耿亞 馬月香
摘要:冠心?。╟oronary artery heart disease,CHD)是心血管疾病常見病種。CHD動物模型是現(xiàn)代醫(yī)學研究疾病發(fā)展轉(zhuǎn)歸及評價藥物作用療效必不可少的工具,而針對于中醫(yī)證候的動物模型是在中醫(yī)基本思想的指導下在動物身上模擬出人類疾病的某些特征,制備出與人類疾病癥狀和病理變化相似或相同的動物模型。目前,建立CHD中醫(yī)證候動物模型的方法多種多樣,本文從痰瘀互結、心脾陽虛、寒凝血瘀、痰濁血瘀、心氣虛、氣虛血瘀方面綜述了這幾類模型的研究進展,以期為冠心病的研究提供參考。
關鍵詞:冠心?。恢嗅t(yī)證候;動物模型;綜述
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.035
中圖分類號:R259.414 文獻標識碼:A 文章編號:1005-5304(2016)08-0129-04
冠心?。╟oronary artery heart disease,CHD)是指冠狀動脈粥樣硬化使管腔狹窄或阻塞,或/和冠狀動脈痙攣導致心肌缺血缺氧而引起的心臟病,又稱缺血性心臟病(IHD)。根據(jù)CHD臨床致病特點,可歸屬中醫(yī)學“胸痹”“真心痛”等范疇。在CHD研究中,動物模型的建立是主要研究方法之一,近年許多研究者在冠心病中醫(yī)證候動物模型研究中取得一定成效,但也存在諸多與中醫(yī)基本思想不協(xié)調(diào)的問題。筆者通過檢索中國知識資源總庫2005-2015年文獻,對有關CHD中醫(yī)證候動物模型文獻做一梳理,現(xiàn)總結如下。
1 痰瘀互結證小型豬模型
林氏等[1]以高脂飼料(每100 kg飼料含膽固醇2 kg,膽鹽0.5 kg,豬油10 kg)每日每只900 g喂養(yǎng)
小型豬2周,并以介入法對冠狀動脈血管內(nèi)皮進行損傷,術后繼續(xù)以高脂飼料每日每只900 g喂養(yǎng)8周。觀察測量并分別記錄小型豬高脂2、6、10周的體質(zhì)指數(shù)、舌象、心電圖,以及無創(chuàng)血流動力學參數(shù),包括心輸出量、每搏輸出量、外周血管阻力、左心做功。
在實驗動物中,因小型豬的生理解剖、血脂指標和人類非常相近[2]。生理生化方面,豬的血液學、血流動力學、血液生化指標方面已被證實與人類相似,而且品種純正、體質(zhì)量較小、生長緩慢,近年來,在中醫(yī)證候動物模型研究中應用越來越突出[3-4]。有學者以《中藥新藥治療冠心病心絞痛的臨床研究指導原則》為參照,對小型豬冠心病模型痰瘀互結證候進行診斷與評分,制定了CHD痰瘀互結證小型豬模型的評分標準,對主癥、兼癥、舌象、脈象進行評分,根據(jù)評分標準判斷CHD痰瘀互結證小型豬模型是否建立[1,5]。
動物實驗意在模擬中醫(yī)過食肥甘厚味而引起脾運失健,痰濕壅盛,進而導致血脈痹阻的痰瘀互結的中醫(yī)證候,以高脂飲食和冠狀動脈血管內(nèi)皮損傷術復制出CHD痰瘀互結證動物模型。
2 心脾陽虛證大鼠模型
韋氏等[6]先適應性飼養(yǎng)大鼠1周,然后對大鼠施行肩胛骨間棕色脂肪組織(brown adipose tissue,BAT)切除,術后在19 ℃環(huán)境下以高脂飼料(83%基本飼料,15%三酰甘油,2%膽固醇)飼養(yǎng)21 d,第22日皮下多點注射垂體后葉素(10 U/kg),第29日對大鼠施以中藥。觀察測量并分別記錄大鼠行為(活動度、攝食行為、毛發(fā)改變、體質(zhì)量變化等)、肛溫、體溫、心電圖、心肌單相動作電位,以及心率、動作電位時程、動作電位0相幅值、動作電位50%復極化時程、90%復極化時程。因心脾陽虛包括陽虛癥狀(畏寒喜溫、形寒肢冷等)和脾虛癥狀(消瘦、乏力、納少、便溏及腹瀉、脘腹脹痛等)兩大癥狀群,可在實驗中根據(jù)大鼠模型組行為、心電圖、心臟指數(shù)、肛溫,以及體質(zhì)量與對照組比較,對差異指標進行數(shù)理統(tǒng)計學分析[6],依差異是否有統(tǒng)計學意義,評價CHD心脾陽虛證動物模型是否建立。在CHD中醫(yī)證候中,單純心陽虛證在臨床上較少見,多為混合陽虛證,如心脾陽虛等[7]。中醫(yī)認為,心脾陽虛多因飲食不節(jié)、寒邪傷陽等,致脾胃運化失健,遂聚濕生痰,上犯心胸,阻遏心陽。本實驗通過BAT切除術、注射垂體后葉素、高脂飲食、寒冷刺激的方式,模擬“飲食不節(jié),寒邪傷陽”,使CHD心脾陽虛大鼠動物模型在病因病機上更加符合心脾陽虛證型。
