李　玲

(烏魯木齊市第四人民醫(yī)院睡眠科，新疆　烏魯木齊　830000)

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羅漢果提取物對負(fù)重游泳訓(xùn)練大鼠睪丸組織細(xì)胞色素C氧化酶7A2表達(dá)的影響

李玲

(烏魯木齊市第四人民醫(yī)院睡眠科，新疆烏魯木齊830000)

〔摘要〕目的探討羅漢果提取物對負(fù)重游泳訓(xùn)練大鼠物質(zhì)代謝及大鼠睪丸組織細(xì)胞色素C氧化酶7A2(Cox7A2)表達(dá)的影響。方法選擇雄性Wistar大鼠60只作為研究對象，分成兩組，各30只。對照組：采取負(fù)重游泳訓(xùn)練，時間為8 w。觀察組：采取負(fù)重游泳訓(xùn)練，時間為8 w，同時對大鼠進(jìn)行羅漢果提取物灌胃。結(jié)果干預(yù)8 w后，觀察組大鼠力竭游泳時間、睪酮水平、皮質(zhì)酮水平(P<0.01)。肝糖原儲量、肌糖原儲量血紅蛋白水平均高于對照組(均P<0.01)。觀察組血尿氮素水平低于對照組(P<0.01)。觀察組Cox7A2蛋白相對表達(dá)量低于對照組(P<0.05)。結(jié)論負(fù)重游泳訓(xùn)練大鼠表現(xiàn)為Cox7A2表達(dá)明顯升高，羅漢果提取物能夠顯著提高大鼠的抗運(yùn)動疲勞能力，并降低大鼠睪丸組織Cox7A2蛋白的表達(dá)。

〔關(guān)鍵詞〕負(fù)重游泳訓(xùn)練；羅漢果提取物；力竭游泳時間；睪酮；皮質(zhì)酮；細(xì)胞色素C氧化酶7A2

細(xì)胞色素C氧化酶，可把呼吸底物的電子經(jīng)過細(xì)胞色素系統(tǒng)直接傳遞給分子態(tài)氧〔1〕。文獻(xiàn)表明，細(xì)胞色素C氧化酶7A2(Cox7A2)在老年人睪丸組織顯著上調(diào)〔2〕。長時間的運(yùn)動訓(xùn)練致機(jī)體內(nèi)抗氧化酶類減少，影響心臟的正常生理功能〔3〕，還可能會引起運(yùn)動性低血睪酮癥，導(dǎo)致機(jī)體的運(yùn)動功能嚴(yán)重削弱。文獻(xiàn)顯示〔4〕，羅漢果提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性。研究探討羅漢果提取物對負(fù)重游泳訓(xùn)練大鼠物質(zhì)代謝及大鼠睪丸組織Cox7A2表達(dá)的影響。

1資料與方法

1.1動物雄性Wistar大鼠60只，隨機(jī)進(jìn)行分組，每組30只。其中對照組大鼠體重183～241〔平均(205.9±23.5)〕g。鼠齡5～7 w〔平均(6.1±1.5)〕w。觀察組大鼠體重181～239〔平均(211.5±19.7)〕g。鼠齡5～7〔平均(6.4±1.9)〕w。

1.2方法對照組：大鼠進(jìn)行負(fù)重游泳的訓(xùn)練方式，持續(xù)的時間共8 w，且每次訓(xùn)練均以大鼠的力氣耗盡為終止點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)的訓(xùn)練裝置為玻璃游泳槽，大小為130 cm×70 cm×60 cm，溫度控制在30℃左右。玻璃泳槽的底部安放一個水泵來產(chǎn)生水流。觀察組大鼠進(jìn)行負(fù)重游泳的訓(xùn)練方法，訓(xùn)練的持續(xù)時間為8 w，并對觀察組大鼠給予羅漢果提取物干預(yù)，藥物購自西安潤澤生物技術(shù)有限公司，灌胃給藥，劑量為160 mg/kg，每天一次。

