徐吉銀楊迎暴徐江平王慧玲彭麗華陳煒璇成金樂（1.國家中醫(yī)藥管理局中藥破壁飲片技術(shù)與應用重點研究室　中山　52847；2.中山市中智藥業(yè)集團有限公司　中山　52847；.南方醫(yī)科大學　廣州　510515）

丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片對大鼠心肌缺血和血液流變學的影響及急性毒性研究

徐吉銀1，2楊迎暴3徐江平3王慧玲1，2彭麗華1，2陳煒璇1，2成金樂1，2（*1.國家中醫(yī)藥管理局中藥破壁飲片技術(shù)與應用重點研究室中山528437；2.中山市中智藥業(yè)集團有限公司中山528437；3.南方醫(yī)科大學廣州510515）

摘要：目的：研究、比較丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片改善大鼠心肌缺血和血液流變學的藥效作用及急性毒性差異。方法：采用注射垂體后葉素復制大鼠急性心肌缺血模型，比較丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片對大鼠急性心肌缺血的作用；復制大鼠血瘀模型，采用凝血酶誘導血小板聚集，比較丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片對血瘀模型大鼠血液流變學的影響；采用最大給藥量法比較丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片對小鼠的急性毒性作用。結(jié)果：丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片在注射垂體后葉素3min后均能明顯對抗心肌缺血所致心電圖T波抬升（P＜0.01），二者均能減少大鼠心肌缺血范圍（P＜0.01），其中丹參破壁飲片低劑量的藥效作用與傳統(tǒng)飲片相似；丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片均能降低血瘀大鼠的全血黏度和血漿黏度（P＜0.01或P＜0.05），有效降低凝血酶所致的血小板聚集率（P＜0.01）。丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片以一日最大給藥量120g/kg灌胃，實驗小鼠均無明顯急性毒性反應。結(jié)論：丹參破壁飲片、傳統(tǒng)飲片均對大鼠急性心肌缺血有明顯保護作用及改善血瘀大鼠血液流變學的藥效，丹參破壁飲片在低于傳統(tǒng)飲片的劑量即可發(fā)揮與傳統(tǒng)飲片相似的藥效；丹參破壁飲片和傳統(tǒng)飲片用藥安全性相似。

關鍵詞：丹參 破壁飲片 傳統(tǒng)飲片 急性心肌缺血 血液流變學 急性毒性

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，味苦，性微寒，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰的功效［1］。丹參是最常用的活血化瘀中藥之一，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》即收載丹參“主心腹邪氣……寒熱積聚。破癥除瘕，止煩滿”?，F(xiàn)代藥理研究表明丹參有抗心肌缺血、促進血液循環(huán)、抗血小板聚集和抗血栓生成等多種作用，臨床上常應用于防治心腦血管等疾?。?］。丹參破壁飲片是丹參飲片經(jīng)超微粉碎后采用無添加成型專利技術(shù)制備而成的新一代飲片，具有均勻性高、藥材利用率高、全成分利用和應用便捷等特點［3］。

為了對丹參破壁飲片的藥效作用和安全性進行客觀評價，本文采用大鼠急性心肌缺血和急性血瘀模型考察比較它和傳統(tǒng)飲片抗心肌缺血和改善血液流變學的作用，并采用最大給藥量法進行急性毒性試驗，為丹參破壁飲片臨床應用的有效性和安全性提供科學依據(jù)。

1材料

1.1藥品與試劑：垂體后葉素（上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號：20021204）；硝基四氮唑藍（NBT，廣州斯佳生物有限公司，批號：20091023）；鹽酸腎上腺素（廣州白云山明興制藥有限公司，批號：20091002）；枸櫞酸鈉（汕頭光華化學廠，批號：840304）；凝血酶凍干粉（凝血活酶，湖南一格制藥有限公司，批號：081007-1）；丹參飲片、丹參破壁粉粒（中山中智藥業(yè)集團有限公司，批號：20090619、20090502）。

1.2主要儀器：PCLAB生物信號處理系統(tǒng)（北京微信斯達科技發(fā)展有限責任公司）；MVIS-2022型全自動血液流變分析儀（重慶天海醫(yī)療設備有限公司）；血液聚集儀（北京普生儀器中心）。

