梁士兵　王育純　 孫　娜　張穎穎　王花欣

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【實(shí)驗(yàn)研究】

中草藥蘆薈、苦參對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌研究*

梁士兵1王育純1孫娜1張穎穎2王花欣3

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院本科生2012級(jí)(濟(jì)南 250355)；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室(濟(jì)南 250355)；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)教研室(濟(jì)南 250355)

摘要：目的測(cè)定蘆薈、苦參2種中草藥對(duì)大腸埃希菌等5種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌效果。方法采用MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯遞倍稀釋法,分別測(cè)定蘆薈、苦參對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)。結(jié)果二者對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌表現(xiàn)出不同抑菌作用，但蘆薈的抑菌效果較好，其對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、MRSA有較強(qiáng)抑菌作用，MIC均為15.625μg/ml。結(jié)論蘆薈和苦參對(duì)5中常見(jiàn)細(xì)菌均產(chǎn)生抑制效果，蘆薈的抑菌效果更加顯著，可為臨床治療由這5種細(xì)菌引起的感染提供一定參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：蘆薈；苦參；中草藥；最小抑菌濃度

當(dāng)前抗生素被廣泛濫用，菌株耐藥性、食品中抗生素殘留等問(wèn)題日趨嚴(yán)重[1]。中草藥作為我國(guó)幾千年來(lái)防治疾病的重要武器，具有毒副作用小、不易產(chǎn)生抗藥性、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)點(diǎn)，在現(xiàn)代預(yù)防和控制細(xì)菌性感染疾病方面發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)選用蘆薈、苦參2味中草藥，制取80%乙醇提取液，進(jìn)行對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、MRSA、肺炎克雷伯菌5種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌研究，得出最小抑菌濃度(MIC)，為中草藥抗菌劑的研制、臨床應(yīng)用以及食品防腐等領(lǐng)域提供參考依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1中藥材料蘆薈、苦參購(gòu)自北京同仁堂藥店。

1.2供試菌株金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003，大腸埃希菌CMCC(B)44102，銅綠假單胞菌CMCC(B)10104，MRSA(金黃色葡萄球菌耐甲氧西林株) ，肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117，山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.3MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯購(gòu)自北京奧博星生物公司。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1待測(cè)試劑制備將蘆薈、苦參用80%乙醇經(jīng)浸泡、回流、抽濾和旋蒸后得到待測(cè)試劑，濃度分別為250μg/ml、335μg/ml，并經(jīng)0.22微米無(wú)菌a過(guò)濾器過(guò)濾后備用。

2.2MIC測(cè)定

2.2.1細(xì)菌培養(yǎng)基的制備MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯分裝后于121℃高壓滅菌20min。

2.2.2實(shí)驗(yàn)菌液的制備以比濁管調(diào)整菌液濃度為1×106CFU/ml。

2.2.3微量稀釋法抑菌實(shí)驗(yàn)參照NCCLS標(biāo)準(zhǔn)采用微量稀釋法進(jìn)行。在96孔板中每孔加入培養(yǎng)基100 μl，然后在第1行中加入100 μl藥液，從第1行中吸取100 μl混合液加入第2行，依次類推至第6行，得到2、4、8、16、32、64倍稀釋藥物梯度。第7行每孔加入雙抗10 μl為陽(yáng)性對(duì)照，第8行直接加入菌液做為陰性對(duì)照。同時(shí)設(shè)立藥物稀釋梯度和培養(yǎng)基空白做為對(duì)照。每個(gè)藥物重復(fù)兩次。分別加入各菌液10 μl，37℃培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

MIC測(cè)定陰性對(duì)照中細(xì)菌生長(zhǎng)良好，陽(yáng)性對(duì)照孔無(wú)明顯生長(zhǎng)，培養(yǎng)基空白無(wú)污染。蘆薈、苦參最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　蘆薈、苦參對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌的MIC　(μg/ml)

4　討論

金黃色葡萄球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性球菌，是人類化膿性感染中最常見(jiàn)病原體，如臨床常見(jiàn)的傷口化膿、毛囊炎、癰癤、甲溝炎、中耳炎等都可由金黃色葡萄球菌感染所引起；大腸埃希菌是人類和動(dòng)物腸道中最重要的一種條件致病菌，以引起泌尿系統(tǒng)感染和化膿性炎癥最常見(jiàn)，如臨床常見(jiàn)尿道炎、膀胱炎、闌尾炎以及術(shù)后傷口感染等；綠膿假單胞菌為革蘭陰性菌，致病性多為院內(nèi)感染，如手術(shù)傷口感染、燒傷創(chuàng)面感染等；MRSA對(duì)多種抗生素耐藥，致病力強(qiáng)且治療效果差，為引起醫(yī)院感染的主要病原菌之一；肺炎克雷伯菌為一種條件致病菌，可引起肺炎、支氣管炎、泌尿道感染等臨床常見(jiàn)疾病[2，3]。