1.3觀察指標(biāo)①力竭游泳時間、皮質(zhì)酮、睪酮〔5,6〕：兩組大鼠負(fù)重游泳訓(xùn)練時間均為8 w，分別記錄兩組大鼠在從開始游泳到力竭的時間，并通過放射免疫分析法對兩組大鼠的皮質(zhì)酮、睪酮水平進(jìn)行測定。所使用試劑盒由上海鈺博生物科技有限公司提供。②肝、肌糖原儲量〔5,6〕：對比兩組大鼠在負(fù)重游泳訓(xùn)練前后的肝、肌糖原儲量，此項(xiàng)檢查的試劑盒采購于上海鈺博生物科技有限公司。③血紅蛋白、血尿氮素水平〔5,6〕：比較負(fù)重游泳訓(xùn)練前后兩組大鼠血紅蛋白、血尿氮素水平。高鐵氰化鉀氧法測定血紅蛋白，UV-GLDH法測定血尿氮素。

1.4Western印跡實(shí)驗(yàn)采用大鼠的睪丸，約為100 mg，將冷蛋白裂解液加入其中，劑量為1 ml，使用超聲破碎機(jī)進(jìn)行超聲破碎，共四次，每次10 s，間隔時間為15 s。離心后取上清液做備用。隨后取50 μg蛋白，在100℃下進(jìn)行變性，時間為5 min。利用聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)進(jìn)行電泳，再轉(zhuǎn)至PVDF膜，參照選擇標(biāo)準(zhǔn)蛋白，并取相應(yīng)條帶給予封閉。隨后加入稀釋后的抗Cox7A2及β-actin的一抗，在4℃下保存和過夜，使用TBST 沖洗后加入二抗，在室溫下震蕩，并孵育1.5 h，經(jīng)過TBST洗滌后，進(jìn)行Pierce化學(xué)發(fā)光底物 A液與B液1∶1等體積混合，并在室溫下進(jìn)行5 min反應(yīng)，隨后將反應(yīng)液吸干。膠片顯影、定影、圖像分析。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1大鼠的力竭時間、睪酮水平及皮質(zhì)酮水平干預(yù)8 w后，觀察組大鼠的力竭游泳時間、睪酮水平、皮質(zhì)酮水平都高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.2肝糖原儲量及肌糖原儲量比較干預(yù)8 w后，觀察組肝糖原儲量(11.7±2.5)mg/(g tissue)、肌糖原儲量都高于對照組(P<0.01)。見表2。

表2　兩組肝糖原儲量及肌糖原儲量比較

2.3血紅蛋白、血尿氮素比較干預(yù)8 w后，觀察組血紅蛋白水平高于對照組(P<0.01)。觀察組血尿氮素水平低于對照組(P<0.01)。見表3。

表3　兩組大鼠血紅蛋白及血尿氮素水平的比較±s，n=30)

2.4Western印跡檢測Cox7A2蛋白的表達(dá)觀察組Cox7A2蛋白相對表達(dá)量低于對照組(12.58±1.76 vs 18.62±2.16，P<0.05)。見圖1。

圖1　各組Cox7A2蛋白的表達(dá)

3討論

運(yùn)動有益于健康，但過量又可能不利于健康。睪酮是重要的促合成激素〔7〕，對機(jī)體有著重要的影響。皮質(zhì)酮可以有效地抑制機(jī)體產(chǎn)生蛋白質(zhì)〔8〕、并可以有效地削弱機(jī)體的運(yùn)動能力。使用羅漢果提取物，能夠有效地減輕細(xì)胞在運(yùn)動后產(chǎn)生的損傷程度〔9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明羅漢果提取物可以有效地增加大鼠在負(fù)重游泳訓(xùn)練后的抗運(yùn)動能力，改善大鼠的疲勞程度，并能夠降低運(yùn)動對大鼠血睪酮、皮質(zhì)酮產(chǎn)生的影響。

