劉 飛,張 鵬,吳淡娟，趙明海,紀(jì)婷婷

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)科， 廣州 510515)

陽虛體質(zhì)的血漿1H-NMR代謝組學(xué)研究*

劉 飛,張 鵬△,吳淡娟，趙明海,紀(jì)婷婷

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)科， 廣州 510515)

目的 應(yīng)用核磁共振(NMR)波譜學(xué)的代謝組學(xué)方法，檢測(cè)中醫(yī)體質(zhì)分類中陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)的血漿代謝物，研究陽虛體質(zhì)中特征代謝物的特點(diǎn)。方法 收集陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)各8例的血液樣品，采用橫向豫馳時(shí)間的分布曲線磁共振脈沖序列(CPMG)采集血液樣品數(shù)據(jù)，觀測(cè)血漿中的小分子代謝物。用多元統(tǒng)計(jì)分析方法比較陽虛體質(zhì)組與平和體質(zhì)組血漿內(nèi)源性差異代謝產(chǎn)物。結(jié)果 血漿中的代謝產(chǎn)物，與平和體質(zhì)組相比，在陽虛體質(zhì)組中乳酸(shift 1.33;t=-3.018)、低密度膽固醇脂蛋白(shift 1.26;t=-2.849)、脂肪酸(shift 2.25;t=-3.325)、氧化三甲胺(shift 3.26;t=-5.217)、N-乙酰糖蛋白(shift 2.03;t=-4.684)水平都有不同程度下降；而磷脂酰膽堿(shift 3.22;t=3.901)、葡萄糖(shift 3.42;t=3.390)與谷氨酰胺(shift 2.12;t=5.177)水平都有不同程度升高。結(jié)論 陽虛、平和體質(zhì)不僅存在體內(nèi)生物合成與分解中能量代謝、糖代謝、脂代謝、氨基酸代謝等的差異，也存在神經(jīng)遞質(zhì)、臟腑功能的改變。

陽虛；能量代謝；體質(zhì)學(xué)說；平和體質(zhì)；代謝組學(xué)

在當(dāng)代，“中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說”的概念被明確提出，中醫(yī)體質(zhì)是個(gè)體生命過程中，在先天稟賦基礎(chǔ)上、隨年齡、性別、生活條件、地理環(huán)境及社會(huì)因素等的發(fā)展變化形成的具有差異性的，但又相對(duì)穩(wěn)定的固有特質(zhì)[1]?！吨嗅t(yī)體質(zhì)分類與判定標(biāo)準(zhǔn)》在2009年由中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)制定發(fā)布?！皹?biāo)準(zhǔn)”確定了中醫(yī)體質(zhì)9種基本類型，平和體質(zhì)為正常體質(zhì)，其他8種體質(zhì)類型氣虛質(zhì)、陽虛質(zhì)、陰虛質(zhì)、痰濕質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)、氣郁質(zhì)、特稟質(zhì)屬于偏頗體質(zhì)[2]。陽虛體質(zhì)是對(duì)個(gè)體在未病或已病狀態(tài)下所表現(xiàn)的陽氣虧虛狀態(tài)的表述?！瓣枤馑靥摗薄瓣柼撝|(zhì)”“中焦陽氣素虛之人”等皆為古代中醫(yī)學(xué)對(duì)陽虛體質(zhì)的描述?！吨嗅t(yī)體質(zhì)分類與判定》標(biāo)準(zhǔn)指出陽虛體質(zhì)陽氣不足，以手腳發(fā)涼、腹部背部怕冷等虛寒表現(xiàn)為主要特征；以體倦嗜臥精神不振，飲食畏涼舌淡胖嫩有齒痕，脈沉遲等為日常表現(xiàn)。近年來，許多學(xué)者都對(duì)陽虛體質(zhì)的機(jī)制進(jìn)行了研究，為陽虛體質(zhì)的診斷提供了一定的客觀數(shù)據(jù)[3]，研究主要包括基因組拷貝數(shù)變異、生理生化指標(biāo)、外周血基因表達(dá)等方面[4-8]。代謝組學(xué)能準(zhǔn)確地反映生物體系狀態(tài)，揭示機(jī)體代謝的本質(zhì)。代謝組學(xué)越來越廣泛應(yīng)用于中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域[9-11]。其通過分析生物體液中的代謝產(chǎn)物的變化來確定代謝過程與參與的生物標(biāo)志物，是生物體綜合狀態(tài)的直接體現(xiàn)[12]，但關(guān)于陽虛體質(zhì)的代謝組學(xué)方面研究較少。其中核磁共振(NMR)技術(shù)是代謝組學(xué)中比較常用的處理方法，其檢測(cè)手段快速，準(zhǔn)確性高，而且不會(huì)破壞組織樣品。故本研究采用基于NMR技術(shù)的代謝組學(xué)方法來研究陽虛體質(zhì)與濕熱體質(zhì)的血漿代謝產(chǎn)物，進(jìn)一步探究二者代謝產(chǎn)物的變化，為尋找陽虛體質(zhì)的差異代謝產(chǎn)物提供方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于2015年3～4月在廣州市某社區(qū)招募志愿者，同時(shí)進(jìn)行中醫(yī)體質(zhì)問卷調(diào)查。根據(jù)中醫(yī)體質(zhì)得分對(duì)志愿者體質(zhì)進(jìn)行判定[2]。篩選出符合陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)的研究對(duì)象共16例，每組體質(zhì)各8例。研究對(duì)象年齡18～48歲，平均(33.50±10.99)歲。身體健康，近1個(gè)月內(nèi)未服用任何藥物，經(jīng)本人知情同意后納入研究。兩組人群性別(P=1.000)、年齡(P=0.869)、BMI(P=0.966)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 儀器與試劑 瑞士Bruker公司 Bruker-500 AVANCEⅢ核磁共振譜儀、ZH-2型自動(dòng)漩渦混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)、微量高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)、含氘代三甲基硅基丙酸鈉(TSP)(Sigma公司)、重水(D2O)、磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、氯化鈉(NaCl)。

