陳倩倩　朱永剛　馮　麗

PTEN基因甲基化及其表達(dá)異常與胃癌的關(guān)系分析

陳倩倩朱永剛馮麗

【摘要】目的探討PTEN基因甲基化及其表達(dá)異常與胃癌的關(guān)系。方法從我院選取120例胃癌患者作為臨床研究對(duì)象。對(duì)患者PTEN基因甲基化及其表達(dá)異常情況進(jìn)行分析，并探討PTEN基因甲基化以及PTEN基因表達(dá)異常與胃癌的關(guān)系。結(jié)果胃癌組織表達(dá)呈陽性的患者例數(shù)，多于陰性的患者例數(shù)，同時(shí)，癌旁正常組織表達(dá)呈陽性的患者少于陰性患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論胃癌患者PTEN基因和表達(dá)異常情況都與癌癥組織的啟動(dòng)子區(qū)甲基化有較大關(guān)系，是患者胃癌發(fā)生和發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的原因之一。

【關(guān)鍵詞】胃癌；PTEN基因甲基化；表達(dá)異常

Objective To probe into the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and gastric cancer.Methods 120 cases of patients with gastric cancer from our hospital were selected as the objects of clinical study.The methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene in patients was analyzed，and the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and the gastric cancer was discussed and investigated.Results Gastric cancer tissue expression positive in patients was significantly more than the negative patients，at the same time，the adjacent normal tissue expression positive was significantly less than the negative patients，the difference was significantly different（P＜0.05）. Conclusion The PTEN gene as well as its abnormal expression in gastric cancer patients was greatly related to the methylation in the promotor region of the gastric cancer tissue，which was one of the reasons accounting for the genesis，development and metastasis of gastric cancer in patients.

【Key words】Gastric cancer，PTEN gene methylation，Abnormal expression

臨床研究發(fā)現(xiàn)，胃癌發(fā)病有家族易感性，即同一家族中胃癌發(fā)病率高于散發(fā)人群，且發(fā)病年齡較輕，最近文獻(xiàn)將其稱之為“遺傳性癌癥綜合征”。人體內(nèi)第十號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因PTEN是臨床癌癥治療研究中發(fā)現(xiàn)的首個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因［1-2］。PTEN正常的表達(dá)情況下，腫瘤細(xì)胞在它的影響下無法正常生長(zhǎng)，主要是由于腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)被動(dòng)抑制性變化，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡，同時(shí)PTEN還參與細(xì)胞周期的調(diào)控以及抑制細(xì)胞的粘附及腫瘤轉(zhuǎn)移的功能［3-4］。選取本院2011年6月～2014年6月的部分胃癌患者，對(duì)PTEN基因甲基化及其表達(dá)異常與胃癌的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)研究，現(xiàn)將研究過程報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

自2011年6月～2014年6月，在我院選取120例胃癌患者作為臨床研究對(duì)象，女性40例，男性80例，年齡在28～62歲，平均年齡為（40.23±18.95）歲，患者平均體質(zhì)量為（56.82±9.56）kg，平均身高為（164.45±8.15）cm。120例患者中初中學(xué)歷及以下有40例，高中學(xué)歷55例，大專及以上學(xué)歷25例。所有患者均符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，平均病程為（2.25±1.12）年。所有參與本次實(shí)驗(yàn)的患者對(duì)本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目有足夠的了解，均屬于自愿行為，同時(shí)簽署實(shí)驗(yàn)相關(guān)自愿協(xié)議。為貫徹倫理學(xué)原則，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中，所有患者均可以隨時(shí)退出。以上所有患者在一般資料方面，如性別、年齡和文化程度以及病程等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2方法

具體方法為：首先切取患者癌癥組織標(biāo)本和非癌癥組織標(biāo)本，離體后立即放入液氮，然后放進(jìn)-70℃的冷藏庫進(jìn)行保存。免疫組化：PTEN單克隆抗體4℃過夜孵育，PBS沖洗3次，5 min/次。生物素標(biāo)記的鼠抗人?gG室溫孵育20 min，PBS沖洗3次，5 min/次。滴加SABC室溫孵育20 min后PBS充分沖洗。DAB顯色，蘇木素染色，封片，光鏡下觀察［5］。PTEN異常甲基化檢測(cè)：兩份標(biāo)本均使用蛋白酶K-苯酚抽提法抽提總DNA，然后對(duì)DNA進(jìn)行純化，同時(shí)使用亞硫酸氫鹽修飾，最后進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)觀察?；颊甙┌Y組織標(biāo)本上游引物和下游引物確定后，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為71 bp。患者非癌癥組織標(biāo)本DNA上游引物和下游引物確定后，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為162 bp。引物各為0.4μg，在94℃環(huán)境下放置5 min預(yù)變性，然后開始35個(gè)循環(huán)，循環(huán)為94℃30s-57℃30S-72℃30 S，最后于72℃延伸5 min，最后在4℃環(huán)境下保存。PCR產(chǎn)物使用含量為2%的瓊脂糖凝膠電泳后，對(duì)條帶進(jìn)行觀察［6］。