1.3試驗動物：Wister大鼠112只，體重180～220g，雌雄各半，購于南方醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（粵）2006-0015，合格證號：0056199；昆明小鼠30只，雌雄各半，體重18～22g，購于南方醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（粵）2006-0015，合格證號：0056307。

2方法

2.1試驗樣品制備：丹參傳統(tǒng)飲片試驗樣品：準確稱取丹參飲片，煎煮前用蒸餾水浸泡1h，第一次加7倍量的水，第二、三遍分別加4倍量水，各煎煮30min，紗布濾過，合并煎液后濃縮成1.0g/mL的浸膏。4℃貯存，臨用前以蒸餾水稀釋至所需濃度。

丹參破壁飲片試驗樣品：稱取丹參破壁飲片，按最大給藥濃度用沸水攪拌混懸。4℃貯存，臨用前以蒸餾水稀釋至所需濃度。2.2對急性心肌缺血大鼠的作用：Wister大鼠56只，雌雄各半，隨機分為7組，每組8只。模型組大鼠灌胃給予生理鹽水，其他各給藥組給予相應藥物，1次/d，10mL/kg，連續(xù)7d。末次給藥1h后，用20%烏拉坦麻醉大鼠（5mL/kg），四肢導聯(lián)PCLAB生物信號處理系統(tǒng)。先記錄一段正常狀態(tài)下的心電圖，然后舌下靜脈注射垂體后葉素（0.5U/kg，1mL/kg）造成大鼠急性心肌缺血狀態(tài)，并記錄注射垂體后葉素第5、10、20、30sec和1、3、5、10min 的T波（mV）變化。

實驗結(jié)束后處死大鼠，迅速取出心臟，在生理鹽水中洗去血液，濾紙吸干后稱重。再橫切5～7片，置于NBT染色液中，染色20min后，用濾紙吸干水分。剪出不著色部分的心肌并稱重［4，5］。2.3對急性血瘀大鼠血液流變學的作用：Wister大鼠56只，雌雄各半，隨機分為7組，每組8只。正常組、模型組大鼠灌胃給予生理鹽水，其他給藥組分別灌胃給予相應藥物，1次/d，10mL/kg，連續(xù)12d。于末次給藥后30min，除正常組外，其余各組皮下注射0.1%腎上腺素0.8mL/kg，2h后將大鼠浸入冰水中5min進行冷刺激，間隔2h后再注射等量腎上腺素。大鼠禁食不禁水，次日晨以20%烏拉坦（5mL/kg）麻醉大鼠，腹主動脈取血［6］。

按全血：抗凝劑（9∶1）分別注入含3.8%枸櫞酸鈉抗凝管中。將全血分三部分：①2mL用于檢測全血低、中、高切黏度；②3mL全血以2000r·min-1離心10min得血漿，檢測血漿黏度；③剩余全血以500r·min-1離心5min得富血小板血漿（PRP），血液再次以2500r·min-1離心10min得貧血小板血漿（PPP），用PPP調(diào)零使PRP血小板數(shù)為（100～300）×109/L，測定管內(nèi)加入200μL PRP，分別加入濃度為10U/mL的凝血酶8μL，描記5min內(nèi)血小板聚集曲線，觀察1、3、5min的血小板聚集率（PAG）及最大血小板聚集率（MPAG），所有樣本的血小板聚集測定均3h內(nèi)完成。

2.4急性毒性試驗：昆明小鼠30只，雌雄各半，隨機分成3組：空白組、丹參傳統(tǒng)飲片組、丹參破壁飲片組，禁食12h，分別以0.4mL/10g體重的最大灌胃量給予濃度為1g/mL的藥液，一天內(nèi)連續(xù)給藥3次，間隔4h。給藥后即對動物體重、精神狀態(tài)、毛發(fā)、自主活動、飲食、大小便、口鼻分泌物等一般狀況進行觀察，連續(xù)觀察7d，記錄動物的體重、不良反應和死亡情況。

3結(jié)果

3.1對急性心肌缺血大鼠的作用：各組大鼠8個時間段的心電圖T波與正常狀態(tài)下的心電圖T波差值如表1所示，丹參傳統(tǒng)飲片組和丹參破壁飲片各組大鼠在注射垂體后葉素的第3分鐘以后，T波均較模型組明顯下降（P＜0.01）。

表1丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對大鼠急性心肌缺血心電圖T波差值的影響（n=8，±s）