英最終被確診為子宮內(nèi)膜癌，幸運(yùn)的是癌細(xì)胞并未向鄰近器官及組織擴(kuò)散。考慮英的年齡太大，不宜手術(shù)，醫(yī)生建議她馬上接受放療治療。英當(dāng)然不懂這些，她只記得外甥說自己的病有得治。英舒了一口長氣，她的臉上有了久違的笑容，內(nèi)心按捺不住高興。

1.3 血液標(biāo)本的采集、預(yù)處理 志愿者在采樣前24 h禁酒、避免勞累、暴飲暴食，飲食清淡，心情平和。早上8:00空腹，由醫(yī)院專職醫(yī)務(wù)人員用肝素抗凝管抽取靜脈血3 mL。將所得血液樣品，14 000×g離心4 min，取血漿300 μL，加入100 μL的重水與200 μL PBS緩沖液，充分振蕩混勻，再加入5 mm核磁共振管中待用。

2.3 歸一化積分值得統(tǒng)計(jì)分析 根據(jù)PLS-DA模型的VIP大于1的化學(xué)位移值，找出其相對(duì)應(yīng)的歸一化積分值，做統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05的原則，共找出16個(gè)差異化學(xué)位移值(表1)，將差異性值通過人類代謝組數(shù)據(jù)庫(http：//www.hmdb.ca)查找其所代表的代謝物。最后鑒定出對(duì)分類影響較大的差異性代謝物8個(gè)(表2)。與平和體質(zhì)組相比，陽虛體質(zhì)組的血漿代謝產(chǎn)物中乳酸(P=0.015、0.009、0.034)、極低密度脂蛋白/低密度脂蛋白(P=0.013、0.011)、脂肪酸(P=0.005)、氧化三甲胺(P=0.000)、N-乙酰糖蛋白(P=0.001)水平下降；而葡萄糖(P=0.010)、磷脂酰膽堿(P=0.002)與谷氨酰胺(P=0.000)水平升高。

“田阿姨，我們給你和楊叔叔各留了一塊糖，你吃吧，特別甜?！毙⊙绢^不說還好，一說，田志芳又抽抽嗒嗒哭起來。

JDBC數(shù)據(jù)庫連接技術(shù)：JDBC(Java Data Base Connectivity，java數(shù)據(jù)庫連接)是一種用于執(zhí)行SQL語句的Java API，也是基于標(biāo)準(zhǔn)SQL數(shù)據(jù)庫的訪問接口，可為多種關(guān)系數(shù)據(jù)庫提供統(tǒng)一訪問，它由一組用Java語言編寫的類和接口組成[5]。JDBC提供了一種基準(zhǔn)，據(jù)此可構(gòu)建更高級(jí)的工具和接口，使數(shù)據(jù)庫開發(fā)人員能夠編寫數(shù)據(jù)庫應(yīng)用程序?？蛻舳送ㄟ^Java程序連接數(shù)據(jù)庫的關(guān)系如圖4所示。

2 結(jié) 果

1.統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)：按GB 3358-1982《統(tǒng)計(jì)學(xué)名詞及符號(hào)》的有關(guān)規(guī)定，統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)一律采用斜體。

