孫菊萍姜?jiǎng)P

雷公藤紅素逆轉(zhuǎn)宮頸癌細(xì)胞順鉑耐藥性實(shí)驗(yàn)研究

孫菊萍1姜?jiǎng)P2

目的研究中藥活性成分雷公藤紅素逆轉(zhuǎn)耐藥宮頸癌細(xì)胞株Hela/R對(duì)順鉑的耐藥性，并探討其機(jī)制。方法采用順鉑梯度暴露法構(gòu)建順鉑耐藥宮頸癌細(xì)胞株Hela/R；采用MTT法檢測(cè)雷公藤紅素是否能增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R的殺傷活性；Western blot試驗(yàn)檢測(cè)常規(guī)Hela細(xì)胞及Hela/R細(xì)胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)雷公藤紅素聯(lián)合順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)及對(duì)線粒體膜電位的影響。結(jié)果1、2、4、8、16、32、64μmol/L順鉑對(duì)Hela及Hela/R細(xì)胞的細(xì)胞活力抑制率分別為：（18.6±1.5）%（Hela），（1.9±1.0）%（Hela/R）；（23.9±2.4）%（Hela），（3.1±1.2）%（Hela/R）；（47.8±3.9）%（Hela），（6.8±1.5）%（Hela/R）；（63.4±5.4）%（Hela），（11.6±1.8）%（Hela/R）；（72.7±5.9）%（Hela），（20.4±2.0）%（Hela/R），（85.7±6.7）%（Hela），（41.2± 3.3）%（Hela/R）；（91.8±7.9）%（Hela），（55.8±4.3）%（Hela/R），兩組比較，P均＜0.05。2μmol/L雷公藤紅素對(duì)Hela/R細(xì)胞的細(xì)胞活力抑制率為（6.6±1.1）%；2μmol/L雷公藤紅素分別加10、20、40μmol/L順鉑組Hela/R細(xì)胞的細(xì)胞活力抑制率優(yōu)于單用10、20、40μmol/L順鉑組[（57.2±3.9）%比（12.4± 1.2）%、（71.4±5.1）%比（27.8±1.9）%、（84.8±6.8）%比（45.2±3.1）%，P＜0.05]。Hela/R細(xì)胞Bcl-w/βactin表達(dá)水平高于Hela細(xì)胞[（70.9±4.9）比（22.1±1.3），P＜0.05]，Bcl-2/β-actin與Bcl-xl/β-actin表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組比較，雷公藤紅素可明顯抑制Hela/R細(xì)胞Bcl-w/βactin的表達(dá)[（29.3±2.6）比（68.9±4.5），P＜0.05]。雷公藤紅素增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞線粒體膜電位的損傷，促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放，而誘導(dǎo)Hela/R細(xì)胞發(fā)生凋亡。結(jié)論雷公藤紅素體外能提高順鉑對(duì)耐藥宮頸癌細(xì)胞的殺傷活性，其機(jī)制可能為通過(guò)抑制Bcl-w表達(dá)，提高促凋亡蛋白的活性，進(jìn)而促進(jìn)耐藥宮頸癌細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑的凋亡。

