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Wnt2、dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達和評價

?；?br/>新汶礦業(yè)集團孫村煤礦醫(yī)院檢驗科，山東新泰271219

目的 探究Wnt2、dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達及意義。方法 整群收集2014年12月—2015年12月該院確診的食道鱗癌手術切除標本131例和131例健康食管組織標本，檢測Wnt2、Dvl，分析與臨床病理特征關系。結果在食管鱗癌組織中Wnt2及Dvl陽性率分別為89.3%和78.2%，正常食管組織中Wnt2及Dvl的陽性率分別為11.9%、8.6%，P＜0.05。且有淋巴結轉移組織陽性率較高。結論Wnt2、Dvl蛋白的表達異?？赡芘c食管鱗癌的發(fā)生及發(fā)展密切相關。

Wnt2蛋白；Dvl蛋白；食管鱗癌

［Abstract］Objective To investigate the Wnt2，DVL protein in esophageal squamous cell carcinoma tissue expression and significance.Methods In December 2014 to December 2015 diagnosed esophageal carcinoma resection specimens of 131 cases and 131 healthy esophageal tissue specimens，detection of Wnt2 and DVL，analysis and clinical pathological features. Results In esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）positive rate of Wnt2 and DVL were 89.3%and 78.2%，the positive rate of normal esophageal tissues Wnt2 and DVL were 11.9%8.6%P＜0.05.And lymph node metastasis tissue the positive rate is high.Conclusion Wnt2，the abnormal expression of Dvl protein may be closely related to the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma.

［Key words］Dvl protein；Wnt2 protein；Esophageal squamous cell carcinoma

食道癌是常見的消化道惡性腫瘤，在我國十大鱗癌占90%以上。目前食管癌的有效治療手段主要依賴早期手術，但由于食道癌患者在早期無明顯的特異癥狀，故80%患者發(fā)現并就診時已為晚期［1］。因此明確特異的分子指標用于食管癌的人群篩查，對早期診斷及治療都有重大意義［2］。該研究采用免疫組織化法檢測了2014年12月—2015年12月該院收治的131例食道癌患者的食道鱗癌組織及健康食管組織中的Wnt2、Dvl蛋白的表達，探究其對食道癌發(fā)生的影響，現報道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

整群收集2014年12月—2015年12月該院收治的診斷明確為食道鱗癌手術切除標本131例，所有患者均未經放化療。該次研究均經過所有患者或者其家屬知情并同意，并由該院倫理委員會批準實施。其中男79例，女52例，年齡27～79（57.6±11.29）歲。按照2001年國際抗癌聯(lián)合會修訂的TNM分期標準［3］，Ⅰ+Ⅱ期76例，Ⅲ+Ⅳ期55例。其中淋巴結轉移76例。同時收集131例健康食管組織作為對照組。兩組患者在年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 試劑與方法

1.2.1 主要試劑山羊抗人Wnt2及Dvl單克隆抗體由美國Santa Cruz公司提供，通用二抗購自上海魯汶生物科技有限公司。

1.2.2 實驗方法①1.1中獲得的食道鱗癌手術切除標本放置于隔水式60℃恒溫烘烤12 h；②脫蠟與水化：組織標本在二甲苯中浸泡10 min 2次后，依次用無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇分別浸泡5 min；③PBS洗3次，每次5 min，將組織標本置于過氧化氫的甲醇溶液（90%甲醇），室溫靜置10 min，消除內源性過氧化物酶的影響；④PBS液洗3次各5 min后滴加山羊血清封閉液，室溫30 min后傾多余液體；⑤加入適量一抗：Wnt及Dvl，在4℃下過夜，次日在37℃復溫45 min后，PBS洗3次各5 min；⑥加入相應的二抗后靜置30 min，PBS洗3次各5 min；⑦DAB顯色，并在顯微鏡下觀察染色程度，PBS沖洗10 min；⑧蘇木精復燃2 min后用不同濃度酒精脫水后沖洗10 min；⑨二甲苯透明、中性樹膠封片后，光鏡下觀察；⑩PBS取代一抗制備的陰性對照

1.3 統(tǒng)計方法

數據統(tǒng)計采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件來完成，計數資料以［n（%）］表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1 Wnt2及Dvl蛋白在食管鱗癌組織及正常食管組織中的表達

在食管鱗癌組織中Wnt2及Dvl的陽性率分別高于正常食管組織中表達，P＜0.05。見表1。

表1　Wnt2及Dvl蛋白在食管鱗癌組織及正常食管組織中的表達［n（%）］

2.2 食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達與臨床病理特征的關系

Wnt2、Dvl的表達在性別、年齡上不存在顯著性差異（P＞0.05）；在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl陽性表達率明顯高于Ⅰ+Ⅱ表達率，P＜0.05。在有、無淋巴結轉移的病例中Wnt蛋白陽性表達率差異具有統(tǒng)計學意義。

