于洋洋 ，張愛(ài)華，于海江，楊琳紅，于海蓮

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科，黑龍江 佳木斯 154003)

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鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中骨橋蛋白和p53的表達(dá)①

于洋洋 ，張愛(ài)華，于海江，楊琳紅，于海蓮

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要：目的：檢測(cè)骨橋蛋白(OPN)和P53蛋白在鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤(NIP)中的陽(yáng)性表達(dá)的情況，研討OPN、P53與NIP的有關(guān)機(jī)制及相互作用。方法：收集病理科46例NIP組織、18例鼻鱗癌(NSCC)組織切片，及30例正常下鼻甲組織作為對(duì)照，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法(IHC-P)檢測(cè)組織中OPN和p53的表達(dá)。結(jié)果：(1)NSCC組織中 OPN的表達(dá)水平為88.9%,高于鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤組織69.5%及正常下鼻甲組織10.0%，(2)p53在不同組織中的表達(dá)水平依次為94.4%，78.2%,13.3%,(3)兩者在NIP中陽(yáng)性表達(dá)成正相關(guān)性。結(jié)論： OPN和P53在正常下鼻甲、NIP、NSCC組織中陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，呈正相關(guān)性。二者在NIP組織中同時(shí)呈陽(yáng)性表達(dá)率較高，與NIP的發(fā)生發(fā)展存在較高的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：IHC-P；NIP；OPN；P53

NIP在頭頸部腫瘤中是比較常見(jiàn)的良性腫瘤，術(shù)后存在5%～47%復(fù)發(fā)率，多次手術(shù)不徹底的情況下，變?yōu)閻盒缘母怕蕿?%[1]。此疾病的具體發(fā)病機(jī)制及明確病因尚未完全清楚明白，有待研究[2]。大量實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)其病因與病毒感染，長(zhǎng)期的慢性炎癥刺激，以及長(zhǎng)期的過(guò)敏反應(yīng)等關(guān)系密切，然而通過(guò)有效手段治療可以降低復(fù)發(fā)及惡變率[3]。OPN及P53與多種腫瘤性疾病尤其是惡性腫瘤高度相關(guān)。實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)試骨橋蛋白和P53在不同分組中的陽(yáng)性率情況，探討OPN與P53在本病中的作用機(jī)制以及相關(guān)聯(lián)系。OPN在人類消化系統(tǒng)、女性生殖系統(tǒng)腫瘤疾病中有較高的陽(yáng)性率[4～6]。與腫瘤相關(guān)性密切。P53蛋白在正常分化細(xì)胞中陽(yáng)性率不高，甚至不出現(xiàn)，而趨向改變的細(xì)胞則有非常高的陽(yáng)性表達(dá)[7]。OPN和P53蛋白與腫瘤密切相連。通過(guò)IHC-P檢測(cè)OPN及P53在正常下鼻甲、NIP、NSCC組織中的陽(yáng)性率，并進(jìn)行分析。

1材料與方法

1．1材料

實(shí)驗(yàn)組:我院耳鼻咽喉科2008-07～2015-06的46例NIP病理組織。對(duì)照組: ①我院耳鼻咽喉科2013-12～2014-07的 30例正常下鼻甲組織。②我院耳鼻咽喉科2006-06～2015-04的18例NSCC組織。

1．2試劑

主要試劑: 實(shí)驗(yàn)所用抗體為來(lái)源于北京中杉生物技術(shù)公司的即用型小鼠抗人骨橋蛋白單克隆抗體、小鼠抗人 p53單克隆抗體，試劑盒為DAB顯色，即用型免疫組化 S -P 試劑盒等。

1．3方法

1．3．1實(shí)驗(yàn)方法:采用IHC-P用常規(guī)石蠟切片做OPN和P53的IHC-P檢測(cè)。陰性對(duì)照采用PBS 液，鏡下染色部位作為陽(yáng)性對(duì)照。

1．3．2結(jié)果判斷:采取3位病理醫(yī)師的顯微鏡觀察結(jié)果。通過(guò)定性及定量方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析計(jì)分。計(jì)算觀察到的染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目多少劃分：0分為≤10%;1分為11%～50%;2分為51%～75%;3分為>76%。細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度分類:0分為無(wú)色; 1分為黃色; 2分為棕黃色;3分為棕褐色。二項(xiàng)記分相乘，≤1記(-)，≥2記(+)，2記為弱 (+) ，3～4 記為中等 () ，5～6 記為強(qiáng) ()[8]。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)整理采取χ2和Spearman等級(jí)相關(guān)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)上以P<0．05作為差異有意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2．1OPN在NSCC、NIP、正常下鼻甲中的表達(dá)

OPN在組織中以細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)淡黃的、黃的、棕黃色的物質(zhì)為主。在18例NSCC組織中16例出現(xiàn)陽(yáng)性染色， 46例NIP組織中32例出現(xiàn)陽(yáng)性染色，30例正常組織中3例出現(xiàn)陽(yáng)性染色。NSCC、NIP、正常下鼻甲組織得出的數(shù)據(jù)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有意義(P<0．05)。見(jiàn)表1，圖1～2。

表1　OPN 在NSCC、NIP、正常下鼻甲組織中的表達(dá)

2.2P53在NSCC、NIP、正常下鼻甲中的表達(dá)