糖是機(jī)體重要的能量來源，血紅蛋白是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種蛋白質(zhì)〔10〕。血尿素氮為人體內(nèi)蛋白質(zhì)的一種代謝產(chǎn)物，是一種主要終末產(chǎn)物〔11〕，在大鼠經(jīng)過較長長時間的負(fù)重游泳后，會出現(xiàn)一定的上升〔12〕。羅漢果提取物具有增加糖原貯備〔13〕的效果，且羅漢果提取物有較好的抗氧化活性，并能夠提高機(jī)體的抗疲勞能力。且本研究結(jié)果還提示在運(yùn)動后給予羅漢果提取物，可以改善運(yùn)動后所產(chǎn)生的大鼠肝糖原儲量變化，并能夠?qū)√窃瓋α慨a(chǎn)生影響，并可提升運(yùn)動大鼠血液含氧量，保證機(jī)體正常的能量供給和能量代謝。

Cox7A2參與細(xì)胞色素C氧化酶的構(gòu)成〔14〕，在老年人睪丸組織顯著上調(diào)，是維持氧化呼吸鏈上最后一個復(fù)合體細(xì)胞色素C氧化酶正常功能所必需的。有研究發(fā)現(xiàn)〔12〕，Cox7A2能夠?qū)ΣG酮合成限速酶產(chǎn)生一定的抑制作用，并可以抑制黃體生成素對小鼠睪丸Leydig細(xì)胞睪酮的合成。在本研究中，進(jìn)行負(fù)重游泳訓(xùn)練的大鼠均出現(xiàn)Cox7A2的表達(dá)升高，而羅漢果提取物降低了負(fù)重游泳訓(xùn)練大鼠睪丸組織Cox7A2蛋白的表達(dá)。

4參考文獻(xiàn)

1Elsner M，Rauser S，Maier S，etal.MALDI imaging mass spectrometry reveals COX7A2，TAGLN2 and S100-A10 as novel prognostic markers in Barrett's adenocarcinoma〔J〕.J Proteomics,2012；75(15)：4693-704.

2Chen L，Xin ZC，Li X，etal.Cox7a2 mediates steroidogenesis in TM3 mouse Leydig cells〔J〕.Asian J Androl,2006；8(5)：589-94.

3王勇，張光芬，陳小青.牡蠣提取液對長期訓(xùn)練小鼠心肌抗氧化能力、一氧化氮及一氧化氮合酶的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2015;35(5)：1346-7.

4甘勝，余艷宏，馬偉，等.羅漢果果實(shí)不同溶劑提取物抗氧化活性初步研究〔J〕.湖北科技學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2013;27(4)：281-4.

5婁春善，曹建民，郭嫻，等.林蛙油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運(yùn)動疲勞能力的影響〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014;20(20)：150-4.

6周海濤，曹建民，林強(qiáng)，等.紅景天對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運(yùn)動疲勞能力的影響〔J〕.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012;24(12)：1808-12，1836.

7Nieschlag E，Nieschlag S.Testosterone deficiency：a historical perspective〔J〕.Asian J Androl,2014；16(2)：161-8.

8Moore FL，Orchinik M.Membrane receptors for corticosterone：a mechanism for rapid behavioral responses in an amphibian〔J〕.Horm Behav,1994；28(4)：512-9.

9張曉峰，劉大鐸.羅漢果提取物對運(yùn)動疲勞小鼠的抗疲勞作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2013;39(3)：494-7.

10Sozmen EY.Sample blank subtraction outreachs hemoglobin interferences in flurorometric methods for DBS〔J〕.Mol Genet Metab,2012；105(3)：530.

11Kazory A.Emergence of blood urea nitrogen as a biomarker of neurohormonal activation in heart failure〔J〕.Am J Cardiol,2010；106(5)：694-700.

12程鵬，陳飛，何先元，等.四棱筋骨草等對小鼠抗運(yùn)動疲勞比較研究〔J〕.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014;10(13)：9-11.

13柯良芳，孫盼盼，黃赤夫，等.羅漢果莖葉提取物的血清藥物化學(xué)研究〔J〕.中國現(xiàn)代中藥，2013;15(3)：187-90.

14Elsner M，Rauser S，Maier S，etal.MALDI imaging mass spectrometry reveals COX7A2，TAGLN2 and S100-A10 as novel prognostic markers in Barrett's adenocarcinoma〔J〕.J Proteomics,2012；75(15)：4693-704.

〔2014-12-09修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號〕R285

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2869-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.019

第一作者：李玲(1981-)，女，主治醫(yī)師，主要從事睡眠醫(yī)學(xué)研究。