1：陽虛體質(zhì)組；2：平和體質(zhì)組。

圖1 陽虛體質(zhì)組與平和體質(zhì)組的主成分分析模型矩陣圖

2.2 陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)血漿的1H NMR譜正交偏最小二乘法分析(OPLS-DA) 陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)的血漿代謝組OPLS-DA模型見圖2。建模后計(jì)算出2個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.497，R2Y=0.999，Q2=0.954，對(duì)應(yīng)積分矩陣圖,R2Y越接近于1，代表該模型建立越好。該模型解釋了49.7%的原始數(shù)據(jù)，并擁有95.4%的預(yù)測(cè)能力。圖中每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)樣本，綠色點(diǎn)為陽虛體質(zhì)組，藍(lán)色點(diǎn)為平和體質(zhì)組。結(jié)果，所有樣品集中分布于散點(diǎn)圖的橢圓內(nèi)，模型擬合效果好，兩組之間完全分離，提示陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)血漿代謝產(chǎn)物差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1：陽虛體質(zhì)組；2：平和體質(zhì)組。

圖2 陽虛體質(zhì)組與平和體質(zhì)組正交偏最小二乘法分析模型矩陣圖

1.4 數(shù)據(jù)的采集和處理 應(yīng)用核磁共振波譜儀，采用橫向豫馳時(shí)間的分布曲線磁共振脈沖序列(carr purcell meiboom gill，CPMG)檢測(cè)血漿中的小分子代謝物。相關(guān)參數(shù)如下：頻率為600 MHz，采樣點(diǎn)數(shù)為64 k，累加掃描次數(shù)為128次，譜寬為20×10-6Hz，豫馳延遲(relaxation delay)2 s，掃描時(shí)間1.638 s，采樣范圍-5～15，溫度為25 ℃。應(yīng)用Mestrenova6.1軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，將獲得的血液1H-NMR數(shù)據(jù)經(jīng)傅里葉變換得到圖像梯度分布頻譜圖，然后進(jìn)行統(tǒng)一的定標(biāo)、基線、相位調(diào)整以及積分處理。本實(shí)驗(yàn)以乳酸雙重峰(1.33)為標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)位移進(jìn)行定標(biāo)，刪除4.6～6.0 ppm的水峰，將積分區(qū)間δ0.5～9.0 ppm以每段為δ0.01進(jìn)行分段積分，對(duì)所有積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理。為消除殘留的水信號(hào)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在積分值表中將4.6～6.0 ppm區(qū)間的積分值刪除，然后將所得數(shù)據(jù)輸出并轉(zhuǎn)換到Excel 2007文件保存。

表1 陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)血漿代謝物歸一化積分值比較

↑：表示上升；↓：表示下降。

表2 陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)比較的差異性代謝產(chǎn)物

↑：表示上升；↓：表示下降。

3 討 論

在上述差異代謝物中，葡萄糖和N-乙酰糖蛋白與糖代謝相關(guān)。葡萄糖是人體內(nèi)新陳代謝中不可或缺的重要物質(zhì)之一，為血糖在血液運(yùn)輸中的主要成分，并為體內(nèi)氧化提供能量。N-乙酰糖蛋白與N-乙酰氨基半乳糖，N-乙酰葡萄糖胺，N-乙酰神經(jīng)氨酸均屬于同一類可組成糖蛋白糖鏈的單糖，糖蛋白糖鏈最獨(dú)特的生物學(xué)作用是參與如淋巴因子、白細(xì)胞介素等免疫介質(zhì)的生物相互識(shí)別、結(jié)合，完成免疫應(yīng)答反應(yīng)過程。相比于平和體質(zhì)組，陽虛體質(zhì)組血漿中葡萄糖含量升高，而N-乙酰糖蛋白合成減少，提示陽虛體質(zhì)存在一定程度的糖代謝紊亂，以及免疫功能下降。但具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

