劉澤娟，趙　萍，陳　娟，趙佳佳，華　晶，王　凌，蔣學(xué)華

(四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都　610041)

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LC-MS/MS法測定人血漿中甲磺酸雷沙吉蘭的濃度及其體內(nèi)藥動學(xué)研究

劉澤娟，趙萍，陳娟，趙佳佳，華晶，王凌，蔣學(xué)華

(四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都610041)

目的建立人血漿中甲磺酸雷沙吉蘭(rasagiline mesylate，PAI)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測定方法，并應(yīng)用于研究其在中國健康人體內(nèi)的藥動學(xué)特征。方法以氯吡格雷為內(nèi)標(biāo)，血漿樣品經(jīng)液-液萃取后，通過三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，以選擇性正離子反應(yīng)監(jiān)測進(jìn)行測定，檢測離子對為m/z172.3→117.1(雷沙吉蘭)，m/z322.3→184.0(氯吡格雷)。甲磺酸雷沙吉蘭線性范圍為0.1047～20.93 μg·L-1，定量限為0.1047 μg·L-1，方法學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。應(yīng)用此法研究24名(男女各半)中國健康志愿者口服甲磺酸雷沙吉蘭片的藥動學(xué)特點(diǎn)及進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。結(jié)果結(jié)果顯示0.5、1.0及2.0 mg 3個(gè)劑量組(n=12)甲磺酸雷沙吉蘭的吸收呈線性動力學(xué)特征；中劑量多次給藥后，無蓄積現(xiàn)象；性別對雷沙吉蘭主要藥動學(xué)參數(shù)的影響差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但高脂飲食對雷沙吉蘭的藥物峰濃度有明顯影響，但對吸收程度無明顯影響。結(jié)論建立的LC-MS/MS測定法專屬、靈敏，滿足甲磺酸雷沙吉蘭片的人體藥動學(xué)研究。

甲磺酸雷沙吉蘭；藥代動力學(xué)；血藥濃度；LC-MS/MS；人血漿；測定

甲磺酸雷沙吉蘭(rasagiline mesylate，PAI)是一種強(qiáng)效、高選擇性、不可逆的B型單胺氧化酶(MAO-B)抑制劑，對多巴胺能運(yùn)動神經(jīng)功能失調(diào)具有治療作用[1]。目前多種藥物用于帕金森病(PD)的治療[2]，PAI在臨床上主要用于治療早期PD，亦可作為較晚期患者治療藥物左旋多巴的補(bǔ)充用藥[3]。其作用機(jī)制是阻滯神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的分解，從而增加多巴胺的蓄積，引起紋狀體中多巴胺細(xì)胞外水平上升。多巴胺水平的升高和隨后多巴胺能活性的增強(qiáng)，能使PD患者的臨床癥狀(多巴胺能運(yùn)動功能障礙)得到改善[4]。本研究建立了一種高效、快速、準(zhǔn)確的LC-MS/MS法，對24名健康受試者空腹單次、多次及高脂餐后口服甲磺酸雷沙吉蘭片后的藥動學(xué)進(jìn)行研究，為臨床治療的有效性和安全性評價(jià)提供全面參考。

1　材料與方法

1.1藥品和試劑甲磺酸雷沙吉蘭片(規(guī)格：1.0 mg/片，批號：20130104，四川方向藥業(yè)有限責(zé)任公司)；甲磺酸雷沙吉蘭對照品(PAI，批號：121223，含量99.68%，四川方向藥業(yè)有限責(zé)任公司)；硫酸氫氯吡格雷(CLO，內(nèi)標(biāo))對照品(批號：100819-201102，含量99.5%，中國食品藥品檢定研究院)；乙酸乙酯(分析純，批號為20140624，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)；氫氧化鈉(分析純，批號：20111101，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司)；甲酸銨(色譜純，批號：WC390060，Shanghai ANPEL Scientific instrument Co.Ltd)；甲醇(色譜純，批號：3DL0001，SPECTRUM CHEMICAL MFG.CORP)；水為去離子水。

