次仁旺姆

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗所,西藏　拉薩　850000

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民族醫(yī)藥

藏藥綠絨蒿的質(zhì)量標準研究

次仁旺姆

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗所,西藏拉薩850000

【摘要】目的：建立三種藏藥綠絨蒿的質(zhì)量標準。方法：考察藥材基源；采用顯微和薄層色譜法對樣品進行鑒別；采用高效液相色譜法測定木犀草素的含量：Waters Xselect C18 (250mm × 4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(55∶45)；檢測波長：350nm；進樣量10μl，流速為1.0ml/min。結(jié)果：將綠絨蒿的植物基源規(guī)定為罌粟科植物全緣綠絨蒿M.Integrifolia (Maxim.)Franch.、毛瓣綠絨蒿 M. torquata Prain.及五脈綠絨蒿 M. quintuplinervia Regel的干燥全草，并進行薄層檢測及含量測定；木犀草素線性范圍為32.811～656.280μg，R2=1,方法回收率為94.86%，RSD為1.27%。結(jié)論：制定了藏藥綠絨蒿的質(zhì)量標準，為該品種的質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。

【關鍵詞】綠絨蒿；高效液相色譜法；薄層色譜；木犀草素

綠絨蒿為藏族習用藥材，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·藏藥》第一冊[1]。藏藥綠絨蒿具有清熱，利尿，消炎，止痛等作用，用于治療肺炎，肝炎，肝與肺的熱癥，水腫。在《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·藏藥》第一冊上只有其性狀和顯微鑒別，無其他檢測項目，檢測方法有限，且植物的基源有些混用。對綠絨蒿質(zhì)量控制方法進行研究，以建立能有效控制其質(zhì)量的藥材標準。

1儀器與材料

1.1儀器Spectra system?液相色譜儀(Waters公司；Mettler XP205型電子天平(精密度為十萬分之一)；Mettler XP504電子天平(精密度為萬分之一)。

1.2材料木犀草素對照品(批號：111520-200504，中國生物制品檢定所)；對照藥材(取自西藏藥檢所標本室，經(jīng)格桑索朗主任藥師鑒定為全緣綠絨蒿)。乙腈、甲醇為色譜純，水為純凈水，其它試劑為分析純。10批綠絨蒿藥材為各地采集或收集。見表1。

表1　綠絨蒿樣品來源一覽表

2方法與結(jié)果

2.1基源衛(wèi)生部頒《藥品標準》藏藥中，綠絨蒿為罌粟科植物全緣綠絨蒿Meconopsisintegrifolia(Maxim.) Franch.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel、長葉綠絨蒿M.LancifoliaFranch.等的干燥全草。

據(jù)本課題組在西藏，青海和云南等地實際樣品采集過程中發(fā)現(xiàn)綠絨蒿藥用來源主要為全緣綠絨M.integrifolia(Maxim.) Franch.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel。后經(jīng)文本考證[2-4]，長葉綠絨蒿主要分布于東北和華北地區(qū)，藏醫(yī)臨床較少用。西藏藏醫(yī)臨床使用較多為全緣綠絨蒿及毛瓣綠絨蒿，青海、云南等藏醫(yī)臨床使用較多為五脈綠絨蒿。故將綠絨蒿的植物基源規(guī)定罌粟科植物全緣綠絨蒿M.Integrifolia(Maxim.)Franch.、毛瓣綠絨蒿M.torquataPrain.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel的干燥全草。

2.2顯微鑒別采用常規(guī)生藥鑒定方法，分別對上述樣品粉末制片觀察并對其進行了顯微照相。主要特征如下：

2.2.1全緣綠絨蒿粉末呈淺橙黃色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至45μm，可見圓形壁孔。導管較多見，直徑約至15μm，單個，或數(shù)個結(jié)合，多碎斷，具梯紋、網(wǎng)紋、紋孔排列整齊?；ǚ哿６嘁?，圓球形，直徑80μm，棕黃色，壁較厚，表明梳稀疣狀突起。見圖1。

2.2.2五脈綠絨蒿粉末灰綠色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至75μm，可見圓形壁孔。導管多螺紋,亦見網(wǎng)紋及環(huán)紋,直徑約至15μm。花粉粒多見，圓球形，直徑約至50μm，棕黃色，壁薄，表明紋理狀。氣孔不定式，副衛(wèi)細胞4～5個。

導管　　 　　氣孔　　　表皮毛　　　花粉粒圖1　全緣綠絨蒿的顯微鏡特征

2.2.3毛瓣綠絨蒿粉末淺綠色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至75μm，長至750μm，可見圓形壁孔。導管多為螺紋和梯紋，直徑約至15μm。花粉粒多見，圓球形，直徑約至50μm，棕黃色，壁較厚，表明緊密疣狀突起。氣孔不定式，副衛(wèi)細胞4～5個。

