陳文生　馮　燕　郝忠臣　侯傳偉　王振奇　趙　雷　孫慶春吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院介入科，吉林吉林　132022

肝動(dòng)脈栓塞聯(lián)合T細(xì)胞克隆技術(shù)治療結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移臨床研究

陳文生馮燕郝忠臣侯傳偉王振奇趙雷孫慶春
吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院介入科，吉林吉林132022

目的探討肝動(dòng)脈栓塞（TACE）聯(lián)合T細(xì)胞克隆技術(shù)治療結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的臨床療效。方法選擇2010年1月～2014年12月結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者64例的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，33例患者給予肝動(dòng)脈栓塞治療為對照組，31例患者在此基礎(chǔ)上給予T細(xì)胞克隆技術(shù)治療為研究組。比較兩組的臨床療效及治療后外周血T細(xì)胞亞群。結(jié)果研究組總有效率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究組治療后總T細(xì)胞亞群、CD4+T細(xì)胞亞群、CD8+T細(xì)胞亞群顯著高于對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論肝動(dòng)脈栓塞聯(lián)合T細(xì)胞克隆技術(shù)治療結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移能夠改善患者的預(yù)后。

肝動(dòng)脈栓塞；T細(xì)胞克隆技術(shù)；結(jié)腸癌；肝轉(zhuǎn)移

［Abstract］Objective To discuss clinicalefficacy of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of livermetastasis from colon cancer.M ethods Clinical data of 64 cases with liver metastasis from colon cancer from Jan 2010 to Dec 2014 were respectively analyzed.33 cases of control group were treated with hepatic arterial embolization，and 31 cases of study group were treated with hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology.Clinical efficacy and peripheral blood T cell subsets after treatment of two groups were compared. Results Total effective rate of study group was higher than control group（P＜0.05）.After treatment，the total T cell subsets CD4+T cell subsets and CD8+T cell subsets in study group were higher than control group（P＜0.01）.Conclusion Hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer can improve the prognosis.

［Key words］Hepatic artery embolization；T cell cloning technology；Colon cancer；Livermetastasis

結(jié)腸癌是臨床常見的惡性腫瘤，一旦發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，具有較高的死亡率，是導(dǎo)致治療失敗的主要原因。結(jié)腸癌無肝臟轉(zhuǎn)移的患者5年的生存率較有肝臟轉(zhuǎn)移的患者要高。提高發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者的生存率是治療的關(guān)鍵。肝動(dòng)脈介入治療是治療結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移的主要方法。T細(xì)胞克隆技術(shù)，能夠促進(jìn)增殖，提高殺瘤活性，并且殺瘤譜廣［1，2］。自體細(xì)胞免疫治療成為治療晚期結(jié)腸癌的重要方法，并且具有毒性低的優(yōu)點(diǎn)［3，4］。本文采用肝動(dòng)脈栓塞聯(lián)合T細(xì)胞克隆技術(shù)治療結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移取得了較好的效果?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2010年1月～2014年12月在我院治療的結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者64例的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)腸癌腺癌，肝轉(zhuǎn)移診斷明確，KPS評分70分及以上，臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他系統(tǒng)內(nèi)科疾病的患者，腎功能、心功能異常的患者。其中男38例，女26例，年齡41～77歲，平均（48.4±9.7）歲。根據(jù)患者的治療方法分為對照組和研究組。對照組33例，其中男18例，女15例，平均年齡（47.8±8.9）歲；研究組31例，其中男20例，女11例，平均年齡（48.9±9.3）歲。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會同意。

1.2治療方法

1.2.1肝動(dòng)脈栓塞所有患者均給予TACE治療，應(yīng)用Seldinger技術(shù)，局麻下行股動(dòng)脈穿刺，插入導(dǎo)管，造影，觀察腫瘤組織血供，明確主要供血?jiǎng)用}，插入導(dǎo)管至供血?jiǎng)用}內(nèi)，栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}注入化療藥物，常用藥物奧沙利鉑、亞葉酸鈣、替加氟、絲裂霉素等。結(jié)束后拔出導(dǎo)管，局部加壓包扎，制動(dòng)24 h。常規(guī)心電監(jiān)護(hù)，觀察生命體征，觀察是否有病情變化、保肝等治療。