表1丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對大鼠急性心肌缺血心電圖T波差值的影響（n=8，±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量mg/ kg注射垂體后葉素不同時間后心電圖T波差值（mV）5s　10s　20s　30s　1min　3min　5min　10min模型組　—— 0.0544 ±0.06　0.0819±0.05　0.1158±0.06　0.1275±0.05　0.1334±0.06　0.1264±0.04　0.1187±0.04　0.0896±0.03丹參傳統(tǒng)飲片組　780　0.0188±0.02*0.0459 ±0.01*0.0639 ±0.01**0.0916 ±0.02　0.0814±0.01**0.0597 ±0.01**0.0371 ±0.01**0.0206 ±0.02**片等劑量組　780　0.0579丹參破壁飲9±0.03　0.087±0.03　0.1067±0.03　0.0909±0.03　0.0718±0.03**　0.0622±0.03**　0.0497±0.02**　0.0303±0.03**片高劑量組　390　0.0410丹參破壁飲　±0.02　0.0611±0.01　0.0762±0.02*　0.0623±0.02　0.0579±0.03**　0.0505±0.02**　0.0321±0.02**　0.0234±0.02**片中劑量組　195　0.0455丹參破壁飲　±0.04　0.0783±0.05　0.0789±0.02　0.0917±0.04　0.0977±0.03　0.0602±0.04**　0.0341±0.04**　0.0314±0.03**片低劑量組　97.5　0.0593丹參破壁飲　±0.02*　0.0421±0.03*　0.0414±0.04**　0.0653±0.05**　0.0558±0.06**　0.0620±0.04**　0.0386±0.04**　0.0254±0.02**

各組大鼠心肌缺血情況如表2所示，各給藥組大鼠的缺血區(qū)心肌質(zhì)量均較模型組明顯降低（P＜0.01）。

實驗結(jié)果表明，丹參傳統(tǒng)飲片和丹參破壁飲片對大鼠急性心肌缺血均有不同程度的保護作用，其中丹參破壁飲片低劑量組（94mg/kg）與丹參傳統(tǒng)飲片組（750mg/kg）藥效作用相似，劑量比為1∶8。

表2丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對心肌缺血區(qū)質(zhì)量的影響（n=8，±s）

表2丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對心肌缺血區(qū)質(zhì)量的影響（n=8，±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01。

組別　　劑量（mg/kg）　　缺血區(qū)質(zhì)重（g）正常組模型組丹參傳統(tǒng)飲片組丹參破壁飲片等劑量組丹參破壁飲片高劑量組丹參破壁飲片中劑量組丹參破壁飲片低劑量組———780 780 390 195 97.5 0.0002±0.0002**0.1647±0.06 0.0111±0.01**0.0168±0.02**0.0193±0.01**0.0525±0.03**0.0198±0.02**

3.2對急性血瘀大鼠血液流變學的作用：與正常組比較，血瘀模型組大鼠全血高切、中切、低切黏度、血漿黏度均明顯升高（P＜0.01），丹參傳統(tǒng)飲片和破壁飲片各組均能明顯降低血瘀大鼠的全血黏度及血漿黏度（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見表3。

與正常組比較，血瘀模型大鼠不同時間的血小板聚集率和最大聚集率均明顯升高（P＜0.01），丹參傳統(tǒng)飲片和破壁飲片各組均能降低凝血酶誘導的血小板聚集率（P＜0.01），結(jié)果見表4。

實驗結(jié)果表明，丹參傳統(tǒng)飲片及破壁飲片均有改善急性血瘀模型大鼠血液流變學的作用。

表3丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對大鼠血液黏度的影響（n=8，±s）

表3丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對大鼠血液黏度的影響（n=8，±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。

組別　　劑量mg/kg全血黏度血漿黏度高切（200/s）　　中切（100/s）　　低切（30/s）正常組模型組丹參傳統(tǒng)飲片組丹參破壁飲片等劑量組丹參破壁飲片高劑量組丹參破壁飲片中劑量組丹參破壁飲片低劑量組———780 780 390 195 97.5 4.91±0.25**8.53±0.52△△6.93±0.20**7.16±0.97**6.81±0.32**6.25±0.54**6.09±0.62**5.76±0.48**9.44±0.39△△8.44±0.74*7.86±1.04**8.17±0.56**7.25±0.33**6.83±0.71**7.10±0.73**9.94±0.29△△9.17±0.55*9.18±0.55**8.85±0.79**8.71±0.47**8.22±0.99**1.28±0.05**1.90±0.07△△1.76±0.04**1.72±0.06**1.61±0.05**1.60±0.06**1.60±0.12**

