馬永娟，王　紅，周　迪

(佳木斯市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江 佳木斯 154002)

?

HIV抗體檢測確證試驗結(jié)果分析①

馬永娟，王紅，周迪

(佳木斯市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江 佳木斯 154002)

摘要：目的：對本艾滋病確證實驗室2007～2015年檢測的我市507例HIV抗體待確證樣品的WB試驗的陽性、陰性、不確定結(jié)果分析，了解我市艾滋病流行現(xiàn)狀 HIV感染者人群分布，分析艾滋病病毒(HIV)抗體不確定結(jié)果的特點提出更加合理的處理方法，對陰性結(jié)果分析查找造成篩查假陽性的原因。方法:對初篩陽性血清用雙ELISA或ELISA和膠體金試驗復(fù)檢,任一復(fù)檢試驗陽性的血清再用WB試驗確證，對確證試驗結(jié)果不確定者進行隨訪復(fù)檢。結(jié)果:507例樣本經(jīng)WB確證397份HIV-1抗體陽性,不確定45份,陰性65份。397例確證試驗陽性標(biāo)本經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查79.8%(317/397)是經(jīng)男男性行為傳播。45例WB不確定樣本中要集中在孕產(chǎn)婦占33.3%(15/45)獻血員占22.2%(10/45)VCT占20%(9/45)，在隨訪的25例被檢測中有3例明確高危行為者隨訪4復(fù)檢進展為WB確證陽性，其余均為陰性。在WB結(jié)果陰性的65的樣本，采用ELISA+膠體金或雙ELISA復(fù)檢73.8%(48/65)結(jié)果為一陰一陽，并且ELISA的S/CO值在1～6之間。結(jié)論:性接觸傳播尤其是男男性接觸者(MSM)是我市報告HIV/AIDS的主要傳播途徑；不確定樣品主要集中在孕婦及獻血員及VCT人群多是非特異性免疫反應(yīng)，在低流行人群尤其孕產(chǎn)婦HIV抗體不確定樣本最終以陰性轉(zhuǎn)歸為主；膠體金和ELISA復(fù)檢可排除大部分初篩假陽性,但兩種復(fù)檢試驗均存在一定的假陽性，初篩實驗室應(yīng)嚴(yán)格進行質(zhì)量控制選用敏感性和特異性高、質(zhì)量穩(wěn)定的試劑。

關(guān)鍵詞：HIV抗體；確證試驗(WB)；不確定； 篩查試驗假陽性

HIV抗體檢測是診斷HIV感染及艾滋病病人(AIDS)的重要依據(jù), HIV抗體檢測的流程是對初篩試驗呈陽性反應(yīng)的樣品需要進一步做復(fù)檢試驗和確證試驗，復(fù)檢試驗應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復(fù)檢試驗[1]。艾滋病檢測篩查實驗室復(fù)檢判定為陽性反應(yīng)的樣品，確證實驗室可以直接進行確證試驗。確證試驗的結(jié)果分為陽性、陰性、不確定。對于WB不確定的結(jié)果要在四周后進行隨訪檢測?，F(xiàn)將本確證實驗室2007～2015年對佳木斯市轄區(qū)內(nèi)的確證檢測結(jié)果報道如下。

1.1標(biāo)本來源

佳木斯市轄區(qū)艾滋病篩查實驗室及篩查點送檢的初篩陽性經(jīng)復(fù)檢陽性需進行HIV抗體確證樣品。

1.2試劑

1.2.1篩查試劑：萬泰生物藥業(yè)生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)、珠海麗珠生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，韓國(SD)、英科新創(chuàng)膠體金快速檢測試劑。試劑有國家食品藥品監(jiān)督局注冊，批批檢合格，并在有效期內(nèi)使用。

1.2.2確證試劑:人類免疫缺陷病毒(HIV1+2)型抗體免疫試劑盒(免疫印跡法)，生產(chǎn)企業(yè)MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司。是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

1.3儀器

酶標(biāo)儀，AUTObioPHOMO洗板機， AUTObio iWO- Ⅳ 翹板式水平搖床，生物安全柜。

1.4方法

全市艾滋病實驗室送檢的復(fù)檢陽性樣品，由佳木斯疾病預(yù)防控制中心艾滋病確證實驗室進行WB確證試驗。確證結(jié)果的判定均按照《全國艾滋病年檢測技術(shù)規(guī)范》(2009版)規(guī)定并結(jié)合試劑說明書。