耐藥宮頸癌細(xì)胞株；順鉑；Hela/R；雷公藤紅素；Bcl-w；線粒體；凋亡

宮頸癌是全球發(fā)病率第二位的婦科腫瘤，每年有超過(guò)50萬(wàn)患者被診斷為宮頸癌，化療目前仍是治療宮頸癌的主要手段[1]。順鉑是治療多種實(shí)體瘤的一線藥物，它能損傷腫瘤細(xì)胞的DNA進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序[2]。然而，順鉑的反復(fù)使用常常誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，抵抗順鉑誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)[3]。因此，尋找其他的藥物與順鉑進(jìn)行聯(lián)合用藥以延緩順鉑的耐藥性是目前腫瘤治療研究的重點(diǎn)。本研究的目的在于探討中藥活性成分雷公藤紅素是否能逆轉(zhuǎn)耐藥宮頸癌細(xì)胞株Hela/R對(duì)順鉑的耐藥性并研究其具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與Hela/R的構(gòu)建人宮頸癌細(xì)胞系Hela購(gòu)于美國(guó)ATCC（American Type Culture Collection），腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)在RPMI-1640培養(yǎng)基中，含10%胎牛血清，培養(yǎng)環(huán)境為37℃恒溫且通入5%的CO2。順鉑耐藥Hela（Hela/R）細(xì)胞的構(gòu)建采用順鉑梯度暴露法[4]：將Hela細(xì)胞用一個(gè)濃度的順鉑處理48h，之后將其移至無(wú)順鉑培養(yǎng)基培養(yǎng)48h，重復(fù)3次后將細(xì)胞移至更高濃度順鉑進(jìn)行培養(yǎng)。順鉑初始培養(yǎng)濃度為1μmol/L，后每輪增加0.5μmol/L，直至將Hela/R細(xì)胞最終培養(yǎng)在含3μmol/L順鉑的培養(yǎng)基中。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑RPIM-1640培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自于Gibco公司。順鉑、雷公藤紅素、地高辛、JC-1、噻唑藍(lán)（MTT）、AnnexinⅤ凋亡試劑盒購(gòu)自美國(guó)sigma公司。β-actin、Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xl、細(xì)胞色素C抗體購(gòu)自美國(guó)Cell signal公司。ECL試劑盒購(gòu)于美國(guó)Pierce。pcDNA3.1，Lipofectamine 2000購(gòu)于美國(guó)Invitrogen。

1.3 質(zhì)粒構(gòu)建及轉(zhuǎn)染將Bcl-w基因cDNA全長(zhǎng)序列（Gene ID：NM_001199839）以分子克隆的方法與pcDNA3.1連接后構(gòu)建成pcDNA3.1-Bcl-w重組真核表達(dá)質(zhì)粒[5]。使用Lipofectamine 2000按照試劑操作說(shuō)明書(shū)步驟將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入Hela/ R細(xì)胞中，培養(yǎng)24h。

1.4 MTT試驗(yàn)將Hela或Hela/R細(xì)胞按5×103/孔接種在96孔板上。將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，孵育24h，然后再加2μmol/L雷公藤紅素及不同濃度的順鉑培養(yǎng)48h，順鉑0μmol/L為對(duì)照組。之后加5mg/mL MTT 20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h。棄上清，在570nmol/L波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值，細(xì)胞活力抑制率用以下公式計(jì)算：抑制率=（OD對(duì)照組-OD治療組）/OD對(duì)照組×100%。

1.5 Western blot試驗(yàn)將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Hela/R細(xì)胞中，孵育24h，然后再加2μmol/ L雷公藤紅素及10μmol/L順鉑培養(yǎng)48h。之后將Hela或Hela/R細(xì)胞用生理鹽水洗滌兩次，之后將細(xì)胞裂解，將蛋白裂解液用12.5%SDS PAGE進(jìn)行分離，之后通過(guò)電轉(zhuǎn)方法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到PVDF膜上。將膜放入β-actin、Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xl、細(xì)胞色素C一抗稀釋液中孵育過(guò)夜，之后再用二抗稀釋液孵育2h后在X膠片上進(jìn)行曝光，之后用Image J圖像處理軟件進(jìn)行處理，使蛋白表達(dá)灰度值用數(shù)字表示，目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/相應(yīng)β-actin內(nèi)參蛋白灰度值。

