胡璇，王東生

（中南大學湘雅醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合科，湖南 長沙 410008）

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論著

定心湯對心律失常大鼠模型的影響*

胡璇，王東生

（中南大學湘雅醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合科，湖南 長沙 410008）

摘要：目的研究定心湯對心律失常大鼠模型的作用及各項相關(guān)指標的影響。方法采用烏頭堿所致心律失常模型觀察藥物作用。結(jié)果定心湯對烏頭堿致大鼠室性心律失常模型有明顯作用，縮短心律失常持續(xù)時間，降低血清丙二醛（MDA）含量，增加血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，增加心肌組織中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。結(jié)論定心湯有明顯的抗室性心律失常作用，且呈劑量依賴性。

關(guān)鍵詞：定心湯；心律失常；大鼠模型；超氧化物歧化酶；丙二醛；Na+-K+-ATP酶，Ca2+-ATP酶

定心湯來源于清代名醫(yī)張錫純《醫(yī)學衷中參西錄》方劑篇，由龍眼肉、酸棗仁等8味中藥組成，運用傳統(tǒng)中醫(yī)藥學基本理論，以活血通絡(luò)、益氣養(yǎng)心、寧心安神為治法，經(jīng)臨床病例驗證，其對心律失常有良好療效。本研究通過觀察定心湯對心律失常模型的作用及各項相關(guān)指標的影響，進一步研究其抗心律失常的作用機制。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1動物SPF級SD大鼠50只，雄性，日齡54～ 57 d，購自中南大學湘雅醫(yī)學院實驗動物中心，合格證號：SYXK（湘）2013-0004。

1.1.2藥品與試劑定心湯（龍眼肉、酸棗仁、山茱萸、柏子仁、生龍骨、生牡蠣、乳香、沒藥），購自中南大學湘雅醫(yī)院中藥房，先將生藥浸泡30min，沸后文火煎煮30 min，8層紗布過濾，煎煮2次，合并濾液。穩(wěn)心顆粒（山東步長制藥股份有限公司，批號：Z10950026，規(guī)格：每袋5g），鹽酸胺碘酮片（杭州賽諾菲制藥有限公司，批號：H19993254，規(guī)格：每片0.2 g），烏頭堿（上海源葉生物科技有限公司，批號：YY90196，生物純度：高效液相色譜法≥98%，規(guī)格：每支20 mg），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）檢測試劑盒（南京建成生物工程有限公司，商品編號：A001-1-96、A003-1-96），超微量Ca2+-ATP酶測定試劑盒（南京建成生物工程有限公司，商品編號：A070-4），超微量Na+–K+–ATP酶測定試劑盒（南京建成生物工程有限公司，商品編號：A070-2）。

1.1.3儀器十六通道生理儀（美國Biopac公司，MP-150型），臺式冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司，TGL-16），全自動酶標洗板機（深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，PW-812），酶標儀（深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，MB-530），恒溫振蕩器（太倉市強樂實驗設(shè)備有限公司，THZ-C）。

1.2方法

1.2.1分組及給藥先適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，再隨機分為模型組（生理鹽水）、穩(wěn)心顆粒組（4.860 g/kg）、胺碘酮組（40 mg/kg）、定心湯低劑量組（9.72 g/kg）、定心湯高劑量組（38.88 g/kg），共5組，每組10只。每日灌胃給予相應(yīng)藥物1次，連續(xù)給藥7d，給藥體積為10ml/kg[1]。

1.2.2建模建模方法參考文獻[2]，各組大鼠末次給藥后30 min，腹腔注射10%水合氯醛麻醉（3.5 ml/kg），仰臥位固定，將針式電極分別插入大鼠左后、右前肢末端皮下，等心電圖穩(wěn)定后，記錄正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖。然后由尾靜脈恒速注入濃度為3μg/ml烏頭堿，10s內(nèi)注入完畢，以心電圖中出現(xiàn)心律失常圖像為建模成功。觀察并記錄灌藥后心律失常發(fā)生時間及持續(xù)時間，1.5 h內(nèi)心律失常未恢復的大鼠心律失常維持時間按90min統(tǒng)計。采用Mest方法評定心律失常分數(shù)[3]：0分，竇性心律；20分，Ⅰ度房室傳導阻滯，室上性心律失常；40分，室性早搏二聯(lián)律、三聯(lián)律，Ⅱ度房室傳導阻滯；60分，多源性室性早搏，陣發(fā)室速；80分，室顫；100分，死亡。