2結(jié)果

2.1佳木斯地區(qū)2007～2015年HIV抗體待確證標(biāo)本的WB檢測，見圖1。

507例樣本經(jīng)WB確證397份HIV-1抗體陽性,不確定45份,陰性65份。我市艾滋病病例報告數(shù)由2007年的10例上升到2015的115例，2015年全市發(fā)現(xiàn)報告HIV/AIDS 115例，比2014年增長47%。

圖1　佳木斯地區(qū) 2007～2015年WB統(tǒng)計結(jié)果

2.2佳木斯地區(qū)HIV1抗體陽性樣品來源

人群分布見圖2。

目前我市艾滋病疫情雖然仍處于低流行狀態(tài)，但總體上仍呈上升趨勢，性接觸傳播尤其是男男性接觸者(MSM)是我市報告HIV/AIDS的主要傳播途徑，其中男男同性性傳播近年來增長較為明顯。明確的MSM(項目)人群共檢測出陽性183例占陽性樣品的46.1%(183/397)，而所有病例經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查79.8%(317/397)是經(jīng)男男性接觸傳播。

圖2　佳木斯地區(qū)HIV1抗體陽性樣品來源 人群分布

2.3HIV抗體不確定結(jié)果人群分布及隨訪結(jié)果

在45例不確定樣品共有7種帶型其中P24占46.7%(21/45)GP160占28.9%(13/45)GP160+P24占11.1%(5/45)P24+P17占4.4%(2/45)GP160+GP120占4.4%(2/45)P66占2.2%(1/45)GP41占2.2%(1/45)。不確定結(jié)果發(fā)生的頻率在不同人群發(fā)生頻率不盡相同,主要集中在孕產(chǎn)婦占33.3%(15/45)獻血員占22.2%(10/45)VCT占20%(9/45)，在隨訪的25例被檢測中有3例明確高危行為者WB確證陽性，其余均為陰性。見圖3。

圖3　HIV抗體不確定結(jié)果人群分布及隨訪結(jié)果

2.4HIV抗體確證試驗(WB)陰性結(jié)果

在WB結(jié)果陰性的65的樣本中，初篩實驗室采用化學(xué)發(fā)光法(CLIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、膠體金篩查，結(jié)果陽性者用原有試劑加另外一種試劑或另外兩種不同廠家或原理的試劑復(fù)檢，73.8%(48/65)結(jié)果為一陰一陽，并且ELISA的S/CO值在1～6之間，CLIA的S/CO值<500。

3討論

我市艾滋病疫情雖然仍處于低流行狀態(tài)，但總體上仍呈上升趨勢。我市艾滋病病例報告數(shù)由2007年的10例上升到2015的115例，2015年全市發(fā)現(xiàn)報告HIV/AIDS 115例，比2014年增長47%。我市艾滋病感染者數(shù)量呈現(xiàn)快速增長趨勢,傳播途徑主要以男男同性傳播為主79.8%，應(yīng)做好高危人群的宣傳教育和干預(yù)工作。從WB陽性數(shù)據(jù)分析中我們注意到2015年血站系統(tǒng)檢測出HIV感染者10例遠(yuǎn)高于2007～2014年總和(6例)。發(fā)生HIV感染危險的獻血員比率明顯增高，為了對早期感染者進行確證保證受血者安全當(dāng)前血站系統(tǒng)已經(jīng)推廣使用更為快速、高效、敏感和特異Realtime-PCR檢測方法，用PCR法檢測HIV RNA可以大幅度縮短窗口期。另從WB陽性結(jié)果人群分布可以看出腫瘤結(jié)核病人占10.3%(41/397),表明這部分HIV感染者已進入艾滋病發(fā)病期引發(fā)結(jié)核及惡性腫瘤等疾病，因此全社會都要重視艾滋病篩查工作特別是發(fā)生高危行為的人群更要及早進行HIV抗體檢測，早發(fā)現(xiàn)早治療提高生存質(zhì)量，延長壽命。