1.6 線粒體膜電位測(cè)定將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Hela/R細(xì)胞中，孵育24h，然后再加2μmol/ L雷公藤紅素及10μmol/L順鉑培養(yǎng)48h后，將細(xì)胞用生理鹽水洗滌兩次，加入5μmol/L JC-1孵育20min，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的線粒體膜電位。線粒體膜電位喪失的細(xì)胞不發(fā)射JC-1的紅色熒光，因此Hela/R細(xì)胞的線粒體膜電位下降率用未發(fā)出紅色熒光的細(xì)胞占所有細(xì)胞的百分比表示[6]。

1.7 細(xì)胞色素C釋放率測(cè)定將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Hela/R細(xì)胞中，孵育24h，然后再加2μmol/L雷公藤紅素及10μmol/L順鉑培養(yǎng)48h。之后將Hela/R細(xì)胞重懸在地高辛裂解液中（75μg/mL地高辛溶解在250mmol/L蔗糖水溶液中）孵育15min，之后在15 000g中離心30min，所得的細(xì)胞沉淀中含完整的線粒體，而上清液中不含線粒體[7]。用Western blot方法分別檢測(cè)細(xì)胞沉淀及上清液中細(xì)胞色素C表達(dá)水平，細(xì)胞色素C釋放率用上清液中細(xì)胞色素C蛋白灰度與細(xì)胞沉淀中細(xì)胞色素C蛋白灰度的比值表示。

1.8 細(xì)胞凋亡試驗(yàn)將2μg/mL Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Hela/R細(xì)胞中，孵育24h，然后再加2μmol/L雷公藤紅素及10μmol/L順鉑培養(yǎng)48h。將細(xì)胞用生理鹽水洗滌兩次，按照凋亡試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟將Annexin-V加入細(xì)胞中孵育20min，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的凋亡，細(xì)胞凋亡率用Annexin-V陽(yáng)性細(xì)胞占所有細(xì)胞比值表示。

2 結(jié)果

2.1 雷公藤紅素逆轉(zhuǎn)Hela/R的順鉑耐藥相比于Hela細(xì)胞，Hela/R細(xì)胞對(duì)順鉑顯著耐藥，見(jiàn)表1。盡管低劑量的雷公藤紅素（2μmol/L）單獨(dú)治療對(duì)Hela/ R細(xì)胞僅有微弱的殺傷作用，但顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞的殺傷活性，見(jiàn)表2。

表1 順鉑對(duì)Hela及Hela/R細(xì)胞的抑制作用（）

表1 順鉑對(duì)Hela及Hela/R細(xì)胞的抑制作用（）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與相同濃度順鉑處理的Hela細(xì)胞組比較，#P<0.05

組別對(duì)照組1μmol/L順鉑組2μmol/L順鉑組4μmol/L順鉑組8μmol/L順鉑組16μmol/L順鉑組32μmol/L順鉑組64μmol/L順鉑組孔數(shù)順鉑濃度（μmol/L）3 3 3 3 3 3 3 3 0 1 2 4 8 1 6 32 64 Hela細(xì)胞活力抑制率（%）0 18.6±1.5* 23.9±2.4* 47.8±3.9* 63.4±5.4* 72.7±5.9* 85.7±6.7* 91.8±7.9* Hela/R細(xì)胞活力抑制率（%）0 1.9±1.0#3.1±1.2#6.8±1.5*#11.6±1.8*#20.4±2.0*#41.2±3.3*#55.8±4.3*#

2.2 雷公藤紅素通過(guò)Bcl-w途徑逆轉(zhuǎn)Hela/R的順鉑耐藥與Hela相比，Hela/R細(xì)胞的Bcl-2及Bclxl的表達(dá)水平變化不明顯，但Bcl-w的表達(dá)水平顯著提高，見(jiàn)表3。將Hela/R細(xì)胞用雷公藤紅素治療后，腫瘤細(xì)胞中Bcl-w的表達(dá)水平顯著下調(diào)，而B(niǎo)cl-2及Bcl-xl的表達(dá)水平未發(fā)生顯著改變，見(jiàn)表4。當(dāng)用Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela/R細(xì)胞，使細(xì)胞強(qiáng)制表達(dá)Bcl-w后，雷公藤紅素對(duì)順鉑治療的協(xié)同作用喪失，見(jiàn)表5。