1.2.3SOD活性和MDA含量測定實驗完畢后，腹主動脈取血，2500r/min離心15min，取血清，根據(jù)試劑盒說明書方法測定SOD活性和MDA含量。

1.2.4ATP酶活性測定各組大鼠取血后，取左心室肌組織，按照相應(yīng)的試劑盒說明書測定Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用單因素方差分析，計量資料呈正態(tài)分布且方差齊性時，用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1定心湯對抗心律失常的作用

與模型組比較，定心湯高、低劑量組、胺碘酮組、穩(wěn)心顆粒組能延遲心律失常出現(xiàn)時間，縮短心律失常持續(xù)時間，提高烏頭堿閾劑量，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.067、3.441和4.161，P=0.000）。其中定心湯高劑量組延遲心率失常時間最長，心率失常持續(xù)時間最短，心率失常分數(shù)最低，差異有統(tǒng)計學意義（t= 6.065，P=0.000）。定心湯高劑量組烏頭堿閾劑量比低劑量組高，呈劑量依賴性。見附圖和表1。

2.2SOD活性和MDA含量變化

與模型組比較，定心湯高、低劑量組、胺碘酮組、穩(wěn)心顆粒組大鼠血清中SOD活性升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計學意義（t=13.512和4.355，P=0.000）。其中定心湯高劑量組的SOD活性最高，MDA含量降低最多，差異有統(tǒng)計學意義（t=15.188和5.575，P= 0.000）。見表2。

附圖　注射烏頭堿后各組心律失常出現(xiàn)時間比較

表1　烏頭堿造模后各組大鼠心律失常比較 （n=10±s）

表1　烏頭堿造模后各組大鼠心律失常比較 （n=10±s）

注：1）與定心湯高劑量組比較，P<0.05；2）與胺碘酮組比較，P<0.05；3）與定心湯低劑量組比較，P<0.05；4）與穩(wěn)心顆粒組比較，P<0.05

烏頭堿閾劑量/（μg/kg）模型組　145.500±47.1131）2）　4657.500±1428.4621）3）　66.000±32.7271）3）　7.000±1.4804）定心湯高劑量組　709.200±343.938　842.800±263.150　22.000±6.325　10.933±1.140定心湯低劑量組　361.900±128.2071）　2568.300±1024.8821）　32.000±19.322　8.533±0.8201）胺碘酮組　460.000±329.239　3736.500±1812.7991）　42.000±27.406　9.533±1.573穩(wěn)心顆粒組　269.900±116.3571）　4387.300±1333.9891）3）　38.000±28.983　9.000±1.1001）F值　8.777　14.846　4.357　13.110 P值　0.000　0.000　0.005　0.000組別心律失常出現(xiàn)時間/s 心律失常持續(xù)時間/s Mest/分

表2　各組大鼠血清中SOD活性和MDA含量比較（n=10±s）

表2　各組大鼠血清中SOD活性和MDA含量比較（n=10±s）

注：1）與定心湯高劑量組比較，P<0.05；2）與定心湯低劑量組比較，P<0.05；3）與胺碘酮組比較，P<0.05；4）與穩(wěn)心顆粒組比較，P<0.05

MDA/（nmol/ml）模型組　146.631±29.1911）2）3）4）　12.084±1.3481）2）定心湯高劑量組　820.699±82.475　7.692±0.890定心湯低劑量組　633.542±97.0831）　9.348±0.7691）胺碘酮組　380.735±118.3191）2）　10.681±0.6531）穩(wěn)心顆粒組　421.257±98.9121）2）　11.909±1.3791）2）3）F值　80.786　30.784 P值　0.000　0.000組別SOD/（u/ml）

2.3Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性

與模型組比較，定心湯高、低劑量組、胺碘酮組、穩(wěn)心顆粒組大鼠心肌組織中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均升高，但是定心湯高劑量組兩項酶活性與其他各組比較最高，差異有統(tǒng)計學意義（t=10.461和11.236，P=0.000）。見表3。

表3　各組大鼠心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性比較 （n=10，u/mgprot±s）

表3　各組大鼠心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性比較 （n=10，u/mgprot±s）