1.2色譜條件CTC Analytics HTS PAL Autosampler自動進(jìn)樣器(瑞典CTC Analytics AG)；SHIMADZU SCL-10A vp二元泵；DGU-14A脫氣系統(tǒng)(日本Shimadzu 公司)；色譜柱CAPCELL PAK C18(5 μm，2.0×50 mm)；流動相水溶液(含5 mmol·L-1甲酸銨；A)，甲醇(含5 mmol·L-1甲酸銨；B)，梯度洗脫(洗脫程序見Tab 1)；流速：0.4 mL·min-1；柱溫：35℃；進(jìn)樣量5 μL。

Tab 1　Gradient elution procedure

1.3質(zhì)譜條件API 3000TM型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，ESI 離子源(美國Applied Biosystem公司)；監(jiān)測模式正離子模式；掃描方式多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；監(jiān)測離子對m/z 172.3→117.1(PAI)，m/z 322.3→184.0(CLO)；離子噴射電壓3 500 V；溫度400℃；霧化氣10；氣簾氣8；碰撞氣8；去簇電壓12V(PAI)、40V(CLO)；聚焦電壓64V(PAI)、109V(CLO)；碰撞能量17V(PAI)、30V(CLO)；碰撞室出口電壓10V(PAI)、10V(CLO)。

1.4溶液配制PAI對照品溶液：精密稱取PAI對照品20.93 mg置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為209.3 mg·L-1的PAI對照品儲備液。進(jìn)一步以甲醇稀釋得PAI濃度分別為2.094、4.188、10.47、20.94、104.7、209.3和418.6 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

內(nèi)標(biāo)溶液：精密稱取CLO對照品10.11 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為202.2 mg·L-1的CLO對照品儲備液；進(jìn)一步用甲醇稀釋成濃度為101.1 μg·L-1的內(nèi)標(biāo)工作液。

1.5樣品處理與測定精密移取志愿者血漿(室溫融化)0.3 mL，加入甲醇15 μL，渦旋振蕩30 s，靜置備用。

取含藥血樣或待測血樣，加入內(nèi)標(biāo)工作液15 μL，渦旋30 s后加入氫氧化鈉溶液(0.1 mol·L-1)50 μL，渦旋30 s后加入3 mL萃取劑(乙酸乙酯)，再渦旋3 min，12 000 r·min-1離心5 min。移取上清液于37℃潔凈氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)尤?00 μL甲醇復(fù)溶，渦旋混合3 min后12 000 r·min-1離心3 min，上清液轉(zhuǎn)入0.5 mL EP管內(nèi)12 000 r·min-1離心1 min，吸取上清液進(jìn)樣。

1.6給藥設(shè)計(jì)入選24名健康受試者(男女各半)，經(jīng)全面體檢合格，簽署知情同意書，并經(jīng)中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會審批同意。將受試者隨機(jī)分為兩組，每組男女各半，其中1組進(jìn)行空腹低(0.5 mg)、中劑量(1.0 mg)單次給藥和多次給藥(每天1.0 mg，連續(xù)7 d)試驗(yàn)，另一組進(jìn)行空腹、餐后高劑量(2.0 mg)單次給藥試驗(yàn)，兩周期之間間隔7 d。空腹組禁食12 h后給藥；餐后組于服藥前30 min內(nèi)進(jìn)食總熱量為800～1 000卡路里的高脂早餐(150卡路里左右的蛋白質(zhì)、250卡路里左右的碳水化合物、500～600卡路里的脂肪)，之后給藥。受試者于實(shí)驗(yàn)d 1或d 7服藥前(0時(shí))和服藥后5、10、15、20、30、45 min、1、1.25、1.5、2、3、4、6、8、10 h從靜脈采血，中劑量多次給藥試驗(yàn)d 4、d 5、d 6早晨于服藥前采血，采血量約4 mL，置于肝素抗凝的試管中，離心5 min(4 000 r·min-1)，分離血漿，置-20℃冰箱備用。

2　結(jié)果

2.1專屬性試驗(yàn)在優(yōu)化后的色譜/質(zhì)譜條件下，雷沙吉蘭及內(nèi)標(biāo)氯吡格雷的質(zhì)譜圖見Fig 1。分別取6個(gè)不同來源的人空白血漿、空白血漿+PAI、空白血漿+CLO和志愿者服藥后血漿樣品，按上述方法處理樣品，分別進(jìn)樣，圖譜見Fig 2。由圖可見，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)對待測物的測定無干擾。

