王新紅（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 廣州口腔病研究所 口腔醫(yī)學(xué)重點實驗室，廣東 廣州 510140）

西吡氯銨含漱液對常見腸道細菌及部分ESBL+株的抗菌活性研究

王新紅*
（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 廣州口腔病研究所 口腔醫(yī)學(xué)重點實驗室，廣東 廣州 510140）

目的 檢測0.1%西吡氯銨洗漱液對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、變形桿菌、糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)株及部分臨床分離ESBL+株（超廣譜β-內(nèi)酰胺酶）的抗菌活性。方法 參考NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，以微量肉湯稀釋法進行檢測。結(jié)果 西吡氯銨對上述各種細菌有較好抑制效果，絕大多數(shù)菌株為15.63 μg/mL。結(jié)論 0.1%西吡氯銨洗漱液能有效抑制常見腸道細菌及其耐藥株的生長，具有較好的抗菌活性，可進一步拓寬其在臨床消毒中的應(yīng)用。

西吡氯銨；大腸埃希菌；肺炎克雷伯菌；變形桿菌；糞腸球菌；微量肉湯稀釋法；抗菌活性

R78

B

1671-8194（2016）18-0013-02

西吡氯銨（cetylpyridinium chloride，CPC）是目前國內(nèi)外常用的口腔消毒劑之一，主要成分為陽離子季銨化合物。國內(nèi)外相關(guān)研究證實，該消毒劑對黏膜無明顯刺激作用，可安全用于黏膜消毒［1］。該制劑主要用于口腔衛(wèi)生保?。?］，屬非處方藥，常見劑型為含漱液，使用方便快捷。國內(nèi)外相關(guān)抗菌研究主要針對口腔感染中常見細菌和真菌［3］，但對腸道桿菌及相關(guān)耐藥菌（超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，ESBL+）的抗菌研究較少。本文對臨床常見腸道桿菌如大腸埃希菌（含標(biāo)準(zhǔn)株及ESBL+耐藥株）、肺炎克雷伯菌（含標(biāo)準(zhǔn)株及ESBL+耐藥株）、普通變形桿菌及糞腸球菌為實驗材料進行了研究，觀察西吡氯銨的抗菌作用，以期對該消毒劑進行深入開發(fā)，拓展其在臨床中的應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥品：0.1%CPC漱口液［杭州民生藥業(yè)有限公司，批號：

141211，規(guī)格：0.1%/200 mL（瓶）］，硫酸慶大霉素注射液（欣辰藥業(yè)股份有限公司，批號：1407096311，規(guī)格：2 mL∶8萬單位×10支），0.9%氯化鈉注射液（山東華信制藥集團股份有限公司，批號：20140531S02，規(guī)格：500毫升/瓶）。

1.1.2 培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（北京奧博星生物公司，批號：20150107），水解酪蛋白（M H）肉湯（北京奧博星生物公司，批號：20140611），以上培養(yǎng)基按說明書配制，并按說明書規(guī)定條件121 ℃高壓蒸汽滅菌15 min備用。

1.1.3 主要儀器設(shè)備：麥?zhǔn)媳葷峁?，參考資料自行配制；大龍移液器（2～20 μL、20～200 μL、50～300 μL 12道），96孔無菌細胞培養(yǎng)板及一次性無菌培養(yǎng)皿（直徑90 mm），均購自北京博通生物試劑公司；中科美菱YC-300L冷藏柜，購自廣州滬瑞明儀器有限公司；DNP-9300-BS-11電熱恒溫培養(yǎng)箱，購自上海和勤分析儀器有限公司；SpectraMax M5酶標(biāo)儀，購自美國Molecular Devices公司。

1.1.4 實驗細菌：實驗所需菌株由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬羊城醫(yī)院檢驗科提供。大腸埃希菌［含標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC（B）44102 1株及其ESBL+耐藥株2株，ESBL-2株］、肺炎克雷伯菌［含標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC（B）46117 1株及ESBL+耐藥株2株，ESBL-2株］、普通變形桿菌［標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC（B）49027 1株］及糞腸球菌［標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC（B）49027 1株］，總計12株。上述各菌株以營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板進行37 ℃24 h培養(yǎng)后，挑取菌苔，參照比濁管將各菌株以生理鹽水配成1×106cfu/mL的菌液備用。

1.2 實驗方法：根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）推薦的微量稀釋法稍作改進［4］，用96孔板培養(yǎng)細菌，參考細菌生長現(xiàn)象判定最小抗菌濃度（MIC）。

原始待檢藥物等效濃度為1 mg/mL，經(jīng)遞倍稀釋得到2、4、8、16、32、64、128、256倍稀釋梯度。陽性對照、陰性對照、藥物稀釋梯度及操作方法見文獻［5］。藥液和對照加樣完畢后，每孔加入1×106的對應(yīng)菌液10 μL，每個藥物做3次平行試驗，37 ℃24 h培養(yǎng)，以酶標(biāo)儀對培養(yǎng)板在600 nm波長下測定OD值，結(jié)合細菌生長情況判斷實驗結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 陽性、陰性及空白對照：經(jīng)37 ℃24 h培養(yǎng)后，硫酸慶大霉素陽性對照孔中無明顯生長現(xiàn)象，陰性孔細菌對照中細菌生長良好，肉眼可見明顯渾濁，以酶標(biāo)儀檢測，其吸光度與硫酸慶大霉素陽性對照孔明顯不同。藥物稀釋梯度各孔及MH肉湯空白孔中培養(yǎng)液均澄清，無肉眼可見生長現(xiàn)象。