1.2.2T細(xì)胞克隆技術(shù)研究組在TACE術(shù)后大約1周行T細(xì)胞克隆生物治療?；颊咴谛g(shù)前采集外周血進(jìn)行T細(xì)胞培養(yǎng)。每次TACE+T細(xì)胞克隆序貫治療間隔時(shí)間為4～6周，隨訪6個(gè)月～1年，每個(gè)治療周期后評價(jià)病情。經(jīng)病理、影像等相關(guān)檢查證實(shí)的結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者，行規(guī)律肝動(dòng)脈化療栓塞治療，并且控制穩(wěn)定后，所有患者治療前采靜脈血進(jìn)行免疫評估，并行免疫功能重建，再根據(jù)不同免疫情況對T細(xì)胞行培養(yǎng)增殖，回輸入患者體內(nèi)，連續(xù)3個(gè)療程。具體過程如下：（1）外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離：采集患者靜脈血80mL，用聚蔗糖400（Lympholyte-H，Cedarlane產(chǎn)品）分離單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs），經(jīng)生理鹽水洗滌細(xì)胞3次后備用。（2）DC細(xì)胞的分離及體外培養(yǎng)：PBMCs懸浮于DC培養(yǎng)基后，在培養(yǎng)皿內(nèi)37℃貼壁培養(yǎng)3 h，懸浮細(xì)胞用于T細(xì)胞培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于DC培養(yǎng)基中并添加GM-CSF 1000 U/mL和IL-4 1000 U/mL，培養(yǎng)第4天添加相應(yīng)腫瘤抗原提取物，培養(yǎng)第5天添加TNF-α1 ng/mL，培養(yǎng)第7天后對DC細(xì)胞表型（CD80/CD83/CD86/HLADR）進(jìn)行檢測分析，微生物及內(nèi)毒素檢驗(yàn)合格后收集DC，按方案回輸至患者皮下。（3）T細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增：將貼壁處理后的懸浮細(xì)胞用T細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮并調(diào)細(xì)胞密度為2×106/mL，添加IL-2 1000 U/mL、CD3McAb 50 ng/mL。此后每2天計(jì)數(shù)細(xì)胞并適當(dāng)補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。分別在培養(yǎng)的第10天、第12天和第14天進(jìn)行細(xì)胞表型、微生物及內(nèi)毒素檢測，各項(xiàng)指標(biāo)符合要求后收集T細(xì)胞、洗滌，按方案回輸至患者靜脈內(nèi)。主要材料及儀器：日本泰爾茂公司提供的RH導(dǎo)管及1.5 m超滑導(dǎo)絲，北京醫(yī)療設(shè)備廠提供的電熱恒溫水浴鍋，日本奧林巴斯（Olympus）公司提供的BX41顯微鏡，上海安亭科學(xué)儀器廠提供的LXJ-B離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠提供的TGL-16B高速離心機(jī)，日本三洋電器集團(tuán)提供的MC0-15AC二氧化碳培養(yǎng)箱，美國Thermo公司提供的1300 series B2 100%外排生物安全柜，成都金鳳液氮罐廠提供的YDS-35-80液氮罐，上海之信儀器有限公司提供的LX200手掌型離心機(jī)，美國奧林巴斯Olympus公司提供的CKX31顯微鏡，丹麥NUNC公司提供的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，美國Axygen公司提供的微量加樣槍頭，美國Eppendorf公司提供的離心管，美國ABI公司提供的ABI3730DNA分析儀及GeneMapper軟件。