2.2線性范圍和最低定量限取空白血漿0.3 mL于4.0 mL EP管中，分別精密加入PAI標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液15 μL，渦旋振蕩30 s，得濃度分別為0.1047、0.2094、0.5235、1.047、5.235、10.47和20.93 μg·L-1的含藥血漿，按上述方法處理樣品。以含藥血漿中PAI與CLO峰面積的比值R為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行加權(quán)回歸，計(jì)算得PAI的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程R=0.401C+0.00503，r=0.9987。含藥血漿中PAI在0.1047～20.93 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低定量限(LLOQ)為0.1047 μg·L-1。

2.3準(zhǔn)確度和精密度分別配制0.1047、0.2618、5.235和16.75 μg·L-1的含藥血漿(即LLOQ、低、中、高濃度，下同)，各濃度6個(gè)，連續(xù)3 d測定，計(jì)算準(zhǔn)確度和日內(nèi)、日間RSD。見Tab 2。

2.4提取回收率記錄精密度試驗(yàn)項(xiàng)下d 1低、中、高濃度的含藥血漿圖譜中PAI和CLO峰面積，以此作為樣品提取后測定的峰面積。取空白人血漿0.3 mL，加入氫氧化鈉溶液(0.1 mol·L-1)50 μL，渦旋30 s后加入3 mL萃取劑(乙酸乙酯)，再渦旋3 min，12 000 r·min-1離心5 min，移取上清液，于上清液中分別加入低、中、高(0.2618、5.235、16.75 μg·L-1)3種不同濃度的PAI系列工作溶液及內(nèi)標(biāo)工作溶液各15 μL，渦旋30 s后，按上述方法處理樣品。記錄PAI、CLO峰面積，以此作為PAI樣品未提取測定的峰面積。計(jì)算得低、中、高濃度的含藥血漿中PAI的提取回收率分別為(74.20±4.81)%、(75.37±5.38)%、(82.55±4.40)%(n=6)；內(nèi)標(biāo)萃取回收率為：(74.51±5.28)%(n=18)。

Fig 1　Parention full scan mass-spectrogram of PAI(A) and COL (B) Production mass-spectrograms of PAI (C) and GLO (D)

Fig 2　Typical chromatograms

A：Blank plasma;B:Blank plasma+PAI;C:Blank plasma+CLO;D: Plasma sample 30 min after single oral administration of 1.0 g rasagilinemesylate tablet

Tab 2　Results of accuracy and precision tests/%

2.5基質(zhì)效應(yīng)取4 mL EP管12個(gè)，分別加入低、高濃度的PAI對照品溶液和內(nèi)標(biāo)工作液15 μL，各6份，加入氫氧化鈉溶液(0.1 mol·L-1)50 μL，渦旋30 s后，按上述方法處理樣品。記錄PAI、CLO峰面積。計(jì)作set1。選擇6種不同來源的空白血漿，加入低、高濃度(n=6)的PAI對照品溶液，按“3.4”項(xiàng)下方法制備未提取的含藥血漿，得到set2。

絕對基質(zhì)效應(yīng)評價(jià)：以不同來源樣品set2中樣品峰面積/set1中樣品平均峰面積之比值計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)因子(matrix factor，MF)；以待測物與內(nèi)標(biāo)MF的比值計(jì)算內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子(IS-normalized MF)。

相對基質(zhì)效應(yīng)評價(jià)：以多個(gè)樣品獲得的內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子計(jì)算變異系數(shù)。結(jié)果見Tab 3?？梢姷?、高濃度樣品的變異系數(shù)(即相對基質(zhì)效應(yīng))為6.05%和1.15%，均小于15%，表明基質(zhì)對于未知樣品測定結(jié)果準(zhǔn)確度的影響可以忽略。

Tab 3　Results of Matrix effects(n=6)