P53在組織中以細(xì)胞核呈現(xiàn)淡黃的、黃的、棕黃色的物質(zhì)為主。在18例NSCC組織中17例出現(xiàn)陽(yáng)性染色， 46例NIP組織中36例出現(xiàn)陽(yáng)性染色，30例正常組織中4例出現(xiàn)陽(yáng)性染色 。NSCC、NIP、正常下

鼻甲組織得出的數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有意義(P<0．05)。見(jiàn)表2，圖3～4。

圖1OPN在鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)(×400)

圖2　OPN在鼻鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(×400)

P53總例數(shù)陰性陽(yáng)性陽(yáng)性率(%)NSCC1811794.44NIP46103678.26正常下鼻甲3026413.33

圖3P53在鼻鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(×400)

圖4　P53在鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)(×400)

2.3NIP 中OPN和P53陽(yáng)性表達(dá)

OPN出現(xiàn)陽(yáng)性染色的32例NIP組織中，P53出現(xiàn)陽(yáng)性染色的為28例，在14例OPN未出現(xiàn)陽(yáng)性染色的NIP組織中，P53未出現(xiàn)陽(yáng)性染色的為6 例，NIP組織中OPN和P53共同表達(dá)陽(yáng)性的百分率水平比較高，進(jìn)行Spearman等級(jí)相關(guān)分析。得出rs=0.339，P=0.021<0.05故OPN和P53之間的表達(dá)呈正相關(guān)。見(jiàn)表3。

表3　NIP中OPN和P53表達(dá)相關(guān)性

3討論

P53一直以來(lái)被認(rèn)為是能夠調(diào)控癌基因，使其失活或者凋亡，但在各種腫瘤中卻有較高的陽(yáng)性表達(dá)。在P53 的研究歷史中，我們由最初認(rèn)為P53是癌基因到認(rèn)可P53是抑癌基也經(jīng)歷了漫長(zhǎng)的研究，Levine實(shí)驗(yàn)室[9]做出了巨大貢獻(xiàn)，證明了腫瘤細(xì)胞中P53蛋白來(lái)源于部分突變的原始P53基因，干擾了正常P53基因指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，或者使正常P53蛋白發(fā)揮不了其控制腫瘤，殺死腫瘤細(xì)胞的功能。人們重新認(rèn)識(shí)了P53基因,本實(shí)驗(yàn)所測(cè)得蛋白為突變P53后表達(dá)的蛋白，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，P53在正常下鼻甲、鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤、鼻鱗癌組織中陽(yáng)性率分別為13.33%、78.26%、94.44%,三者有著較高的陽(yáng)性率，推斷其與腫瘤性疾病息息相關(guān)。在很多疾病上尤其是惡性腫瘤中P53都呈高陽(yáng)性表達(dá)[10]。骨橋蛋白由最初的在骨組織中發(fā)現(xiàn)到目前與很多疾病尤其是腫瘤相關(guān)，骨橋蛋白的研究也有漫長(zhǎng)的歷史，OPN在腫瘤組織中出現(xiàn)陽(yáng)性染色百分比高，而正常細(xì)胞內(nèi)幾乎看不到陽(yáng)性染色情況，而且有許多實(shí)驗(yàn)證明OPN與腫瘤的侵襲、多器官傳播及復(fù)發(fā)有著密不可分的聯(lián)系[11～13]，本實(shí)驗(yàn)中OPN在正常下鼻甲、NIP、NSCC組織中陽(yáng)性率分別為10.00%、69.56%、88.89%，呈上升趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)中NIP組織中OPN陽(yáng)性染色百分比高達(dá)69.56%，P53呈陽(yáng)性表達(dá)占陽(yáng)性染色百分比高達(dá)78.26%，OPN、P53陽(yáng)性率為60.87%,相關(guān)系數(shù)為0.339，呈正相關(guān)性，有實(shí)驗(yàn)表明P53與OPN的表達(dá)有相關(guān)性，OPN是TP53的直接目標(biāo)，TP53能夠特異性結(jié)合OPN的啟動(dòng)因子，在很多癌細(xì)胞系中,可誘導(dǎo)OPN的mRNA表達(dá)[14]。NIP作為頭頸部腫瘤中值得重視的腫瘤，比較容易發(fā)生于反復(fù)鼻息肉手術(shù)史患者，常單側(cè)發(fā)病，多發(fā)生于鼻腔側(cè)壁粘膜組織，雖然為良性腫瘤但具有較強(qiáng)的局部侵蝕破壞能力，有惡變可能，對(duì)于該疾病已有許多相關(guān)致病因素的研究與實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)主要研究與其相關(guān)的兩個(gè)因子，為NIP的篩查、診斷、以及治療方法開(kāi)拓新的道路。

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基金項(xiàng)目:①佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào): LM2015_047。

作者簡(jiǎn)介:于洋洋(1988～) 女，黑龍江牡丹江人，在讀碩士研究生。 通訊作者:張愛(ài)華(1951～)女,黑龍江佳木斯人,碩士，主任醫(yī)師,教授,碩士研究生導(dǎo)師。 E-mail: 1113589500@ qq.com。

中圖分類號(hào)：R765.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1008-0104(2016)04-0050-02

(收稿日期：2015-12-09)