一般認(rèn)為導(dǎo)致HIV抗體不確定的原因可能有兩個方面[2]，一是HIV早期感染，二是非特異性反應(yīng)。大量研究證明，不確定結(jié)果是早期HIV感染的可能性非常小，絕大多數(shù)都是非特異性反應(yīng)。本實驗室45例WB不確定者，只在1例有高危行為的獻血員和2例VCT中觀察到HIV抗體的陽轉(zhuǎn)。在不確定樣品7種帶型其中主要以P24占46.7%(21/45)和GP160占28.9%(13/45)為主。不確定結(jié)果主要集中在孕產(chǎn)婦占33.3%(15/45)獻血員占22.2%(10/45)VCT占20%(9/45)。孕產(chǎn)婦ELISA檢測與WB試驗陽性符合率僅為22.7%(5/22)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于一般人群，國內(nèi)尤向東[3]報道：一般人群中ELISA檢測與WB試驗陽性符合率89.93%。提示孕產(chǎn)婦HIV抗體篩查假陽性比較嚴(yán)重。婦女懷孕期間,體內(nèi)各項指標(biāo)的變化可能導(dǎo)致HIV抗體檢測出現(xiàn)不確定結(jié)果,排除了HIV感染高危因素孕產(chǎn)婦HIV抗體WB試驗不確定結(jié)果大多并非HIV窗口期感染而是非特異性免疫反應(yīng)所致。在低流行人群，HIV抗體不確定樣本最終以陰性轉(zhuǎn)歸為主[4]。我實驗室在3例WB不確定結(jié)果中發(fā)現(xiàn)在骨外傷患者初篩ELISA S/CO值>6同時膠體金試驗陽性，WB試驗僅出現(xiàn)GP160條帶2例隨訪兩次結(jié)果為陰性目前原因不清，希望臨床及實驗室引起重視。在疾病感染初期、自身免疫性疾病、懷孕、非特異性反應(yīng)、EB病毒等都可能引起HIV確證試驗結(jié)果不確定。對于WB結(jié)果不確定的病例要積極進行流行病學(xué)調(diào)查，提出醫(yī)學(xué)隨訪方案早日確診以便盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者，同時也盡早排除非HIV感染者，去除心理壓力。

WB確證陰性結(jié)果分析 ，造成WB確證陰性的原因是篩查試驗的假陽性和血清標(biāo)本的非特異性反應(yīng)，可能是試劑的選用、實驗室人員操作差異、篩查試劑與復(fù)檢試劑存在差異有關(guān)[5]，由于ELISA試驗的特點容易造成孔與孔之間的交叉污染，加試劑的不均一性，洗板不潔凈，標(biāo)本不合格，以及人體中一些含有針對HLA抗原的抗體等偶然誤差引起實驗結(jié)果假陽性[6]，近年由于化學(xué)發(fā)光法的使用使得篩查假陽性率有所提高據(jù)相關(guān)文獻報道雅培化學(xué)發(fā)光法HIV抗原抗體聯(lián)合檢測假陽性率(12.90%)較高[7]。HIV抗體篩查假陽性存在主客觀原因，實驗室應(yīng)采取措施最大限度地保證結(jié)果準(zhǔn)確，以及對檢測結(jié)果進行正確的解釋。在選用試劑時應(yīng)關(guān)注其性能，使用敏感性和特異性高、質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品。

參考文獻：

[1]中國疾病預(yù)防控制中心，全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009年版)

[2]Jackson JB.Human immunodeficiency virus-indeterminate Westernblot and abortive infection[J].Transfusion,1997,37:1-2

[3]尤向東，傅繼華，張靜，等.抗HIV1+2篩查試驗陽性與免疫印跡試驗對比結(jié)果分析[J].中國艾滋病性病，2005，11(5)：326-328

[4]朱厚宏，王晨笛，劉楊，等.孕產(chǎn)婦HIV抗體篩查陽性與免疫印跡試驗對比[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志,2011,27(2)：94

[5]季亞勇，尤鳳興，姜永.HIV抗體檢測篩查試驗假陽性原因分析[J].中國艾滋病性病，2008，14(2)：69

[6]陳遠(yuǎn)林，秦立新，張仁生.抗-HIV初篩試驗陽性結(jié)果分析[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，13(2)：284-286

[7]張曉紅，張倩，周學(xué)紅，等.雅培化學(xué)發(fā)光法在HIV篩查試驗中假陽性分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20(1)：55

作者簡介：①馬永娟(1974～)女，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，副主任檢驗技師。

中圖分類號：R512.91

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)04-0079-02

(收稿日期：2016-05-08)