表2 雷公藤紅素增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞的抑制作用（）

表2 雷公藤紅素增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞的抑制作用（）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與10μmol/L順鉑組比較，#P<0.05；與20μmol/L順鉑組比較，△P<0.05；與40μmol/L順鉑組比較，○P<0.05

組別對(duì)照組雷公藤紅素組10μmol/L順鉑組20μmol/L順鉑組40μmol/L順鉑組10μmol/L順鉑+雷公藤紅素組20μmol/L順鉑+雷公藤紅素組40μmol/L順鉑+雷公藤紅素組孔數(shù)順鉑濃度（μmol/L）雷公藤紅素濃度（μmol/L）3 3 3 3 3 3 3 3 0 0 1 0 20 40 10 20 40 0 2 0 0 0 2 2 2 Hela/R細(xì)胞活力抑制率（%）0 6.6±1.1* 12.4±1.2* 27.8±1.9* 45.2±3.1* 57.2±3.9*#71.4±5.1*△84.8±6.8*○

表3 Hela及Hela/R細(xì)胞Bcl-2抗凋亡蛋白家族成員的相對(duì)表達(dá)水平（）

表3 Hela及Hela/R細(xì)胞Bcl-2抗凋亡蛋白家族成員的相對(duì)表達(dá)水平（）

注：與Hela細(xì)胞組比較，▲P<0.05

組別Hela細(xì)胞組Hela/R細(xì)胞組孔數(shù)3 3灰度比（Bcl-2/β-actin）37.9±1.8 41.4±2.1灰度比（Bcl-xl/β-actin）32.1±1.9 30.2±1.7灰度比（Bcl-w/β-actin）22.1±1.3 70.9±4.9▲

表4 雷公藤紅素下調(diào)Hela/R細(xì)胞中Bcl-w的表達(dá)水平（）

表4 雷公藤紅素下調(diào)Hela/R細(xì)胞中Bcl-w的表達(dá)水平（）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

組別對(duì)照組雷公藤紅素組孔數(shù)雷公藤紅素濃度（μmol/L）3 3 0 2灰度比（Bcl-2/β-actin）42.1±2.2 39.5±2.0灰度比（Bcl-xl/β-actin）29.6±1.8 27.4±1.7灰度比（Bcl-w/β-actin）68.9±4.5 29.3±2.6*

表5 Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒廢除雷公藤紅素對(duì)順鉑的協(xié)同作用（）

表5 Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒廢除雷公藤紅素對(duì)順鉑的協(xié)同作用（）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，與順鉑+雷公藤紅素組比較，#P<0.05

組別對(duì)照組順鉑+雷公藤紅素組Bcl-w質(zhì)粒組順鉑+雷公藤紅素+Bcl-w質(zhì)粒組孔數(shù)雷公藤紅素濃度（μmol/L）Bcl-w質(zhì)粒濃度（μg/mL）3 3 3 3順鉑濃度（μmol/L）0 10 0 10 0 2 0 2 0 0 2 2 Hela/R細(xì)胞活力抑制率（%）0 58.9±4.1* 1.0±0.7 17.9±3.1*#

表6 雷公藤紅素聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)Hela/R細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑的凋亡（）

表6 雷公藤紅素聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)Hela/R細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑的凋亡（）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與10μmol/L順鉑組比較，#P<0.05；與2μmol/L雷公藤紅素+10μmol/L順鉑組比較，△P<0.05