表1　患者PTEN基因的表達(dá)情況n（%）

1.3觀察指標(biāo)

甲基化陽性：U引物未擴(kuò)增出條帶，而M引物擴(kuò)增出71 bp的條帶。甲基化陰性：M引物未擴(kuò)增出條帶，U引物擴(kuò)增出162 bp的條帶。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)使用SPSS 10.0軟件分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）形式表示，用χ2檢驗(yàn)。可信區(qū)間以95%作為標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

根據(jù)對(duì)患者基因表達(dá)情況的觀察可知，胃癌組織表達(dá)呈陽性的有72例，多于陰性患者48例，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=100.52；P＜0.05）；同時(shí)，癌旁正常組織表達(dá)呈陽性的患者僅有4例，呈陰性的有116例，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.67；P＜0.05），詳見表1。

3討論

PTEN具有抑制生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并參與細(xì)胞周期的調(diào)控以及抑制細(xì)胞的粘附及腫瘤轉(zhuǎn)移的功能，自其1997年發(fā)現(xiàn)以來就成為研究的熱點(diǎn)［7］。研究PTEN的表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化的關(guān)系及作用機(jī)制也將有利于我國(guó)胃癌發(fā)病機(jī)制的研究［8］。PTEN的異常表達(dá)與胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展生物學(xué)行為和預(yù)后有密切的關(guān)系。研究結(jié)果顯示胃癌組織表達(dá)呈陽性的患者多于陰性的患者例數(shù)，同時(shí)，癌旁正常組織表達(dá)呈陽性的患者少于陰性患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究通過檢測(cè)PTEN在胃癌組織和非胃癌組織中的表達(dá)，已明確PTEN可作為胃癌的檢測(cè)項(xiàng)目之一。

綜上所述，胃癌患者PTEN基因和表達(dá)異常情況都和癌癥組織的啟動(dòng)子區(qū)甲基化有關(guān)系，是患者胃癌發(fā)生和發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的原因之一。

參考文獻(xiàn)

［1］梁旭東，杜煥社，史曉鋒.Survivin、PTEN在胃癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.中國(guó)醫(yī)師雜志，2009，11（7）：901-903.

［2］葉新青，覃思繁，陳發(fā)龍.生存素和磷酸酶基因在胃癌中的表達(dá)［J］.中國(guó)基層醫(yī)藥，2010，17（12）：1587-1589.

［3］葛恒發(fā).胃癌及癌前病變組織中survivin、PTEN蛋白的表達(dá)變化及其與HP感染的相關(guān)性［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（18）：62-63.

［4］孫波.HP相關(guān)性胃病變組織Survivin和VEGF的表達(dá)及其意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2010，17（8）：571-573.

［5］張芬，王志紅，趙敏，等.良惡性胃潰瘍組織中PTEN、survivin的表達(dá)及意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013，29（2）：167-170.

［6］鹿強(qiáng)，臧愛民，馮樹明.PTEN和P27kip1蛋白在胃癌及癌前病變中的表達(dá)和意義［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42（5）：508-510.

［7］王志紅，鮑德明，石振旺，等.潰瘍型胃癌和癌前病變中PTEN、Survivin的表達(dá)及臨床意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2015，31（10）：1153-1156.

［8］甘偉平，羅陳飄，陳喜志，等.抑癌基因PTEN和p53在胃癌中的表達(dá)及意義［J］.中華實(shí)用診斷與治療雜志，2016，30（1）：68-70.

【中圖分類號(hào)】R735.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）11-0186-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.11.127

基金項(xiàng)目：吉林省衛(wèi)生廳課題。課題名稱：抑癌基因PTEN的表達(dá)及啟動(dòng)子甲基化與胃癌遺傳易感性的相關(guān)性研究。課題編號(hào)（20122113）

作者單位：吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院放療科，吉林長(zhǎng)春130033

Analysis of Methylation of PTEN Gene and Abnormal Expression and its Relationship With Gastric Cancer

CHEN Qianqian ZHU Yonggang FENG Li Department of Radiotherapy，China and Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun Jilin 130033，China

【Abstract】