在這些差異代謝物中，與能量代謝有關(guān)的化合物有乳酸。糖酵解是乳酸生成的主要途徑，其方式又是生物體在無氧下從碳水化合物(糖類)獲得能量的一種主要形式。在體內(nèi)的生物合成與分解中，葡萄糖經(jīng)過磷酸化、氧化等反應(yīng)生成丙酮酸，有氧條件下，丙酮酸可進(jìn)一步氧化磷酸化生成乙酰CoA進(jìn)入三羧酸循環(huán)，釋放ATP能量，最后生成CO2和H2O；無氧條件下，糖酵解產(chǎn)生的丙酮酸則加氫還原為乳酸，并釋放出ATP能量[13]。平和體質(zhì)組乳酸濃度水平高于陽虛體質(zhì)組，提示總體能量代謝水平方面陽虛體質(zhì)組是下降的；同時(shí)由于人體主要依賴外周血中的紅細(xì)胞運(yùn)送氧分子供給其他細(xì)胞和組織進(jìn)行能量代謝，但紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中并無線粒體，主要依賴糖酵解的無氧代謝供給自身能量，乳酸濃度的下降提示這些組織的功能也可能因此受到影響。《素問∶調(diào)經(jīng)論》指出陽虛體質(zhì)的成因，即“陽虛則外寒，陰虛則內(nèi)熱，陽盛則外熱，陰盛則內(nèi)寒?！毕忍旆A賦陽氣的不足，或病后陽虧，容易形成陽虛體質(zhì)。中醫(yī)認(rèn)為，陽虛是陰陽平衡失調(diào)的狀態(tài)，陽虛體質(zhì)總以陽“虛”為主要特征，由“虛”導(dǎo)致機(jī)體功能減退，反映在能量代謝上就表現(xiàn)為水平下降。

本研究采用1H NMR譜對(duì)陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)的血漿代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析(平和體質(zhì)作為正常對(duì)照)，結(jié)果表明陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)主要存在能量代謝、糖代謝、脂代謝、蛋白質(zhì)合成等方面的異常。

與中醫(yī)的整體觀一致，代謝組學(xué)研究從整體角度對(duì)陽虛體質(zhì)的生物特征進(jìn)行了探索。本研究結(jié)果表明陽虛體質(zhì)不僅存在著能量代謝、糖代謝、脂代謝、氨基酸代謝的改變，也存在著神經(jīng)遞質(zhì)、臟腑功能及與免疫功能相關(guān)介質(zhì)的改變。這些代謝特征既與陽虛體質(zhì)的先天稟賦有關(guān)，也受到環(huán)境、飲食、氣候、心理等后天因素的影響，在先天與后天因素的共同影響下，導(dǎo)致了人體免疫功能、生物功能調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂，進(jìn)而影響代謝產(chǎn)物的變化。

就全國范圍而言，較之人均轉(zhuǎn)移支付額，人均GDP對(duì)中國教育水平提高的貢獻(xiàn)率要更高，為2.7%；而人均轉(zhuǎn)移支付額對(duì)中國教育水平提高的貢獻(xiàn)率為0.96%，僅為人均GDP貢獻(xiàn)率的35.6%?？梢娸^之財(cái)政轉(zhuǎn)移支付資金的支持，地方經(jīng)濟(jì)實(shí)力的提升更能有效地推動(dòng)中國地區(qū)間教育水平的趨同。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，陽虛體質(zhì)組的谷氨酰胺水平高于平和質(zhì)組，而氧化三甲胺水平低于平和質(zhì)組。其中氧化三甲胺與慢性腎病相關(guān)[15]。而谷氨酰胺作為非必需氨基酸，是人體必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)之一。谷氨酰胺是構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位，可以增加蛋白質(zhì)的合成，與氨基酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)密切相關(guān)[16]。在興奮性神經(jīng)元中，谷氨酰胺被轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼幔⒃谕挥|小泡中重新組裝；在抑制性神經(jīng)元中，谷氨酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼岷筮M(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)棣?氨基丁酸，并包裝于突觸小泡中。

本研究結(jié)果顯示，陽虛體質(zhì)血漿中低密度膽固醇脂蛋白水平降低，與脂代謝密切相關(guān)。脂蛋白是膽固醇及其酯化物、三酰甘油在體內(nèi)運(yùn)輸?shù)妮d體。高密度脂蛋白富含膽固醇，介導(dǎo)的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，即從外周組織攜帶膽固醇到肝臟中，再分泌到膽汁中，進(jìn)而調(diào)節(jié)脂代謝、改善血脂異常[14]。而低密度脂蛋白運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞，極低密度脂蛋白作用則主要是運(yùn)輸三酰甘油用于能量代謝或儲(chǔ)存。脂肪酸也與脂、能量代謝密切相關(guān)。磷脂酰膽堿作為磷脂的主要成分之一，也參與了脂代謝。人體脂肪酸主要以機(jī)體主要的能量?jī)?chǔ)存形式三酰甘油存在。陽虛體質(zhì)血漿中脂肪酸水平低于平和體質(zhì)組，說明其存在脂代謝紊亂的表現(xiàn)，產(chǎn)能不足，皮下脂肪組織儲(chǔ)備不足，因而產(chǎn)生怕冷、手足不溫等癥狀。

[1]王琦．中醫(yī)體質(zhì)學(xué)(2008版) [M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009．

[2]中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)．中醫(yī)體質(zhì)分類與判定[J]．中華養(yǎng)生保健:上半月，2009，4(9)：38-39．

[3]Tang WH,Wang Z,Kennedy DJ,et al.Gut microbiota-dependent trimethylamine N-oxide (TMAO) pathway contributes to both development of renal insufficiency and mortality risk in chronic kidney disease[J].Circ Res,2015,116(3):448-455.