2.3薄層色譜鑒別

2.3.1供試品溶液的制備取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，超聲處理(功率200 W，頻率40kHz)兩次，每次30min，過濾，合并濾液，濃縮并定容至10ml，即得。

2.3.2對照藥材溶液的制備另取綠絨蒿對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

2.3.3薄層色譜法按照2010版中國藥典一部附錄VI B試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠G薄層板上。以環(huán)己烷-醋酸乙酯(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

1　　2 　3　　4 　5　　6 　7　　8 　9 　10 　111～10綠絨蒿樣品；11綠絨蒿對照藥材圖2　綠絨蒿的薄層鑒別

3含量測定

3.1色譜條件色譜柱：Waters Xselect C18 (250 mm × 4.6 mm, 5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(55∶45)；檢測波長：350nm；進樣量10μl；流速為1.0ml/min；用紫外檢測器檢測。在此條件下，木犀草素和其它組分均能達到基線分離。供試品中木犀草素保留時間與對照品一致。見圖3。

3.2供試品溶液的制備取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)兩次，每次30min，過濾，合并濾液，濃縮并定容至10ml，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

圖3　樣品的HPLC色譜圖

3.3對照品溶液的制備取木犀草素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

3.4線性范圍的考察精密吸取對照品溶液各1、2、4、8、16、20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積為縱坐標，木犀草素量(μg)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=4021.6X+7903.7，R2=1(n=6)。結(jié)果表明：木犀草素在32.811～656.280μg之間與峰面積線性關系良好。見圖4。

圖4　木犀草素標準曲線

3.5精密度試驗精密吸取對照品溶液(32.814μg/ml )10μl，注入液相色譜儀，共6次，記錄色譜圖，6次測定值的相對標準偏差低于2%，表明該方法精密度良好。

3.6穩(wěn)定性實驗將新配制的供試品溶液，在上述色譜條件下在0、1、3、8、15、24h測定測得木犀草素的峰面積，計算其RSD。結(jié)果表明：在24h內(nèi)，該方法具有較好的穩(wěn)定性。見表2。

3.7加樣回收試驗取已知含量的供試品(木犀草素的含量為0.306mg/g)6份，分別精密加入對照品溶液(0.9115mg/ml)0.5ml，再照供試品溶液的制備法提取，按確定的測定方法進行測定，計算回收率。結(jié)果表明：平均回收率為94.86%，RSD為1.27%，表明該方法回收率良好。見表3。

3.8樣品測定取所收集的10批樣品， 按上述提取和色譜條件，對10批次的綠絨蒿進行了含量測定，求得各樣品中木犀草素的含量。，見表6。

表2　穩(wěn)定性考察結(jié)果

表3　木犀草素加樣回收試驗結(jié)果

表4　10批供試品測定結(jié)果　(n=2)

4討論

4.1從供試品的測定結(jié)果可以看出,綠絨蒿中木犀草素含量相差10倍多，若按以木犀草素含量平均值下浮20%制定其含量下限，西藏、云南、青海三地的一半綠絨蒿都不合格，容易造成資源的浪費。為了很好的控制藥物質(zhì)量，保護藥材資源，故規(guī)定綠絨蒿中木犀草素(C15H10O6)的含量暫定為：本品每克含木犀草素(C15H10O6)不得少于0.050mg。

4.2 在質(zhì)量標準研究中，新增了【檢查】項下的水分、總灰分和酸不溶性灰分的檢查以及【浸出物】等項，在這里不再一一列出。

4.3實驗用的樣品基源有罌粟科植物全緣綠絨蒿、毛瓣綠絨蒿及五脈綠絨蒿。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)這三種綠絨蒿在薄層鑒別和含量測定中，實驗結(jié)果均一致，說明本質(zhì)量標準研究適用于這三種綠絨蒿的檢測。

4.4經(jīng)過反復的試驗，薄層色譜行為的重現(xiàn)性良好，專屬性強， Rf值適中，分離效果好，因此可以將此方法定為綠絨蒿藥材的定性鑒別。

4.5將木犀草素對照品甲醇溶液在200～400nm內(nèi)進行全波長掃描，測得其在349.4nm 有最大吸收。且對照品色譜峰與其它峰達到良好的基線分離，雜質(zhì)干擾少，峰形好。

參考文獻

[1] 中國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準[S].藏藥(第一冊).1995:98-99.

[2] 羅達尚,孫安玲,夏光成.青藏高原藏藥-綠絨蒿屬植物資源初探[J].中草藥,1984,15 (8): 23-24.

[3] 楊永昌. 藏藥志[M]. 西寧: 青海人民出版社,1991：465-468.

[4] 中華本草編委會.中華本草(藏藥卷)[M].上海:上?？萍汲霭嫔?2002：101-102；169.

作者簡介：次仁旺姆，女，主管藥師，主要從事藥品檢驗及藏藥標準提高工作。

【中圖分類號】R29

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)11-0001-03

(收稿日期：2016.03.29)