注：1）與定心湯高劑量組比較，P<0.05；2）與定心湯低劑量組比較，P<0.05；3）與胺碘酮組比較，P<0.05

Ca2+-ATP模型組　0.156±0.0801）2）　0.086±0.0371）2）定心湯高劑量組　2.219±0.618　0.433±0.091定心湯低劑量組　1.291±0.7391）　0.230±0.0641）胺碘酮組　0.565±0.4871）2）　0.141±0.0501）2）穩(wěn)心顆粒組　0.910±0.4561）3）　0.149±0.0581）2）F值　22.446　51.830 P值　0.000　0.000組別Na+-K+-ATP

3　討論

從西醫(yī)角度上看，心律失常是由于竇房結(jié)激動異常或激動產(chǎn)生于竇房結(jié)以外，激動的傳導緩慢、阻滯或經(jīng)異常通道傳導，即心臟活動的起源和傳導障礙導致心臟搏動的頻率和節(jié)律異常。通常見于各種器質(zhì)性心臟病，其中以冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、心肌病等為多見。

心律失常性質(zhì)的確診大多數(shù)要依靠心電圖來判定，特別是發(fā)作時的心電圖記錄是確診心律失常的重要依據(jù)。因此本實驗中筆者通過比較大鼠正常心電圖與注藥后心電圖的不同來判斷各藥物抗心律失常的作用。

SOD活性和MDA含量是評定氧自由基生成膜結(jié)構(gòu)破壞的指標。其中SOD能消除生物體在新陳代謝中所產(chǎn)生的有害物質(zhì)，增加血清中SOD的含量就能夠提高抗心律失常的能力。MDA是過氧化脂質(zhì)的分解產(chǎn)物，能夠引起蛋白質(zhì)變性和交聯(lián)，使DNA損傷、酶及激素失活，損害細胞及細胞膜，其含量變化可以反映組織氧化損傷的程度。Na+-K+-ATP酶是生物體內(nèi)廣泛存在的生物膜酶系統(tǒng)，對維持細胞正常生理功能具有非常重要的作用，提高Na+-K+-ATP酶活性就能更好地維持心肌細胞沖動傳導，提高抗心律失常的能力。Ca2+-ATP酶能夠催化質(zhì)膜內(nèi)側(cè)的ATP水解，從而釋放能量，是神經(jīng)-肌肉傳遞過程中的重要介質(zhì)。提高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性即能夠提高保護心肌的能力，改善心臟電傳導過程，起到改善心律失常的作用。

現(xiàn)代藥理研究證實，龍眼肉具有抗氧化、抗衰老、增強免疫的作用[4]。山茱萸總萜可能通過清除氧自由基來保護心肌組織，并且顯著提高心肌的抗氧化能力，提高SOD活性，降低MDA含量[5]。從酸棗仁中提取的脂肪油有超過90%的化合物成分為不飽和脂肪酸，而這些脂肪酸具有明顯的強心作用[6]，有實驗證實酸棗仁的提取物及酸棗仁皂苷A有抗心律失常作用[7]。龍骨、牡蠣都有很好的鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥作用[8]，而牡蠣提取物能顯著縮短左心室乳頭肌各個階段復極化的動作電位持續(xù)時間[9]，牡蠣糖胺聚糖可以有效防止因血管內(nèi)皮損傷而引起的高血壓、動脈硬化、腦卒中等多種心血管疾病的發(fā)生[10]。乳香、沒藥均能降低血小板黏附性[11]。

心律失常屬于中醫(yī)范疇中的心悸、怔仲，臨床常見心悸不安，伴氣短乏力，夜寐不安，舌質(zhì)淡或暗紅，苔薄白或少苔，脈象多見促、結(jié)、數(shù)等。其基本病機是氣血陰陽虧虛，心失所養(yǎng)，或邪擾心神，心神不寧。前期臨床觀察結(jié)果表明，定心湯對心律失?；颊哂辛己玫闹委熜Ч７街旋堁廴庋a心肝之血，酸棗仁、柏子仁補心氣，龍骨入肝以安魂，牡蠣入肺以定魄，二藥與萸肉并用，能夠收斂心氣之耗散，三焦之氣化亦可以因之團聚，又少加乳香、沒藥之流通氣血者以調(diào)和諸藥。方中諸藥合用，共成補益氣血，養(yǎng)心安神之功效。