3 寒凝血瘀證大鼠模型
王氏等[8]先用20%烏拉坦5 mL/kg對大鼠腹腔注射進行麻醉,并將大鼠仰臥固定于鼠臺,連接生理記錄儀并記錄大鼠標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖,然后經(jīng)口對大鼠氣管插管,連接動物呼吸機,解剖并分離出股靜脈進行靜脈置管,5 s恒速注射注入垂體后葉素(6 U/kg,濃度為2 U/mL),造模30 min后進行各項指標觀測。觀察測量并分別記錄大鼠體溫、體征(唇周、爪子、耳朵、尾巴的顏色,大便形態(tài))、心電圖、微靜脈管徑、紅細胞流速、6-酮-前列腺素F1α、血漿血栓素B2。將模型組與正常組檢測指標比較,根據(jù)差異是否具有統(tǒng)計學意義判斷CHD寒凝血瘀證大鼠模型是否建立。
中醫(yī)認為,寒主收引,可抑遏陽氣,使血行瘀滯?!端貑枴ふ{(diào)經(jīng)論篇》曰:“厥氣上逆,寒氣積于胸中而不瀉,不瀉則溫氣去,寒獨留,則血凝泣,凝則脈不通?!毖芯勘砻?,造模大劑量注射垂體后葉素具有寒邪致病特點,提示大鼠因寒邪內(nèi)侵而復制出的動物模型為寒凝血瘀動物模型[9]。
4 痰濁血瘀證兔模型
張氏等[10]首先對雄性家兔以高脂飼料(膽固醇1%、蛋黃粉15%、豬油15%、基礎飼料79%)飼養(yǎng)35 d,第36日采取冠狀動脈結扎術,以30 mg/kg戊巴比妥腹腔注射,剪毛,常規(guī)消毒,開胸,對冠狀動脈左前降支完全結扎,心電圖監(jiān)測。觀察測量并分別記錄實驗前后全血黏度高切變率、全血黏度低切變率、血漿黏度、纖維蛋白原、血清白細胞介素-6。將模型組與正常組檢測指標比較,根據(jù)差異是否具有統(tǒng)計學意義判斷CHD痰濁血瘀證兔模型是否建立。中醫(yī)認為,過食肥甘厚味可使脾運失健,津液不布,遂聚為痰,痰上擾心胸,致心脈痹阻。本實驗中對家兔冠狀動脈左前降支完全結扎及高脂喂養(yǎng),旨在模擬痰阻心胸,血行失暢,脈絡不利,心脈痹阻,以復制出痰濁血瘀證動物模型。
5 心氣虛證大鼠模型
唐氏等[11]使用近交系Wistar大鼠采取游泳法建模,大鼠靜息狀態(tài)下喂養(yǎng)精飼料5 g/100 g,在水溫25~28 ℃條件下以強迫負重(大鼠自身質(zhì)量5%)方式游泳至力竭(頭沒入水下10 s不上?。?,進行2次,前后間隔10 min,第18日起在游泳基礎上連續(xù)4 d灌服心得安溶液2.4 mg/100 g。觀察測量并分別記錄實驗前后大鼠行為狀態(tài)、精神狀態(tài)、體征、左心室動力學指標、心臟功能。將模型組與正常組檢測指標比較,根據(jù)數(shù)據(jù)差異是否具有統(tǒng)計學意義,判斷CHD心氣虛證大鼠模型是否建立。
心氣虛證是心血管病系統(tǒng)中尤為常見的證型[12],而且在動物模型的構建中很難建立無兼證的心氣虛證模型[13]?!端貑枴ご讨菊撈酚小肮仁馐?,谷虛氣虛”。 “氣為血之帥,血為氣之母”,“氣能行血”,血的正常運行有賴于氣的推動及谷氣的充盈,而心臟的正常搏動在于氣血的正常運行。本實驗在飲食方面只給予大鼠每日基礎需要量,并增加其消耗量,意在模擬“谷虛氣虛”“勞則氣虛”;心得安溶液具有抑制心肌細胞鈣離子和鈉離子內(nèi)流的作用,也是非選擇性β受體阻斷劑,大劑量或長期使用可引起心肌缺氧等,實驗中在大鼠力竭運動后灌服心得安溶液,加重心氣耗損,以復制出CHD心氣虛證動物模型。
6 氣虛血瘀證小型豬模型