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.3”項(xiàng)下方法配制0.2618和16.75 μg·L-1的含藥血漿(即低、高濃度)，分別考察了含藥血漿處理后4℃放置24 h、室溫放置8 h、凍融3次以及-20℃凍存40 d后的穩(wěn)定性。結(jié)果與0時(shí)刻含藥血漿相比較，變異均在±4%范圍內(nèi)(n=6)，表明含藥血漿在上述條件下穩(wěn)定。

2.7藥動學(xué)試驗(yàn)

2.7.1藥時(shí)曲線數(shù)據(jù)采集完成后，經(jīng)Phoenix WinNonlin 6.3藥動學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件處理得到不同給藥方式組平均血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，志愿者單次給藥(SL、SM、SH)、多次給藥(MM)、飲食影響(FH)的試驗(yàn)中，各個(gè)平均藥-時(shí)曲線，見Fig 2。

2.7.2藥動學(xué)參數(shù)由實(shí)際測定的血藥濃度經(jīng)時(shí)數(shù)據(jù)讀出Cmax和Tmax。采用Phoenix WinNonlin6.3軟件擬合計(jì)算相關(guān)藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果見Tab 4-1、4-2。

Fig 3　Mean Drug Concentration-time Curves of rasagiline following oral administration in Healthy Volunteers(n=12)

Tab 4-1

PharmacokineticparameterLow-dosesingleMedium-dosesingleMultipleCmax/μg·L-12.45±0.445.36±1.035.74±1.15Tmax/h0.35±0.100.40±0.100.39±0.11T1/2/h0.47±0.270.73±0.320.71±0.30AUC0→t/μg·L-1·h1.39±0.363.36±1.035.18±1.95AUC0→∞/μg·L-1·h1.52±0.423.54±1.035.37±2.01CL/L·h-1359.03±0.36311.58±113.65211.07±77.26Vz/L224.49±106.40312.69±154.47203.87±80.09MRT0→t/h0.59±0.110.79±0.170.96±0.29MRT0→∞/h0.75±0.210.96±0.201.08±0.34

Tab 4-2

PharmacokineticparameterHigh-doseFastHighfatprandialCmax/μg·L-19.37±1.316.60±1.36Tmax/h0.50±0.200.58±0.26T1/2/h0.74±0.500.87±0.66AUC0→t/μg·L-1·p.65±1.805.43±1.69AUC0→∞/μg·L-1·p.86±1.805.66±1.43CL/L·h-1373.60±120.01387.06±123.05Vz/L382.61±240.88456.50±298.16MRT0→t/h0.81±0.271.11±0.36MRT0→∞/h0.94±0.321.27±0.46

對空腹單次與多次給予相同劑量本品后，PAI的lg(AUC0→t)、lg(AUC0→∞)、lg(Cmax)和消除半衰期T1/2進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，結(jié)果表明，T1/2的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但AUC0→t、AUC0→∞、Cmax的結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對其Tmax進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。計(jì)算PAI的蓄積因子為(1.09±0.09)。

對空腹與餐后單次給予相同劑量本品后的lg(AUC0→t)、lg(AUC0→∞)、lg(Cmax)和消除半衰期T1/2進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，其AUC0→t、AUC0→∞和消除半衰期T1/2的結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但Cmax的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明高脂飲食會導(dǎo)致雷沙吉蘭峰濃度降低，但暴露量與空腹比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]。

對男、女不同受試者給予相同劑量本品后的lg(AUC0→t)、lg(AUC0→∞)、lg(Cmax)和消除半衰期T1/2進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，對其Tmax進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，結(jié)果表明，性別對于主要藥動學(xué)參數(shù)影響的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)建立的LC-MS/MS法快速、準(zhǔn)確、靈敏，適用于本實(shí)驗(yàn)樣本中甲磺酸雷沙吉蘭的人體藥動學(xué)研究。