1.3評價(jià)方法

臨床療效判斷［5］：包括完全緩解（CR）：所有目標(biāo)病灶消失；部分緩解（PR）：基線病灶長徑總和縮小超過30%；無變化（SD）：基線病灶長徑總和有縮小但未達(dá)PR或有增加但未達(dá)PD；進(jìn)展（PD）：基線病灶長徑總和增加超過20%或出現(xiàn)新病灶。完全緩解+部分緩解=總有效。采用流式細(xì)胞術(shù)分析T細(xì)胞亞群評估患者免疫功能情況，所有熒光標(biāo)記的流式細(xì)胞抗體均購自美國BD公司，細(xì)胞表面標(biāo)記分析和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記分析按說明書操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用［n（%）］表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組臨床療效比較

見表1。與對照組比較，研究組總有效率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1　兩組臨床療效比較［n（%）］

2.2兩組患者治療后外周血T細(xì)胞亞群變化

見表2。與對照組比較，研究組治療后總T細(xì)胞亞群、CD4+T細(xì)胞亞群、CD8+T細(xì)胞亞群高于對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表2　兩組患者治療后外周血T細(xì)胞亞群變化［n（%）］

3　討論

結(jié)腸癌容易發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移，部分患者在確診時(shí)已經(jīng)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。發(fā)生肝轉(zhuǎn)移后雖然部分患者可通過肝切除術(shù)獲得一定的5年生存率，但是手術(shù)適應(yīng)證要求較嚴(yán)格，并且術(shù)后容易發(fā)生復(fù)發(fā)。手術(shù)并不能根本上解決結(jié)腸癌。保守治療包括全身化療以及其他的姑息性治療，但毒副作用較大，并且效果較差，影響患者的生存質(zhì)量。經(jīng)肝動(dòng)脈介入化療能夠直接將化療藥物送至病變處，具有更高的針對性，效果優(yōu)于全身化療，并且全身毒副作用較小，兩者聯(lián)合，效果優(yōu)于單純使用全身化療。生物治療已經(jīng)成為惡性腫瘤治療的第四種模式。自體T細(xì)胞過繼免疫治療作為生物治療中最主要的方法之一已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床的治療，該治療符合生理低毒高效的特點(diǎn)，有著巨大的治療潛力和生命力，是未來腫瘤治療的發(fā)展方向。雖然近年自體T細(xì)胞過繼免疫治療技術(shù)取得了長足的發(fā)展，但由于缺乏客觀評價(jià)方法，導(dǎo)致體外培養(yǎng)的細(xì)胞不能被有效地質(zhì)控監(jiān)測，回輸至患者體內(nèi)后其療效又不能被準(zhǔn)確和及時(shí)地評價(jià)，而阻礙了這項(xiàng)新技術(shù)規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)施。過繼性免疫治療是腫瘤生物治療的方法之一。

研究證實(shí)，腫瘤的發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體的免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的比例常發(fā)生變化［6-8］。而且在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中也不例外。本研究中經(jīng)自體T細(xì)胞過繼治療后，24例總T淋巴細(xì)胞比例升高，CD4+T淋巴細(xì)胞比例獲顯著改善者22例，CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比例升高者21例。這些結(jié)果說明自體T細(xì)胞過繼治療確實(shí)能改善患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞比例，也提示該療法可以不同程度地提高患者抗腫瘤免疫應(yīng)答能力。因?yàn)镃D8+T細(xì)胞是殺傷腫瘤細(xì)胞的主力，CD4+T細(xì)胞對于維持長期免疫記憶十分重要［9，10］。還有其他一些淋巴細(xì)胞亞群的變化也可能作為評價(jià)免疫功能指導(dǎo)臨床工作的指標(biāo)，如檢測輔助性純真、記憶T細(xì)胞亞群，殺傷性純真、記憶T細(xì)胞亞群可以了解機(jī)體內(nèi)免疫應(yīng)答基礎(chǔ)及活躍程度［11-13］。檢測免疫效應(yīng)T細(xì)胞亞群，如CD4+/CD8+/CD45RA+/CD45RO+/ CD62L+，可以了解腫瘤的負(fù)荷情況和抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答的活躍程度［14，15］。另外，檢測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群（CD4+/CD25+/Foxp3+及CD8+/CD28+），可以了解體內(nèi)抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答受到抑制的情況，這些T淋巴細(xì)胞亞群有待于今后臨床應(yīng)用的實(shí)踐。