表4丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對凝血酶誘導大鼠血小板聚集的影響（n=8，±s）

表4丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對凝血酶誘導大鼠血小板聚集的影響（n=8，±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別　　劑量mg/kg不同時間血小板聚集率（%）　　最大聚集率（%）1min　3min　5min正常組模型組丹參傳統(tǒng)飲片組丹參破壁飲片等劑量組丹參破壁飲片高劑量組丹參破壁飲片中劑量組丹參破壁飲片低劑量組———780 780 390 195 97.5 33.48±6.73**56.16±1.49△△45.58±1.45**44.55±1.75**43.82±3.38**40.34±4.02**40.34±3.72**45.33±3.28**65.22±2.53△△47.88±2.82**47.72±2.16**45.22±3.71**47.84±4.58**44.13±3.64**50.32±4.25**72.61±2.76△△57.56±2.29**55.83±1.63**54.28±1.20**53.10±2.32**50.27±5.48**51.40±4.84**73.53±3.19△△58.52±2.64**56.25±1.88**55.06±1.22**53.54±2.67**50.77±5.50**

3.3急性毒性試驗：與對照組比較，丹參傳統(tǒng)飲片和破壁飲片灌胃給藥后，大部分動物暫時出現(xiàn)活動減少、神情倦怠、進食減少現(xiàn)象，除此以外未見其他明顯異常反應；給藥2h后，以上表現(xiàn)基本恢復正常。給藥2h后的觀察期間，動物的精神狀態(tài)良好，毛色光潔，活動自如，呼吸均勻，飲食量尚可，二便無異常，口鼻內(nèi)無異常分泌物，無動物死亡。給藥前和給藥后第3、5、7天小鼠的體重見表5，各組間小鼠體重無明顯差異。

試驗結(jié)束時處死小鼠，解剖后肉眼觀察主要臟器顏色及形態(tài)學改變，結(jié)果心、肝、脾、肺、腎、腸等主要臟器未見異常改變，表明丹參傳統(tǒng)飲片和破壁飲片以一日最大給藥量120g/kg灌胃，對小鼠均無明顯急性毒性產(chǎn)生。

表5丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對小鼠急性毒性反應的觀察結(jié)果（±s）

表5丹參破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對小鼠急性毒性反應的觀察結(jié)果（±s）

注：各組間體重無明顯差異。

組別　　動物數(shù)n死亡數(shù)n給藥前體重（g）給藥后3d體重（g）給藥后5d體重（g）給藥后7d體重（g）對照組丹參傳統(tǒng)飲片組丹參破壁飲片組10 10 10 000 19.3±0.7 19.4±0.7 19.1±0.8 22.8±2.1 22.5±1.9 23.1±2.1 24.7±2.7 25.0±3.1 25.7±3.3 28.1±3.4 29.6±2.5 30.2±3.2

4討論

丹參是常用的活血化瘀中藥，丹參及其化學成分具有抗心肌缺血和改善血液流變學等作用［7，8］，本研究采用大鼠急性心肌缺血模型和急性血瘀模型，評價比較丹參破壁飲片和傳統(tǒng)飲片在改善心肌缺血和血液流變學方面的藥效，同時初步考察丹參破壁飲片的急性毒性，為丹參破壁飲片這一新型飲片的有效性和安全性提供依據(jù)。

垂體后葉素能使冠狀動脈收縮，引起心肌供血不足［9］，同時收縮全身小血管，導致心臟負荷加重，造成心肌缺血，并在心電圖上出現(xiàn)T波抬升等表現(xiàn)。本研究采用舌下注射垂體后葉素造成大鼠急性心肌缺血模型，通過心電圖觀察T波抬升變化和采用NBT心肌染色法稱量心肌缺血部分的質(zhì)量評價藥物對心肌缺血癥狀的改善作用，實驗結(jié)果表明丹參破壁飲片和傳統(tǒng)飲片均能有效改善心肌缺血大鼠的心電圖異常并縮小心肌缺血范圍，丹參破壁飲片低劑量（94mg/kg）對心肌缺血大鼠的藥效作用即與丹參傳統(tǒng)飲片（780mg/kg）相似。