對線性動力學(xué)特征進(jìn)行判斷的方法，目前常用有3種[5]。① 傳統(tǒng)方法，即基于趨勢圖進(jìn)行線性藥動學(xué)判斷。以相關(guān)系數(shù)(r)作為評價(jià)指標(biāo)，r越接近于1，線性越好，但是r值為多大時(shí)認(rèn)為不具有線性動力學(xué)特征并沒有準(zhǔn)確的、規(guī)范的判斷標(biāo)準(zhǔn)，不免具有主觀性。② 采取假設(shè)檢驗(yàn)的方法，即各受試者藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行劑量標(biāo)準(zhǔn)化處理后再進(jìn)行單因素方差分析。此法簡單易于計(jì)算，但只能定性地分析是否有線性動力學(xué)特征，具體劑量增加后，藥物線性動力學(xué)偏移程度無法獲得。③ 冪指數(shù)模型，即基于置信區(qū)間法的線性動力學(xué)特征判定方法。置信區(qū)間法應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)知識與臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，不僅將個(gè)體間的變異納入考察范圍，而且借鑒生物等效性試驗(yàn)中藥動學(xué)參數(shù)的等效標(biāo)準(zhǔn)，對線性回歸斜率進(jìn)行了明確的判斷界定，一改傳統(tǒng)判斷方法的主觀性及單因素方差分析不明確性，更符合藥代動力學(xué)研究的要求。本文應(yīng)用②、③兩種方法進(jìn)行分析，均可得出劑量與吸收(AUC、Cmax)具有線性關(guān)系。雖然，用③法中統(tǒng)計(jì)學(xué)得出，AUC判定區(qū)間與置信區(qū)間有交叉，可能是因?yàn)榈刃?biāo)準(zhǔn)是針對24個(gè)人的，過于嚴(yán)苛所致。由此，我們可以認(rèn)為，本實(shí)驗(yàn)所考察劑量范圍內(nèi)，劑量與吸收(AUC、Cmax)具有明顯線性關(guān)系。

關(guān)于多次給藥后的蓄積程度，用蓄積因子來評價(jià)，但蓄積因子界值也沒有統(tǒng)一的認(rèn)識。從FDA Clinical Pharmacology and Biopharmaceutics Review(rasagiline mesylate)中得知，原研制劑連續(xù)7 d多次給藥后的AUC和Cmax分別是單次給藥后的1.39、1.45倍，結(jié)論是多次給藥后PAI幾乎沒有蓄積。本實(shí)驗(yàn)中，本品連續(xù)7 d多次給藥后，在中國人中的AUC和Cmax分別是單次給藥后的1.54、1.09倍，與本品原研制劑的研究結(jié)果基本一致，且蓄積因子為(1.09±0.09)。故得出，本品在健康中國人體內(nèi)幾乎沒有蓄積現(xiàn)象，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。高脂飲食對本品藥動學(xué)參數(shù)影響試驗(yàn)中，結(jié)果顯示高脂餐對PAI的Cmax存在明顯影響(P<0.05)，對暴露量的影響較小，研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]?？赡苁歉咧嬍秤绊懳概趴眨瑴p慢藥物吸收速率，使Cmax明顯下降，由血藥濃度曲線可以看出，在藥物消除整個(gè)過程中，高脂餐組的血藥濃度比空腹給藥組更高，表明可能是餐后藥物清除速率降低所致，由此，高脂飲食對PAI的AUC降低并不十分明顯。因此，本品的臨床治療用藥可不考慮食物的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，健康中國人單劑量口服本品(0.5～2.0 mg)后，劑量與吸收(AUC、Cmax)具有明顯線性關(guān)系；多次給藥后PAI在健康中國人體內(nèi)幾乎沒有蓄積現(xiàn)象；高脂飲食會使PAI的峰濃度降低，但對吸收程度無明顯影響；臨床推薦劑量下，男女受試者的主要藥動學(xué)參數(shù)無明顯差異。

(致謝:感謝王凌、蔣學(xué)華兩位老師對本文研究工作的悉心指導(dǎo)和大力支持，同樣感謝本教研室研究生趙萍、陳娟、趙佳佳、華晶同學(xué)的關(guān)心和幫助。)

[1]Pagonabarraga J,Rodríguez-Oroz M C. Rasagiline in monotherapy inpatients with early stages of Parkinson’s disease and in combined and adjunct therapy to levodopa with moderate and advanced stages[J].RevNeurol,2013,56(1):25-34.

[2]張萬鑫, 馬婧怡,陳虹,等.松果菊苷對帕金森病大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2014,30(8):1131-6.