組別對(duì)照組2μmol/L雷公藤紅素組10μmol/L順鉑組2μmol/L雷公藤紅素+10μmol/L順鉑組2μmol/L雷公藤紅素+10μmol/L順鉑+2μg/ml Bcl-w質(zhì)粒組孔數(shù)3 3 3 3 3線粒體膜電位降低率（%）0 3.2±0.3 6.3±0.6* 45.5±3.1*#11.2±1.2*△細(xì)胞色素C釋放率0.01±0.01 0.03±0.01 0.05±0.01* 0.41±0.03*#0.11±0.02*△細(xì)胞凋亡率（%）1.8±0.4 3.8±0.2 8.3±0.8* 49.4±3.3*#13.8±1.5*△

2.3 雷公藤紅素聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)Hela/R細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑的凋亡雷公藤紅素顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)Hela/R細(xì)胞線粒體膜電位的損傷并促使細(xì)胞色素C從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)中，誘導(dǎo)Hela/R細(xì)胞發(fā)生凋亡，見(jiàn)表6。

3 討論

雷公藤紅素是一種三萜類化合物，來(lái)源于中藥雷公藤的根皮，具有多種生物活性。研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤紅素具有一定的抗腫瘤效應(yīng)，如雷公藤紅素在體外誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡[8]，還能通過(guò)誘導(dǎo)活性氧簇的生成引起結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[9]。Bcl-2蛋白家族是細(xì)胞凋亡重要調(diào)節(jié)者，其中的Bcl-2抗凋亡蛋白成員（如Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w）能與Bcl-2促凋亡蛋白成員（如Bim、Bax、Bak）的特定位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合，從而使這些促凋亡蛋白失去功能而起到凋亡抵抗的作用[10-11]。當(dāng)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)凋亡信號(hào)（如DNA損傷）后，活化的促凋亡蛋白能打開(kāi)腫瘤細(xì)胞的線粒體外膜孔道，使線粒體膜電位喪失，從而促使線粒體來(lái)源的促凋亡物質(zhì)（如細(xì)胞色素C）釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞色素C能直接誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入caspase依賴的凋亡程序，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡性死亡[12-13]。盡管已經(jīng)有臨床試驗(yàn)證明雷公藤紅素有較好的抗腫瘤療效和安全性[14]，但仍然缺乏其與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合治療宮頸癌的研究。

在本研究中，筆者構(gòu)建了順鉑耐藥的宮頸癌細(xì)胞模型，用以研究雷公藤紅素是否能逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，提高化療療效。本研究表明雷公藤紅素確能提高耐藥宮頸癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，顯著降低順鉑的治療濃度。在機(jī)制研究中，筆者通過(guò)Western blot試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)耐藥宮頸癌細(xì)胞的Bcl-w表達(dá)水平異常升高，因此推測(cè)雷公藤紅素可能通過(guò)抑制Bcl-w的功能實(shí)現(xiàn)對(duì)順鉑的協(xié)同效應(yīng)。當(dāng)用Bcl-w表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela/R細(xì)胞，使Hela/R細(xì)胞強(qiáng)制表達(dá)Bcl-w后，筆者發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素對(duì)順鉑的協(xié)同效應(yīng)顯著下降，證明了Bcl-w途徑在順鉑耐藥中的重要作用。為了進(jìn)一步研究雷公藤紅素聯(lián)合順鉑殺傷Hela/ R細(xì)胞的機(jī)制，筆者檢測(cè)了腫瘤細(xì)胞的線粒體膜電位和細(xì)胞色素C的釋放。結(jié)果發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素聯(lián)合順鉑能誘導(dǎo)耐藥宮頸癌細(xì)胞發(fā)生線粒體的損傷和細(xì)胞色素C的釋放，進(jìn)而促使耐藥宮頸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡性死亡。

綜上所述，本研究結(jié)果證明了雷公藤紅素在體外能提高順鉑對(duì)耐藥宮頸癌細(xì)胞的殺傷活性，其分子機(jī)制可能為通過(guò)抑制Bcl-w的功能，提高促凋亡蛋白的活性，進(jìn)而促進(jìn)耐藥宮頸癌細(xì)胞在順鉑的治療下發(fā)生線粒體途徑的凋亡。