綜上所述，肝動(dòng)脈栓塞聯(lián)合T細(xì)胞克隆治療結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移能夠改善患者的預(yù)后，改善患者的免疫狀態(tài)，有利于腫瘤細(xì)胞的清除。

［1］張志強(qiáng)，王梓瑛，鄭爽，等.DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合替吉奧化療治療老年晚期胃癌的療效觀察［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10（3）：144-145.

［2］王蘭榮，趙丹，曹旸，等.DC-CIK聯(lián)合化療加靶向治療在晚期結(jié)腸癌中的應(yīng)用觀察［J］.國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2016，22（1）：42-44.

［3］鄧新娜，吳海江，高飛，等.DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合中藥治療晚期非小細(xì)胞肺癌的研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，24（36）：4000-4002.

［4］林曉純，廖劍鋒，林純旋，等.DC-CIK或CIK聯(lián)合導(dǎo)管肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療原發(fā)性肝癌的Meta分析［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2015，9（24）：118-122.

［5］孫燕，石遠(yuǎn)凱.臨床腫瘤內(nèi)科手冊［M］.第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：7.

［6］秦亞光，程傳耀，王亞秋，等.DC-CIK療法聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌［J］.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2015，28（6）：497-500.

［7］曲雅靜，李廣欣，徐麗君，等.DC-CIK聯(lián)合化療治療中晚期非小細(xì)胞肺癌臨床效果評價(jià)［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2015，27（11）：72-76.

［8］楊林珠，洪志鵬，余慶鶴，等.DCs-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效觀察［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，20（31）：6146-6149.

［9］黃麗紅，舒暢.介入療法聯(lián)合DC-CIK生物療法治療中心型非小細(xì)胞肺癌的臨床效果觀察［J］.中國醫(yī)藥指南，2015，13（30）：49.

［10］成建初，徐懿.自體DC-CIK細(xì)胞免疫療法治療非小細(xì)胞肺癌的效果［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，12（32）：94-96.

［11］李金瑞，鐘鑫平.射頻消融聯(lián)合DC-CIK治療中晚期肝細(xì)胞癌的療效評價(jià)［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（19）：2830-2833.

［12］趙偉鋒，陳雪姣，溫一陽，等.DC-CIK聯(lián)合化療加靶向治療對晚期結(jié)腸癌效果探討［J］.中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，7（26）：93-95.

［13］鄭培浩，劉毅，岑堅(jiān)，等.DC-CIK免疫治療對急性白血病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的影響［J］.山東醫(yī)藥，2015，55（38）：72-74.

［14］高正興，童朝暉，張征，等.化療聯(lián)合DC-CIK治療多發(fā)性骨髓瘤的療效及其對VEGF、IL-2及TNF-α的影響［J］.湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2015，12（3）：47-49.

［15］呂然，胡榮鵬，馮慶亮，等.自體DC-CIK細(xì)胞回輸在MWA聯(lián)合化療治療局部晚期腺細(xì)胞肺癌中的作用［J］.實(shí)用腫瘤雜志，2015，30（4）：359-363.

Clinical study of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer

CHENWensheng FENG Yan HAO Zhongchen HOU Chuanwei WAGN Zhenqi ZHAO Lei SUN Qingchun
Interventional Section，the General Hospital of Jilin Chemical Group Company，Jilin 132022，China

R735.35

B

1673-9701（2016）15-0009-03

吉林省衛(wèi)生計(jì)生委科研計(jì)劃（2013Z096）

2016-03-25）