[2]Zhang W X, Ma J Y, Chen H,et al. Effects of echinacoside on striatal and hippocampus extracellular fluid of monoamine neurotransmitter in Parkinson’s disease rats[J].ChinPharmacolBull,2014,30(8):1131-6.

[3]Perez-Lloret S,Rascol O.Safety of rasagiline for the treatment ofParkinson’s disease[J].ExpertOpinDrugSaf,2011,10(4):633-43.

[4]孫銅,郝麗娜.帕金森病治療新藥-雷沙吉蘭[J].齊魯藥事,2007,26(8):509-10.

[4]Sun T,hao L N.Parkinson′s disease treatment novel drugs-rasagiline[J].QiluPharmAffairs,2007,26(8):509-10.

[5]趙明,楊勁,魏敏吉.置信區(qū)間法用于線性藥代動力學(xué)特征評價(jià)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2015,31(3):238-40.

[5]Zhao M,Yang J,Wei M J.Using confidence interval method to assess linear pharmacokinetics in doseescalation study[J].ChinJClinPharmacol,2015,31(3):238-40.

[6]顧霄,張圓,宋敏,等.飲食對甲磺酸雷沙吉蘭人體藥代動力學(xué)的影響[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,44(1):85-8.

[6]Gu X,Zhang Y,Song M,et al.Food effects on the human pharmacokinetics of rasagilinemesylate[J].JChinaPharmaUniv,2013,44(1):85-8.

[7]Thebault J J,Guillaume M,Levy R.Tolerability, safety, pharmacodynamics,and pharmacokinetics of rasagiline:A potent, selective, and irreversible monoamine oxidase type B inhibitor[J].Pharmacotherapy, 2004,24(10): 1295-305.

[8]Chen J J, Swope D M. Clinical pharmacologyof rasagiline: a novel,second-generation propergylamine for the treatment of Parkinson diseas[J].JClinPharmacol,2005,45(8) : 878-94.

Determination of rasagiline mesylate in human plasma by LC-MS/MS and its pharmacokinetics study

LIU Ze-juan,ZHAO Ping,CHEN Juan,ZHAO Jia-jia,HUA Jing,WANG Ling, JIANG Xue-hua

(WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)

AimTo develop LC-MS/MS method to determine rasagiline mesylate in human plasma and its application in a pharmacokinetics study. MethodsPlasma samples were extracted using liquid-liquid extraction with clopidogrel as internal standard.The content of rasagiline mesylate in human plasma was detected by selectivelypositive ion reaction monitoring on a triple quadrupoles tandem mass spectrometer.The detected ions were m/z 172.3→117.1(rasagiline), m/z 322.3 →184.0(clopidogrel).The linear calibration curve was obtained in the concentration range of 0.1047～20.93 μg·L-1.The lower limit of quantification was 0.1047 μg·L-1.Indicators of the method validation were in line with requirements.The method was used to determine the concentration of rasagiline in human plasma after oral administration of rasagiline mesylate capsule to 24 healthy Chinese volunteers(with half males and females) and the results were compared statistically.ResultsThe single oral dose of 0.5,1.0 and 2.0 mg presented linear pharmacokinetics in the health volunteers. No accumulation was observed with multiple doses. Meanwhile, no significant difference was identified between the gender groups. High fat postprandial has obvious effects on the peak serum concentration of rasagiline，but there was no effect on the absorption amount and cumulative excretion. ConclusionThe LC-MS/MS method is specific and sensitive, and can be successfully applied to the pharmacokinetic study of Rasagiline mesylate tablets in healthy Chinese volunteers.

rasagiline mesylate；pharmacokinetics；plasma concentration；LC-MS/MS；human Plasma；determine

2016-01-14修回稿日期：2016-05-25

劉澤娟(1988-)，女，碩士，研究方向：臨床用藥的藥動學(xué)基礎(chǔ)，E-mail:873709777@qq.com；王凌(1978-)，女，博士后，副教授，研究方向：藥動學(xué)的研究與應(yīng)用，通訊作者，Tel:028-85503968,E-mail:7649800@qq.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.07.025

A

1001-1978(2016)07-1017-06

R446.112；R916.4；R969.1；R971.5

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-6-20 11:49網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160620.1149.050.html