本實驗筆者以烏頭堿致大鼠心律失常模型觀察藥物對心律失常的作用及其他相關(guān)指標（SOD、MDA 及Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP）的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，烏頭堿誘發(fā)心率失常后，各實驗組均能夠推遲心律失常出現(xiàn)的時間，縮短出現(xiàn)時間，降低心律失常分數(shù)，其中定心湯高劑量組優(yōu)于其他各組，且差異有統(tǒng)計學意義。說明定心湯高劑量組對推遲心律失常出現(xiàn)時間，減少持續(xù)時間具有明顯的作用，對烏頭堿引發(fā)的心臟毒性有良好的解毒作用。在烏頭堿閾劑量方面，4組均高于模型組，定心湯高劑量組高于低劑量組，呈劑量依賴性。從大鼠血清中SOD活性、MDA含量比較發(fā)現(xiàn)，實驗各組SOD含量均明顯高于模型組，其中定心湯高劑量組含量最高，與其他各組比較差異有統(tǒng)計學意義，各實驗組血清中MDA含量均低于模型組，其中定心湯高劑量組最低，說明高劑量定心湯具有明顯提升大鼠血清中SOD活性，降低MDA含量的作用。實驗各組的Na+-K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性均高于模型組，其中高劑量定心湯組的酶活性明顯高于其余各組，提示高劑量定心湯對提高Na+-K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性具有重要作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，定心湯對烏頭堿誘發(fā)的室性心律失常具有明顯的對抗作用，且呈劑量依賴性。

參考文獻：

[1]魏偉,吳希美,李元建.藥理實驗方法學[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:63-66.

[2]韓麗華,王振濤,陳舒茵,等.律復康膠囊對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2010,2:299-300.

[3]姚紅伊,沈禮,林國華,等.蟲草頭孢菌粉水提物抗實驗性心律失常作用的研究[J].中國藥理學通報,2011,27(7):1015-1018.

[4]盛康美,王宏潔.龍眼肉的化學成分與藥理作用研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(5):236-237.

[5]GONG Y,CHEN K,YU S Q,et al.Protective effect of terpenes from fructus corni on the cardiomyopathy in alloxan-induced diabetic mice[J].Chinese Journal of Applied Physiology,2012,28(4): 378-380.

[6]XIE J B,ZHANG Y Q,WANG L J,et al.Composition of fatty oils from semen ziziphi spinosae and its cardiotonic effect on isolated toad hearts[J].Nat Prod Res,2012,26(5):479-483.

[7]黃宜生,賈鈺華,孫學剛,等.酸棗仁皂苷A對缺血再灌注損傷大鼠心律失常及Bcl-2、Bax表達的影響 [J].中藥新藥與臨床藥理, 2011,22(1):52-53.

[8]張晗,張磊,劉洋.龍骨、牡蠣化學成分、藥理作用比較研究[J].中國中藥雜志,2011,36(13):1839-1840.

[9]CONNOLLY K,JACKSON D,PULLEN C,et al.Alpha-adrenoceptor antagonism by Crassostrea gigas oyster extract inhibits noradrenaline-induced vascular contraction in Wistar rats[J].J Integr Med,2015,13(3):194-200.

[10]馮麗,趙文靜,常惟智.牡蠣的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進展[J].中醫(yī)藥信息,2011,28(1):115-116.

[11]蔣海峰,宿樹蘭,歐陽臻,等.乳香、沒藥提取物及其配伍對血小板聚集與抗凝血酶活性的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2011, 17(19):160-161.

（申海菊編輯）

中圖分類號：R 541.7；R 285.5

文獻標識碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.13.004

文章編號：1005-8982（2016）13-0018-04

收稿日期：2016-01-12

*基金項目：國家自然科學基金（No:81373554）；湖南省中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷重點學科開放基金（No:2014-3）

[通信作者]王東生，E-mail：wdsh66@aliyun.com

Effect of Dingxin decoction on arrhythmia in rat model*

Xuan Hu，Dong-sheng Wang
（Department of TCM Combined with Western Medicine，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410008，China）

Abstract:Objective To study the effect of Dingxin decoction on arrhythmia rat model and related indicators.Methods Aconitine-induced arrhythmia model was used to observe drug effects.Results Dingxin decoction had obvious effects on ventricular arrhythmia rat model caused by aconitine，which included shorter arrhythmia duration，lower serum malondialdehyde（MDA）content，increased the serum superoxide dismutase （SOD）activity，and increased Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase activity in the myocardial tissue.Conclusions Dingxin decoction has significant anti-ventricular arrhythmia effects in a dose-dependent manner.

Keywords:Dingxin decoction；arrhythmia；rat model；superoxide dismutase；malondialdehyde；Na+-K+-ATPase；Ca2+-ATPase