表2　食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達與臨床病理特征的關系

3　討論

腫瘤的產生與發(fā)展過程極其復雜，涉及多種因素及基因，需要經過多個階段才能最終形成。隨著科學技術的發(fā)展，癌基因組學及信號通路學等學科的不斷發(fā)展，人們對細胞癌變的機制認識日趨豐富［4］。目前在人類染色體中已發(fā)現19種Wnt基因家族成員，其中Wnt2與食管鱗癌的發(fā)生密切相關。當Wnt2信號轉導通路被異常激活時，Wnt2蛋白在細胞膜上與跨膜受體結合，結合物可以刺激細胞，激活其中的Dvl。Dvl可以抑制β-catenin與腳手架蛋白、蛋白激酶GSK-3β等結合生成降解化合物，從而避免了β-catenin的降解。當胞質的β-catenin積累到一定濃度時，可移入細胞核內與核內的TCF/LEF結合，形成β-catenin-TCF/LEF復合物，該復合物可啟動靶基因細胞周期蛋白（cyclin）、基質金屬蛋白酶（MMP）-7、干細胞標志物CD44等的轉錄，調控細胞生長［5］。

李韶等［6］研究證實Wnt2經典信號通路及其下游靶基因β-catenin的表達在食管癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，且隨病理分期的升高表達逐漸增強。該次研究在探討食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達與臨床病理特征的關系時也發(fā)現：在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl陽性表達率明顯高于Ⅰ+Ⅱ表達率，P＜0.05。在有、無淋巴結轉移的病例中Wnt蛋白陽性表達率差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。與王勇濤等［7］文獻中結果一致。王勇濤等研究發(fā)現Wnt2、Dvl蛋白在癌組織中的相對表達量明顯高于正常組織［8］。該研究結果表明食管鱗癌組織中，Wnt2及Dvl的陽性率分別為88.5%和 77.9%，而正常食管組織中Wnt2及Dvl的陽性率分別為12.2%、8.4%，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，Wnt2與Dvl蛋白質食管鱗癌表達上調過程中表現出高度的一致性，有望成為食管鱗癌診斷和治療的新型生物標記物。此外TNM分期較晚，Wnt2與Dvl表達量高，易發(fā)生淋巴結轉移。因此有效抑制Wnt、Dvl的表達，或許可以減少食管鱗癌的發(fā)生，為食管鱗癌的預防及治療提供了新的思路。但是由于Wnt通路涉及多種蛋白，其具體作用與機制還有待于進一步研究。

［1］郭變琴，吳立翔，汪先桃，等.Wnt2在乳腺癌組織及患者血清中的表達及意義［J］.細胞與分子免疫學雜志，2013，29 （6）：633-636.

［2］謝亮海，蔣晗，吳福生.Wnt/β-catenin信號通路在肝細胞癌中的促進作用［J］.南方醫(yī)科大學學報，2014，34（6）：913-917.

［3］吳國慧，孫莉.Wnt10B在腫瘤和疾病發(fā)生中的作用［J］.解放軍醫(yī)學院學報，2014，35（11）：1174-1177，1181.

［4］李華，周德俊.Wnt2/β-catenin信號通路及其在腫瘤中的作用［J］.廣東醫(yī)學，2015，36（2）：320-323.

［5］王凱，李建遠.Wnt/β-catenin信號通路與發(fā)育和疾病研究進展［J］.中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，9（11）：160-161.

［6］李韶，張云慶，徐飛.Wnt2與β-catenin蛋白在食管癌中的表達特點及病理意義［J］.大連醫(yī)科大學學報，2012，34（2）：142-145.

［7］王勇濤，汪洋，尚自強，等.食管鱗癌組織中Wnt2、DvlmRNA和蛋白表達變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2016，56（6）：4-6.

［8］王勇濤，王洪江，王興名.Wnt2與Dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達及臨床意義［J］.天津醫(yī)藥，2016，44（2）：210-212.

Expression and Evaluation of DVL and Wnt2 Protein in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

CHANG Hui
Department of Laboratory of Xinwen Mining Group Suncun Coal Mine Hospital，Xintai，Shandong Province，271219 China

R5

A

1674-0742（2016）07（a）－0033-02

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.19.033

?；坌裕?980.1-），女，山東泰安人，本科，主管檢驗師，研究方向：檢驗科。

2016-04-05）