高　磊　胡揚喜　尹寧偉　劉寒松　李德宇

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院胃腸外科，河南　鄭州　450007)

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大腸癌組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1、缺氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長因子的表達及其臨床意義

高磊胡揚喜尹寧偉劉寒松李德宇1

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院胃腸外科，河南鄭州450007)

〔摘要〕目的探究大腸癌組織中轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達及其臨床意義。方法隨機選取2010年5月至2012年5月住院治療的大腸癌患者的癌組織(大腸癌組)和癌旁組織(癌旁組)各102例，對比分析兩組TGF-β1、HIF-1α和VEGF的表達情況及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果大腸癌組TGF-β1、HIF-1α和VEGF總表達陽性率均顯著高于癌旁組(P<0.05)；不同TNM分期和浸潤深度的TGF-β1表達陽性率差異顯著(P<0.05),不同TNM分期、分化程度、浸潤深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移的HIF-1α和VEGF表達陽性率差異顯著(P<0.05)；TGF-β1、HIF-1α均與VEGF表達呈正相關(guān)(r=0.231、0.462,P<0.05)；HIF-1α和VEGF表達與患者預(yù)后密切相關(guān)，且HIF-1α和VEGF陽性表達者的生存時間顯著低于陰性者(P<0.05)。結(jié)論大腸癌組織中TGF-β1、HIF-1α和VEGF的表達有所上升，且表達水平與腫瘤的臨床病理參數(shù)以及后期預(yù)后密切相關(guān)，三者聯(lián)合檢測對判斷腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)測預(yù)后有一定的臨床指導(dǎo)意義。

〔關(guān)鍵詞〕大腸癌；轉(zhuǎn)化生長因子-β1；缺氧誘導(dǎo)因子-1α；血管內(nèi)皮生長因子

大腸癌的發(fā)生與飲食、大腸處疾患、遺傳因素以及其他因素密切相關(guān)〔1～3〕。且多數(shù)患者在確診時已處于晚期。本文旨在分析癌組織和癌旁組織中轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達以及三者表達與腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的聯(lián)系及其在大腸癌診斷中的價值和作用。

1資料和方法

1.1一般資料隨機選取2010年5月至2012年5月我院病理科診斷為大腸癌患者的組織樣本102份作為大胸癌組，其中女37例，男65例，年齡30～80歲，平均(56.45±13.68)歲；納入標準：病理學(xué)診斷為結(jié)腸或直腸癌患者；排除標準：有大腸癌家族史、炎癥性腸病、功能性腹痛以及既往存在大腸腺瘤或大腸癌史。其中腫瘤直徑<5 cm 36例，≥5 cm 66例；腫瘤TNM分期〔4〕：Ⅰ和Ⅱ期43例，Ⅲ和Ⅳ期59例；低分化64例、中高度分化38例；腫瘤僅浸潤黏膜及黏膜下層37例，浸潤漿膜及肌層65例；存在淋巴轉(zhuǎn)移78例，無轉(zhuǎn)移24例。另從各癌組織邊緣5 cm〔5〕之外的組織中切取102例癌旁組織樣本作為癌旁組。所有樣本在獲取時患者均未接受過任何的化療和放射治療，且患者家屬知情同意。

1.2TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達檢測

1.2.1主要儀器和試劑儀器：QP石蠟切片機(常州市郝思琳醫(yī)用儀器有限公司)、電子顯微鏡(上海長方光學(xué)儀器廠)。試劑：PBS、山羊血清封閉液、生物素化二抗、鼠抗人TGF-β1抗體、鼠抗人HIF-1α抗體、鼠抗人VEGF抗體、DAB 顯色試劑盒、SABC 試劑盒，均來自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.2.2染色及結(jié)果判定采用免疫組化法〔6〕檢測癌組織和癌旁組織樣本中TGF-β1、HIF-1α和VEGF的表達，樣本經(jīng)染色、顯色、清洗、分化、脫水、封固后置于顯微鏡下觀察，TGF-β1表達陽性表現(xiàn)為細胞呈現(xiàn)清晰棕褐色或棕色，HIF-1α表達陽性表現(xiàn)為細胞核和(或)細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，VEGF表達陽性表現(xiàn)為細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。在10個高倍鏡(400倍)下觀察視野內(nèi)1 000個細胞的陽性情況，計算表達陽性細胞數(shù)目在所有觀察細胞數(shù)目中的百分比，根據(jù)陽性百分比判斷陽性結(jié)果〔7〕：若細胞無著色或陽性百分比低于5%，即為陰性；其余即為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS20.0軟件進行χ2分析、Pearson相關(guān)分析、Log-rank 時序檢驗。