2.2 抗菌實驗結(jié)果（含標(biāo)準(zhǔn)菌株）：大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC （B）44102及各臨床分離株的MIC均為15.63 μg/mL；肺炎克雷伯菌CMCC（B）46117標(biāo)準(zhǔn)株及臨床分離菌株的MIC多為31.25 μg/mL，僅1株為15.63 μg/mL；普通變形桿菌CMCC（B）49027的MIC為31.25 μg/mL，糞腸球菌CMCC（B）49027的MIC為15.63 μg/mL，見表1。

表1 抗菌實驗結(jié)果

3 討 論

表面活性劑是常用消毒劑中的重要一類，可通過降低表面張力，增強細胞的通透性，與生物膜上的蛋白質(zhì)相互作用使之變性滅活，進而起到抑制并殺滅病原生物的作用。西吡氯銨亦屬中性表面活性劑，其作用機制與上述相同，故此該消毒劑不易受常見細菌耐藥性影響，有較為廣泛的抗菌譜，對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、具核梭菌、幽門螺桿菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌等常見臨床感染細菌均有一定抗菌效果［6］，可抑制口腔感染中常見的真菌如白色假絲酵母、新生隱球菌等的生長，用于口腔真菌感染療效較好［7］，有文獻顯示，該消毒劑對白色假絲酵母感染的治療效果顯著好于聚維酮碘［8］。該消毒劑不良反應(yīng)尚不明確，除味覺障礙外，無其他不良反應(yīng)的報道，對口腔正常菌群無明顯影響［9］，在臨床工作中得到了廣泛應(yīng)用，主要用于抗細菌及真菌感染，作為口腔疾病的輔助治療藥物，還可用于日?？谇蛔o理及口腔清潔。

實驗中各菌株均為臨床常見腸道細菌，多屬于正常菌群，少數(shù)可引起各種腸道感染及腸道外感染，如大腸埃希菌腹瀉、出血性結(jié)腸炎及敗血癥等，肺炎克雷伯菌可致肺炎、敗血癥等，變形桿菌可致燒傷后感染、肺部感染，糞腸球菌能引起泌尿道感染，也能導(dǎo)致術(shù)后根管感染［10-14］。大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和普通變形桿菌均屬于腸道桿菌，在正常人體消化道中分布廣泛，少數(shù)菌株具有一定的致病性。特別是由于近年來抗生素的大量應(yīng)用，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌等逐漸產(chǎn)生了耐藥性，可水解第三代甚至第四代頭孢類抗生素，臨床稱之為超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended Spectrum β-Lactamases，ESBLs），嚴(yán)重影響臨床治療效果［15-21］。此外，糞腸球菌為革蘭陽性細菌，多為腸道正常菌群成分，但亦有少數(shù)可致尿路感染、敗血癥、盆腔感染等，亦有相當(dāng)一部分具備一定的耐藥性。故此，選取上述菌株，研究西吡氯銨對其抗菌作用，具有較高的臨床價值，可有效控制上述各菌及其ESBL+耐藥株所致感染。

實驗結(jié)果顯示，0.1%西吡氯銨含漱液對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株（含ESBL+/ESBL-）均有一定抑制效果，其中對大腸埃希菌的抗菌效果較為顯著，全部菌株均為15.63 μg/mL；而對肺炎克雷伯菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株的抗菌效果稍弱，多數(shù)為31.25 μg/mL，僅1株為15.63 μg/mL。該結(jié)果說明0.1%西吡氯銨含漱液對上述兩種細菌均有較好抗菌效果，且不受ESBL耐藥性影響。該結(jié)果與西吡氯銨的表面活性抗菌機制相對應(yīng)，說明出現(xiàn)ESBL耐藥性后，菌株可產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，但其細胞成分及結(jié)構(gòu)并未出現(xiàn)較大變化，故此對西吡氯銨的敏感度亦無顯著變化。綜上所述，西吡氯銨對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通變形桿菌和糞腸球菌的標(biāo)準(zhǔn)株及部分耐藥株均有較好抗菌效果。因此，該消毒劑不僅可廣泛應(yīng)用于口腔臨床，亦可用于其他部位的消毒，充分?jǐn)U展其臨床適用范圍。

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Cetylpyridnium Chloride Gargle on the Antibacterial Activity of Common Intestinal Bacteria and ESBL+Strains

WANG Xin-hong*
（Guangzhou Medical University Affiliated Oral Hospital， Guangzhou Institute of Oral Diseases， Key Laboratory of Oral Medicine， Guangzhou 510140 China）

［Abstracts］ Objective The in vitro antimicrobial activity of 0.1% cetylpyridinium chloride was determined against Escherichia coli， Klebsiellar pneumonia，Proteus vulgaris， Enterococcus faecalis and some clinical isolates. Methods Micro both dilution method. Results For most strains， The MICs of cetylpridinium chloride reach 15.63 μg/mL. Conclusion 0.1% of cetylpyridinium chloride has significant antibacterial effect on common Enteric bacillis，and this is helpful to expand its clinical application.

Cetylpyridinium chloride； Escherichia coli； Klebsiella pneumoniae； Proteus； Enterococcus faecalis； Broth microdilution method； Antibacterial activity

E-mail： xinhongwang325@163.com