erel等［8］認(rèn)為，異常精子經(jīng)密度梯度離心法處理后，得到精子的頂體反應(yīng)率、低滲腫脹實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率和核成熟的精子比率均高于上游法，密度梯度離心法處理精液后精子回收率較高。但密度梯度離心法多次的離心可能會(huì)對(duì)精子微觀結(jié)構(gòu)造成破壞。與上游法相比，密度梯度離心在增加正常精子數(shù)量方面顯出優(yōu)勢(shì)［9］，這與我們的結(jié)果相似。

對(duì)正常的精液，兩種方法處理均能獲得用于人工授精的精子。但對(duì)于液化不好的，或者精子總數(shù)少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度離心法處理精液，以達(dá)到獲取足夠數(shù)量和活力精子的目的。

［1］張麗珠. 臨床生殖內(nèi)分泌與不育癥［M］. 北京：科學(xué)技術(shù)出版社，2001：5.

［2］譚玉梅，宋革，祝曉麗，等. 密度梯度離心聯(lián)合上游法的精液處理在供精體外受精胚胎移植中的應(yīng)用［J］. 中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2015，12（22）：56-58.

［3］郭永成，邢光衛(wèi)，夏冰，等. 彈性髓內(nèi)釘與外固定架修復(fù)兒童股骨干骨折的Meta分析［J］. 中國(guó)組織工程研究，2015，19（31）：5072-5078.

［4］黃茜，丘映，許常龍，等. 精子優(yōu)選方法對(duì)人工授精治療結(jié)局的影響［J］. 中國(guó)性科學(xué)，2013，22（6）：35-37.

［5］許觀照，張麗紅，王時(shí)燦，等. 精子凍存技術(shù)及上游法精子處理技術(shù)對(duì)精子DNA完整性的影響［J］. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2013，22（12）：945-950.

［6］張揚(yáng)，皮潔. 輔助生殖技術(shù)中的精液處理［J］. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2008，18（8）：126-127.

［7］王自然，何全中. 精子的體外優(yōu)化計(jì)數(shù)［J］. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，19（6）：513-516.

［8］Erel CT，Senturk LM，Irez T，et al. Sperm-preparatio techniques for men with normal and abnormal semen analysis A comparison［J］. J Repord Med.，2000，45（11）：917-922.

［9］Prakash P，Leykin L，Chen Z，et al. Preparation by differential gradient centrifugation is better than swim-up in selecting sperm with normal［J］. Fertil Steril，1998，69（4）：722-726.

Comparison the Effect of Two Kinds of Processing Methods on Sperm Motility and Normal Morphology Sperm Rate

XIE Wenyan BAI Aihong Department of Obstetrics and Gynecology， Luohe Central Hospital， Luohe He’nan 462003， China

Objective To compare the treatment effect of normal sperm by Swim-up and density gradient centrifugation. Methods From January 2014 to December 2015， the clinical data of IUI because of female factors and male sperm normal were retrospectively analyzed to compare the effect of swim-up and density gradient centrifugation on sperm motility and normal morphology sperm rate. Results Sperm motility and normal morphology sperm rate were increased after two kinds of treatment， there was a significant difference in sperm motility （P＜0.05）， after density gradient centrifugation， density and normal morphology sperm rate were significantly higher than after Swim-up （P＜0.05）. Conclusion For normal sperm， two kinds of methods both can get a proper sperm，but for bad liquefied， less total sperm number and patients with normal sperm but low sperm percentage， density gradient centrifugation may be a better way.

Sperm preparation， Swim-up， Density gradient centrifugation

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.19.086

R698

A

1674-9308（2016）19-0135-03