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（收稿：2015-11-13修回：2016-02-26）

An Active Component of Chinese Traditional Medicine Celastrol Reverses the Cisplatin-resistance of Cervical Cancer

SUN Juping1,JIANG Kai2.1 Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Zhejiang ChineseMedicineUniversity,Hangzhou(310005),China;2ClinicalLaboratory,TongdeHospitalofZhejiangProvince, Hangzhou(310012),China

ObjectiveTo investigate the effect traditionl Chinese medicine celastrol on reversing the cisplatinresistance in cervical cancer cell line Hela/R and the underlying mechanism.MethodsThe cisplatin-resistant Hela/R cell line was established via stepped exposure to cisplatin.MTT assay was performed to explore whether the celastrol can enhance the cytotoxicity of cisplatin to Hela/R cells.The expression of Bcl-2,Bcl-w and Bcl-xl was evaluated by using western blot analysis.The mitochondrial membrane potential and apoptotic rate of Hela/R was determined by flow cytometry.ResultsThe viability inhibition of Hela and Hela/R cells treated with cisplatin was as follows：18.6%±1.5%（Hela）and 1.9%±1.0%（Hela/R）in 1μmol/L cisplatin group;23.9%±2.4%（Hela）and 3.1%±1.2%（Hela/R）in 2μmol/L cisplatin group;47.8%±3.9%（Hela）and 6.8%±1.5%（Hela/R）in 4μmol/L cisplatin group;63.4%±5.4%（Hela）and 11.6%±1.8%（Hela/R）in 8μmol/L cisplatin group;72.7%±5.9%（Hela）and 20.4%± 2.0%（Hela/R）in 16μmol/L cisplatin group;85.7%±6.7%（Hela）and 41.2%±3.3%（Hela/R）in 32μmol/L cisplatin group;91.8%±7.9%（Hela）and 55.8%±4.3%（Hela/R）in 64μmol/L cisplatin group;significant differences were found between two groups（all P＜0.05）.The viability inhibition of Hela/R cells treated with celastrol plus cisplatinwas as follows：6.6%±1.1%in 2μmol/L celastrol group;12.4%±1.2%in 10μmol/L cisplatin group;27.8%±1.9%in 20μmol/L cisplatin group;45.2%±3.1%in 40μmol/L cisplatin group;57.2%±3.9%in 10μmol/L cisplatin+celastrol group;71.45±5.1%in 20μmol/L cisplatin+celastrol group;84.8%±6.8%in 40μmol/L cisplatin+celastrol group;the viability inhibition was better in celastrol plus cisplatin groups than that in cisplatin single groups（all P＜0.05）.The level of Bcl-w/β-actin in Hela/R cells was higher than that in Hela cells（70.9±4.9 vs 22.1±1.3,P＜0.05）;the level of Bcl-2/β-actin and Bcl-xl/β-actin was not different between Hela cells and Hela/R cells（P＞0.05）.Compared with control group,celastrol inhibited the expression of Bcl-w/β-actin in Hela/R cells（29.3±2.6 vs 68.9±4.5,P＜0.05）.Celastrol significantly enhanced the damage of mitochondrial membrane potential induced by cisplatin in Hela/R,leading to the release of cytochrome C and the induction of apoptosis.ConclusionCelastrol enhances the cytotoxicity of cisplatin to Hela/R cells via inhibiting the function of Bcl-w,promoting the activity of pro-apoptotic proteins,resulting in the activity of mitochondria-related apoptosis in cisplatin-resistant cervical cancer cells.

drug-resistant cervical cancer cell line;cisplatin;Hela/R;celastrol;Bcl-w;mitochondria;apoptosis

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科（杭州310005）；2浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科（杭州310012）

姜?jiǎng)P，Tel：15382362622；E-mail：wzjiangkai@163.com