2結(jié)果

2.1兩組TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達比較大腸癌組和癌旁組TGF-β1總表達陽性率分別為63.73%(65/102)和12.75%(13/102)，HIF-1α總表達陽性率分別為60.78%(62/102)和22.55%(23/102)，VEGF總表達陽性率分別為65.69%(67/102)和14.71%(15/102)，大腸癌組TGF-β1、HIF-1α和VEGF總表達陽性率均顯著高于癌旁組(P<0.05)。

2.2TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系不同TNM分期和浸潤深度的TGF-β1表達陽性率差異顯著(P<0.05),不同TNM分期、分化程度、浸潤深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移的HIF-1α和VEGF表達陽性率差異顯著(P<0.05)；不同性別、年齡和腫瘤直徑的TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達陽性率均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達相關(guān)性分析TGF-β1、HIF-1α均與VEGF表達呈正相關(guān)(r=0.231、0.462,P<0.05)，而TGF-β1與HIF-1α無明顯相關(guān)性(r=0.003,P>0.05)。

2.4TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達對患者預(yù)后的影響對102例患者，從2010年隨訪至2015年5月，失訪16例，截尾21例。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIF-1α和VEGF表達與患者預(yù)后密切相關(guān)，且HIF-1α和VEGF陽性表達者的生存時間顯著低于陰性者(P<0.05)。

表1　TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3討論

近年來大腸癌的細胞信息生物學(xué)研究在腫瘤機制研究中所占的地位不斷提升，為大腸癌的臨床診治提供了科學(xué)依據(jù)。腫瘤的發(fā)生一般均存在細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)異常、缺氧、新生血管生成等變化，其中信號傳導(dǎo)異常中最為常見的就是TGF-β信號通路改變〔8〕。實驗研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β信號通路中只要有任意一個環(huán)節(jié)發(fā)生異常，都可觸發(fā)腫瘤的產(chǎn)生，同時導(dǎo)致腫瘤上皮TGF-β亞型的表達顯著上升。TGF-β1是眾多TGF-β亞型的一種，體內(nèi)多種正常細胞均可分泌產(chǎn)生，在體內(nèi)表達含量一般較低。其生物學(xué)功能較為復(fù)雜,目前研究發(fā)現(xiàn)其對細胞增殖分化有著雙重調(diào)節(jié)作用,但此因子在腫瘤細胞(特別是惡性腫瘤細胞)中存在過度表達。有報道發(fā)現(xiàn)，TGF-β1信號通路可促進腫瘤的進展，加快其惡化程度和侵襲能力〔9〕。惡性腫瘤生長和浸潤過程中因細胞生長增殖較快、細胞供血不足常伴隨缺氧的產(chǎn)生，細胞長期處于低氧狀態(tài)易引起HIF-1α的過度表達，HIF-1α是HIF-1惟一的氧調(diào)節(jié)亞單位，可決定HIF-1的生物學(xué)活性，HIF-1α表達增加可誘導(dǎo)腫瘤細胞內(nèi)VEGF和促進糖酵解相關(guān)酶的表達和活性，增加腫瘤部位血供和能量供應(yīng)，改善腫瘤細胞的缺氧狀態(tài)和能量缺損，促進腫瘤細胞的生長和浸潤〔10〕。HIF-1α和VEGF在癌癥腫瘤細胞進展過程中具有相輔相成的作用，VEGF是垂體細胞培養(yǎng)液中的一種糖基化多肽因子，在腫瘤發(fā)生過程中該因子大量分泌，其主要功能在于調(diào)節(jié)和促進腫瘤細胞內(nèi)新生血管的生成。腫瘤的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移過程中離不開血管的形成，而新生血管的生成受到體內(nèi)多種血管抑制因子和生成因子的雙向調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤生長過程中?？砂橛蠽EGF的高度表達，而VEGF具有促進血管內(nèi)皮細胞遷移增殖、刺激血管生成、促進基質(zhì)的降解、增加微小血管的通透性等多重作用〔11〕。

本研究結(jié)果與既往研究結(jié)果相似〔12〕，提示腫瘤組織中存在TGF-β1、HIF-1α和VEGF高表達，因為這種高表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，TGF-β1、HIF-1α和VEGF水平的升高會促進癌癥腫瘤細胞的生長，導(dǎo)致大腸癌的發(fā)生和發(fā)展。TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展、增殖和浸潤過程有著密切聯(lián)系。從與預(yù)后的相關(guān)性來看，考慮TGF-β1、HIF-1α和VEGF表達有著密切的關(guān)聯(lián)，對患者預(yù)后有著較好的指導(dǎo)作用。

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〔2015-10-23修回〕

(編輯滕欣航)

通訊作者：李德宇(1963-)，男，博士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事肝膽胰方面的研究。

〔中圖分類號〕R735.34

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2953-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.061

1河南省人民醫(yī)院肝膽胰外科

第一作者：高磊(1979-)，男，新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院在讀碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤方面的研究。