腎上腺素注射和冷水浸泡可致血管收縮、血流變緩從而形成血瘀的病理表現(xiàn)，本研究通過復制大鼠急性血瘀模型，測定血液黏度和血小板聚集率以評價藥物對血液流變學的改善作用，實驗結(jié)果表明丹參破壁飲片和傳統(tǒng)飲片均能明顯降低血瘀大鼠的全血黏度、血漿黏度及血小板聚集率，說明兩者均能顯著改善急性血瘀模型大鼠的血液流變學，較低劑量的丹參破壁飲片藥效與丹參傳統(tǒng)飲片相似。

丹參破壁飲片是由傳統(tǒng)飲片經(jīng)超微粉碎制備而成的新型飲片，由于將植物細胞壁破碎，可使存在于細胞壁中的主要有效成分更好地溶出釋放，同時提高藥物在胃腸道的分散度和溶出度，使藥物的藥效增強［10］。本研究表明，較低劑量的丹參破壁飲片對心肌缺血和血液流變學的改善作用與丹參傳統(tǒng)飲片相似，提示丹參破壁飲片的藥材利用率高于傳統(tǒng)飲片。

急性毒性試驗結(jié)果表明丹參傳統(tǒng)飲片和破壁飲片以一日最大給藥量120g/kg灌胃，對小鼠均無明顯急性毒性產(chǎn)生，提示丹參破壁飲片在應用中與傳統(tǒng)飲片具有相似的用藥安全性。

參考文獻

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中圖分類號：R285

文獻標識碼：B

文章編號：1672-8351（2016）07-0129-03

*通訊作者

Comparative Study of Effects between Ultrafine Granular Powder and Traditional Decoction Piece of Salvia miltiorrhiza Bge. on Experimental Myocardial Ischemia and Hemorheology and Their Acute Toxicity

Xu Jiyin1，2Yang Yingbao3Xu Jiangping3Wang Huiling1，2Peng Lihua1，2Chen Weixuan1，2Cheng Jinle1，2*（1.Key Laboratory of Herbal Ultrafine Granular Powder of Technology and Application of State Administration of Traditional Chinese Medicine，Zhongshan 528437，China；2.Zhongzhi Pharmaceutical Group Co.，Zhongshan 528437，China；3.Southern Medical University，Guangzhou 510515，China）

Abstract：Objective：To compare the difference of effects between ultrafine granular powder and traditional decoction piece of Salvia miltiorrhiza Bge.on improving myocardial ischemia and hemorheology and to compare their acute toxicity.Methods：Acute myocardial ischemia rat model was established by injected with pituitrin，on which effect between ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S.miltiorrhiza on acute myocardial ischemia was compared.Blood-stasis rat model was established and platelet aggregation was induced with thrombin，on which effect between ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S. miltiorrhiza on hemorheology was compared.Acute toxicity of ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S.miltiorrhiza on mice was compared with method of maximum dosage test.Results：Both ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S.miltiorrhiza inhibited the elevation of T wave in electrocardiogram of acute myocardial ischemia rats 3 min after injected with pituitrin （P＜0.01）.Both reduced the range of ischemic myocardia（P＜0.01）.Low dosage of ultrafine granular powder of S.miltiorrhiza showed similar effect on myocardial ischemia with traditional decoction piece.Both ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S. miltiorrhiza reduced blood viscosity and plasma viscosity in blood stasis rats（P＜0.05，P＜0.01）.Both reduced the platelet aggregation rate induced by thrombin（P＜0.01）.Neither mice administered with maximum dosage at 120 g/kg of ultrafine granular powder nor traditional decoction piece of S.miltiorrhiza showed acute toxicity response.Conclusion：Both ultrafine granular powder and traditional decoction piece of S.miltiorrhiza have protective effect on ischemic myocardia rats and improving effect on hemorheology in blood-stasis rats.Ultrafine granular powder of S.miltiorrhiza at lower dosage shows similar effect with traditional decoction piece.The safety of ultrafine granular powder of S.miltiorrhiza is similar with traditional decoction piece.

Key words：Salvia miltiorrhiza Broken pieces Traditional decoction pieces Acute myocardial ischemia Blood rheology Acute toxicity