目前，無(wú)論國(guó)內(nèi)外，對(duì)于這些感染類疾病大多數(shù)首選抗生素治療，但近年來(lái)，由于抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥菌株逐年增多[4]，藥物不良反應(yīng)不斷增加，而且開(kāi)發(fā)費(fèi)用昂貴。因此,從中藥材中尋找開(kāi)發(fā)純天然抗菌素是一條可行途徑[5]。古文獻(xiàn)載蘆薈有治療熱結(jié)便秘、癬瘡等作用，現(xiàn)代研究，蘆薈含大黃素苷、對(duì)香豆酸、多種氨基酸等成分，其提取物可抑制S180肉瘤和艾氏腹水癌的生長(zhǎng)，水浸劑對(duì)金黃色葡萄球菌、多種皮膚真菌和人型結(jié)核桿菌有抑制作用，而蘆薈醇提液對(duì)本實(shí)驗(yàn)中5種細(xì)菌的相關(guān)研究較少?？鄥橐环N清熱藥，古文獻(xiàn)載其具有治療濕熱痢疾、濕疹濕瘡、陰腫陰癢、淋痛等作用，現(xiàn)代研究，苦參含苦參堿、槐果堿、槐胺堿、苦參酮等成分，其水煎劑對(duì)痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌等有明顯抑制，而苦參醇提液對(duì)本實(shí)驗(yàn)中5種細(xì)菌的相關(guān)研究較少。 同時(shí)，蘆薈、苦參作為一種純天然植物藥，數(shù)量充足，不良作用小，價(jià)格低廉，用蘆薈、苦參作為開(kāi)發(fā)抑菌新產(chǎn)品的原材可大大降低成本，因而具有廣闊開(kāi)發(fā)前景。

本實(shí)驗(yàn)以蘆薈、苦參兩種中藥的80%醇提液作為樣本，對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌進(jìn)行抑菌研究。結(jié)果表明，2種中藥對(duì)5種細(xì)菌均有抑制效果，但蘆薈的抑菌效果更加顯著，尤其對(duì)金黃色葡萄球菌、MRSA、肺炎克雷伯菌表現(xiàn)出強(qiáng)烈抑菌效果，其最小抑菌濃度均為15.625μg/ml。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果可為蘆薈、苦參作為抗金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌等5種細(xì)菌的新藥開(kāi)發(fā)、食品防腐以及臨床應(yīng)用等提供一定參考依據(jù)。但歷代醫(yī)家十分重視中藥的配伍使用，以此來(lái)增強(qiáng)療效。而本實(shí)驗(yàn)只是研究了單味藥的抑菌效果，因而對(duì)于蘆薈、苦參的混合提取液以及二者與其它中藥的混合提取液的抑菌效果如何，尚需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]王瑞君.幾種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌體外抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25(9)：1104-1106.

[2]章正育.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)[M] .上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2009.

[3]左國(guó)營(yíng)，王根春，徐貴麗，等.30種中草藥提取物體外抗MRSA的篩選研究[J] .中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23(4)：293-295.

[4]鐘有添，黃真，張瑞其，等.楓香樹(shù)葉對(duì)金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌抑菌作用的觀察[J]. 贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,27(2)：169-171.

[5]李巧如，任健康，劉宗智，等.18種中草藥抗菌作用的篩選[J].陜西中醫(yī)，2002，23(6)：555.

*基金項(xiàng)目：山東中醫(yī)藥大學(xué)SRT項(xiàng)目(No.2014263)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.04.021

文章編號(hào)：1003-8914(2016)-04-0498-02

收稿日期：(本文校對(duì)：劉言言2015-09-09)

Study on the Chinese Herbal Medicine Aloe and Lightyellow Sophora Root for Extracorporeal Inhibition of 5 Common Bacteria

LIANG Shibing1WANG Yuchun1SUN Na1ZHANG Yingying2WANG Huaxin3

(1.Grade 2012 Undergraduate, College of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong, Ji’nan 250355, China;2.Teaching and Research Section of Microbiology, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Shandong, Ji’nan 250355, China;3.Teaching and Research Section of Parasitology,Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Shandong, Ji’nan 250355, China)

Abstract：ObjectiveTo mensurate the extracorporeal inhibition effect of two Chinese herbs aloes and lightyellow sophora root for Bacillus coli and the other four kinds of common bacterium. MethodsUsing MH (B) dilution methods that dilute the consistence of nutritive gravy by decreasing times to mensurate the minimal inhibitory concentration (MIC) that aloes and lightyellow sophora root engender the foundation of inhibition for the five common bacteria. ResultsBoth of them had the inhibiting foundation for the given common bacterium, but the degree of inhibiting bacterium was different. The inhibition of aloes was better than lightyellow sophora root for the given five common bacteria, especially for Staphylococcus aureus Rosen Bach, K.peneuminiae, MRSA, and it showed strong inhibiting foundation when the MIC is 15.625μg/ml. ConclusionComparing the inhibiting foundation of aloes and lightyellow sophora root, aloes has significant inhibition for the given five common bacteria, and can provide a reference for the clinical treatment of infection caused by these 5 kinds of bacteria.

Key words：Aloe; Lightyellow sophora root; Chinese herbal medicine; Minimal inhibitory concentration