在CHD中醫(yī)證候中,氣虛和血瘀證候最為常見[14-16]。該模型首先對小型豬進行麻醉,無菌條件下肋間開胸,于左回旋支冠狀動脈放置Ameroid收縮環(huán),縫合,建立慢性心肌缺血模型[17]。郭氏等[18]在此基礎上觀察并采集術前正常狀態(tài)及術后4周的四診信息、心電圖、冠狀動脈造影、頸部前腔靜脈血5 mL、超聲心動圖,并以此評價小型豬血瘀證模型的建立情況。經(jīng)過觀察,該模型4~8周由血瘀證向氣虛血瘀證證型轉(zhuǎn)變,在8~12周該模型表現(xiàn)為氣虛血瘀證[18-19]。
首先建立慢性心肌缺血小型豬模型,在造模第4周對小型豬進行冠狀動脈造影、毒理學、微球流量、病理組織學、磁共振掃描檢查,以檢查結果評價是否建立心肌缺血模型[17];然后參照血瘀證診斷標準[20]進行診斷,通過對比模型組與正常組的四診信息、冠狀動脈造影、心電圖、血液流變學等指標進行評價[18],通過數(shù)理統(tǒng)計分析差異是否具有統(tǒng)計學意義,判斷血瘀證模型是否建立;8~12周詳細記錄小型豬動態(tài),采集詳細四診信息,借助心臟超聲、冠狀動脈造影,根據(jù)血瘀證診斷標準[20]、中醫(yī)虛證辨證參考標準[21]及中獸醫(yī)臨床診斷經(jīng)驗[22]進行評價,根據(jù)統(tǒng)計分析差異是否具有統(tǒng)計學意義判斷CHD氣虛血瘀證小型豬模型是否建立。
《難經(jīng)·二十二難》曰:“氣主煦之,血主濡之?!敝嗅t(yī)學有“氣為血之帥,血為氣之母”與“因?qū)嵵绿摗钡睦碚摚瑲饽苌?、行血、攝血,血能養(yǎng)氣、載氣。本實驗首先采用結扎左回旋支冠狀動脈復制出血瘀證型,然后因脈絡瘀阻,血行凝滯,瘀血不去,新血不生,留瘀日久,遂心氣痹阻,以致心氣虛損,意在中醫(yī)因?qū)嵵绿摾碚撝笇聫椭瞥鯟HD氣虛血瘀證動物模型。此模型雖造模時間較長,但基本符合中醫(yī)理論中病的發(fā)展傳變規(guī)律,對臨床實驗研究具有指導意義。
7 小結與展望
《難經(jīng)·六十難》說:“心之病,有厥痛,有真痛,何謂也……其五臟氣相干,名厥心痛……其痛甚,但在心,手足青者,即名真心痛?!薄督饏T要略·胸痹心痛短氣病脈證治》:“胸痹,心中痞氣,氣結在胸,胸滿,脅下逆搶心?!逼渲饕C為心脈痹阻,臨床主要表現(xiàn)為本虛標實,本虛責之氣虛、氣陰兩虛及陽氣虛,標實責之寒凝、氣滯、痰濁、血瘀,且可相兼為病。CHD中醫(yī)證候表現(xiàn)很多,在研究過程中需要根據(jù)不同要求建立不同的動物模型。
目前較為提倡病證結合動物模型,一般先建立疾病模型,再根據(jù)所需的中醫(yī)證候施予干預因素,以獲得病證結合模型[23]。而在中醫(yī)臨床診療中,“證”隨“病”的發(fā)展轉(zhuǎn)歸不斷變化,很難確定所建立的模型是否為所需要的動物模型。由于“證”是中醫(yī)特色,與“病”緊密聯(lián)系,因此,在建立中醫(yī)證候動物模型過程中應同時考慮病證結合,使動物模型更加符合臨床實際。這樣才更符合臨床需要,實驗的準確性和穩(wěn)定性也才能得到保障。
目前CHD中醫(yī)證候動物模型建立尚存在一些問題:①動物與人及動物間的生理機能方面均存在差異,且性別不同、品系不同的實驗動物對造模刺激因素的反應不同,相同的處理手段對不同種類、不同年齡的動物產(chǎn)生的生理影響也不盡相同。因此,在造模的動物選擇上,應更注重選擇與人體病理生理特點相近的動物,以增加實驗在臨床應用上的可靠性。②在中醫(yī)證候動物的模型建立評價中,缺少符合中醫(yī)特色的評價體系,應建立規(guī)范的冠心病中醫(yī)證候動物模型的評價體系,使CHD中醫(yī)證候動物模型的建立更加統(tǒng)一化、規(guī)范化、合理化、穩(wěn)定化。③人和動物之間必然存在著差異,動物模型只是在一定程度上對人的病理現(xiàn)象進行模擬,不能完全對等,具體的CHD中醫(yī)證候動物模型與臨床實踐存在一定差距,今后應當對CHD中醫(yī)證候動物模型做進一步深入研究,使CHD中醫(yī)證候動物模型更符合中醫(yī)病因病機要求,接近人體生理病理特點,符合臨床需要,為臨床應用打好基礎。
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