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        金蕎麥藥酒對膠原誘導關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

        2016-08-03 06:14:15萬進軍潘朝旺
        中國民族民間醫(yī)藥 2016年10期
        關(guān)鍵詞:藥酒雷公藤滑膜

        萬進軍 潘朝旺

        鄂州職業(yè)大學醫(yī)學院,湖北 鄂州 436000

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        金蕎麥藥酒對膠原誘導關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

        萬進軍潘朝旺

        鄂州職業(yè)大學醫(yī)學院,湖北鄂州436000

        【摘要】目的:觀察金蕎麥藥酒對膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠模型血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響。方法:將Wistar大鼠隨機分成6組,空白組、模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組,建立Ⅱ型膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠模型,檢測血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。結(jié)果:與空白組比較,模型對照組血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α明顯升高;與模型組比較,各給藥組的上述指標均得到改善。結(jié)論:金蕎麥藥酒治療類風濕關(guān)節(jié)炎的機制可能與降低IL-22、IL-18、TNF-α有關(guān)。

        【關(guān)鍵詞】金蕎麥藥酒;膠原誘導關(guān)節(jié)炎;白細胞介素-22;白細胞介素-18;腫瘤壞死因子-α

        金蕎麥別名苦蕎麥、蕎麥當歸、蕎麥三七、金鎖銀開、賊骨頭、鐵拳頭、土茯苓等;其性涼,味辛、苦,具有清熱解毒、活血化瘀、健脾利濕的作用。金蕎麥藥酒在民間用于治療類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)效果明顯,課題組前期研究也證明金蕎麥藥酒具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用[1],但尚未見關(guān)于抗RA作用的研究。實驗旨在研究金蕎麥藥酒對Ⅱ型膠原誘導關(guān)節(jié)炎模型(CIA)大鼠血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響,探討其抗RA免疫作用機制,為金蕎麥應用于RA提供理論依據(jù)。

        1儀器與材料

        1.1藥物雷公藤多苷片(批號:20131114,浙江得恩德制藥有限公司);金蕎麥藥酒,以金蕎麥根莖及塊根計,每毫升藥酒相當于0.4g原藥材,本院自制。

        1.2動物Wistar大鼠60只,體重(200±20)g,SPF級,雌雄各半,合格證號:SCXK(鄂)2011-0012,由三峽大學實驗動物中心提供。

        1.3試劑完全弗氏佐劑(FCA)、雞Ⅱ型膠原(CⅡ)由sigma 公司提供;白細胞介素-22(IL-22)、白細胞介素-18(IL-18)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測定試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。1.4儀器UV754紫外可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司);臺式冷凍離心機(上海安亭科學儀器公司)。

        2方法

        2.1動物造模及分組給藥隨機抽取10只大鼠,為空白組,其余50只建立Ⅱ型膠原誘導關(guān)節(jié)炎模型[2-3]。用0.2%醋酸將CⅡ溶解,使其濃度為2mg/ml,放置過夜(4℃條件下),與FCA按1∶1比例混合,在冰浴中乳化,得到CⅡ乳劑,對每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3點皮內(nèi)共注射0.4ml,在相同部位3點對空白組注射生理鹽水0.1ml。所有造模大鼠7d后加強免疫1次,即按原方法注射CⅡ乳劑0.2ml。將造模大鼠隨機分為5組,即模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組??瞻捉M,模型對照組于造模后給予生理鹽水15ml/(kg·d),雷公藤多苷組給予雷公藤多苷片0.03g/(kg·d),金蕎麥高、中、低劑量組分別給予金蕎麥藥酒5.40、2.70、1.35ml /(kg·d),相當于原生藥2.16、1.08、0.54g/(kg·d),連續(xù)給藥21d。

        2.2血清TNF-α、IL-22、IL-18的測定末次給藥2h后,將大鼠用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉,固定,腹總動脈取血,離心,制備血清,按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。2.3滑膜細胞TNF-α、IL-22、IL-18的測定取大鼠后肢右膝關(guān)節(jié),分離出滑膜,剪碎,用生理鹽水1∶20勻漿,按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

        3結(jié)果

        3.1對血清TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較,模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比,血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低,除低劑量組IL-22無明顯差異外,其他組別和指標差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

        組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水268.46±83.50**136.29±21.06**258.36±23.09**模型對照組生理鹽水473.54±102.69210.35±28.64365.31±35.60雷公藤多苷組0.03302.34±89.28**148.09±19.28**272.05±28.64**金蕎麥高劑量組2.16296.76±83.51**146.35±24.98**275.32±22.92**金蕎麥中劑量組1.08312.0±75.24**154.36±24.69**278.32±23.57**金蕎麥低劑量組0.54332.18±94.72*184.82±33.57296.12±38.38*

        注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        3.2對滑膜細胞TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較,模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比,血清TNF-α、 IL-22 、IL-18含量降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

        組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水37.4±12.5**22.8±3.5**15.3±2.0**模型對照組生理鹽水57.5±15.631.2±4.926.1±3.6雷公藤多苷組0.0342.3±13.2**24.5±5.3**17.0±2.6**金蕎麥高劑量組2.1641.7±15.1**24.3±4.7**17.3±2.4**金蕎麥中劑量組1.0843.0±13.4**26.3±3.6*18.5±2.9**金蕎麥低劑量組0.5447.1±14.2*26.8±4.7*19.1±3.5*

        注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        3討論

        RA是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。研究表明,NK細胞在RA發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[4],NK-22細胞是不同表型的NK細胞之一,RA患者血液和滑液中NK-22細胞明顯高于正常人[5]。IL-22是NK-22細胞分泌的細胞因子之一,能促進類風濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖,是促成纖維樣滑膜細胞增生的細胞因子[6],在RA的病理過程中發(fā)揮重要作用。IL-18作為一種新型IL家族促炎細胞因子,主要與IL-18受體結(jié)合發(fā)揮效應。實驗表明,RA患者血清IL-18明顯升高,其水平與病情呈正相關(guān)[7],提示IL-18參與RA病情的活動,其作用與促進T細胞增殖和NK細胞的細胞毒作用,誘導以Th1細胞為主的細胞免疫反應,使病變組織 Th1/Th2比例失衡有關(guān)[8]。TNF-α是一種免疫調(diào)節(jié)和前炎性因子,在病變關(guān)節(jié)中可促進前列腺素E2(PGE2)等多種炎癥介質(zhì)釋放,引起關(guān)節(jié)軟骨的吸收破壞,促進成纖維細胞的增生;且TNF-α常與IL-1β一起合成與釋放,是致病機制中一對重要的促炎癥細胞因子,參與了RA發(fā)生、發(fā)展的全過程。

        在RA患者病變關(guān)節(jié)滑膜內(nèi),巨噬細胞數(shù)量明顯增多,其不僅與關(guān)節(jié)疼痛數(shù)、壓痛數(shù)、血沉、C 反應蛋白等反應RA病情程度的指標呈明顯的正相關(guān),還與X線關(guān)節(jié)破壞的侵蝕積分和狹窄積分呈明顯的正相關(guān)[9],可能與其釋放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有關(guān)。

        本實驗研究表明,金蕎麥藥酒對CIA大鼠免疫功能有明顯影響,可降低血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α含量,這些可能是其治RA的作用機制之一。

        參考文獻

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        [3] 馬艷苗,王永輝,李艷彥,等. 風濕寧膠囊對膠原誘導性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細胞超微結(jié)構(gòu)及細胞凋亡相關(guān)基因表達的影響[J].中醫(yī)雜志,2013,54(4):326-328.

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        [7] 任敏,武加標,湯麗,等. 類風濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單核細胞TLR4的表達與血清IL-18水平變化的相關(guān)性研究[J].中華臨床免疫和變態(tài)反應雜志,2013, (1):22-26.

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        [9] 戴冽,湯美安,尹培達,等. 滑膜巨噬細胞與類風濕關(guān)節(jié)炎病情活動及關(guān)節(jié)破壞的相關(guān)性[J].中華風濕病學雜志,1999,3(4):229-231.

        基金項目:湖北省教育廳科學技術(shù)研究項目(B2014176);鄂州職業(yè)大學科研重點項目(2015zd06)。

        作者簡介:萬進軍(1971-),男,湖北鄂州人,副教授,主要從事藥學的教學與科研。

        【中圖分類號】R285.5

        【文獻標志碼】A

        【文章編號】1007-8517(2016)10-0016-02

        (收稿日期:2016.03.27)

        Influence of Fagopyrum Dibotrys Medicinal Liquor on IL-22,IL-18 andTNF-α of Collagen-induced Arthritis Model Rats

        WAN JinjunPAN Chaowang

        Ezhou Polytechnic,Ezhou 436000,China

        Abstract:Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL-22,IL-18 and TNF-αof collagen-induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random:blank group, model group,high dose fagopyrum dibotrys group, low dose fagopyrum dibotrys group,and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen-induced arthritis (CIA) was established. The IL-22,IL-18,TNF-α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL-22,IL-18,TNF-α were increased,compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL-22,IL-18,TNF-α.

        Key words:fagopyrum dibotrys medicinal liquor;collagen-induced arthritis;IL-22;IL-18;TNF-α

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