[4]王琦，姚實(shí)林，董靜，等．陽虛體質(zhì)者內(nèi)分泌及免疫功能變化[J]．中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2008，6(12)：1226-1232．

[5]姚實(shí)林．陽虛質(zhì)理論及其外周血基因表達(dá)譜研究[D]．北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2007．

[6]Wang Q,Yao S.Molecular basis for cold-intolerant yang-deficient constitution of traditional Chinese medicine[J].Am J Chin Med,2008,36(5):827-834.

[7]倪紅梅，吳艷萍，何裕民．用基因芯片技術(shù)研究青少年腎陽虛體質(zhì)差異表達(dá)基因[J]．上海中醫(yī)藥雜志，2004，38(6)：3-5．

[8]姚實(shí)林，張祖志，吳君霞，等．陽虛質(zhì)者基因組拷貝數(shù)變異小樣本研究[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20(11)：4-7,60．

[9]楊中良，胡慶禧，李劍，等．代謝組學(xué)在中醫(yī)中藥領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展[J]．河南中醫(yī)，2015，35(1)：204-206．

[10]袁博，杜小正，王金海，等．代謝組學(xué)在中醫(yī)學(xué)中的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J]．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，17(12)：57-59．

[11]余王琴，鄭小偉．基于代謝組學(xué)的中醫(yī)證候研究[J]．中醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，29(5)：673-677．

[12]郭賓，戴仁科．代謝組學(xué)及其研究策略和分析方法進(jìn)展[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17(3)：554-563．

[13]楊玲．糖無氧酵解與運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練[J]．中國體育教練員，2015(1)：14-15．

[14]蘇中軍，張肅，姜軍．高密度脂蛋白生物學(xué)功能及運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的研究與進(jìn)展[J]．中國組織工程研究，2015，19(37)：6048-6053．

[15]許瑞旭，竇思東．中醫(yī)陽虛型體質(zhì)現(xiàn)代研究概述[J]．健康研究，2015，35(5)：505-507．

[16]王晶，左小霞，張曄．谷氨酰胺臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]．人民軍醫(yī)，2013，56(4)：469-470．

《重慶醫(yī)學(xué)》雜志對(duì)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的有關(guān)要求

2.1 陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)血漿的1H NMR譜主成分分析(PCA) 采用PCA方法對(duì)陽虛體質(zhì)和平和體質(zhì)兩組的血漿樣品的1H NMR譜進(jìn)行分析，建模后累計(jì)計(jì)算出8個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.963，Q2=0.505，對(duì)應(yīng)積分矩陣見圖1。R2X、Q2均大于0.5，說明該模型穩(wěn)定可靠，該模型分析了96.3%的原始數(shù)據(jù)。圖中每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)樣本，綠色點(diǎn)為陽虛體質(zhì)組，藍(lán)色點(diǎn)為平和體質(zhì)組。從圖1可以看出，所有樣本集中分布于散點(diǎn)圖的橢圓內(nèi)，證明模型擬合效果較好，陽虛體質(zhì)、平和體質(zhì)兩組可被明顯區(qū)分開來，可進(jìn)一步應(yīng)用多種方法如OPLS-DA來分析代謝指紋。

1.5 NMR數(shù)據(jù)分析 本實(shí)驗(yàn)采用SIMCA-P軟件(V13.00，Umetrics，Sweden)對(duì)獲得的NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。首先將錄入的Excel格式數(shù)據(jù)保存為CSV格式的文件，然后導(dǎo)入到SIMCA-P軟件，選擇進(jìn)行主成分(PCA)分析，以及根據(jù)正交偏最小二乘(PLS-DA)法返回的回歸因子做類別判斷進(jìn)行建模。通過PLS-DA模型獲得的得分圖與變量權(quán)重值(variable importance for the projection，VIP)分辨出對(duì)分類影響較大的變量，確定陽虛、平和二體質(zhì)組間的差異代謝產(chǎn)物，據(jù)此確定出陽虛體質(zhì)的差異性代謝產(chǎn)物。

基于矩生成函數(shù)近似的雙媒質(zhì)協(xié)作通信功率優(yōu)化分配//陳智雄,景一方,韓東升,邱麗君,田新成//(23):159

2.研究設(shè)計(jì)：應(yīng)告知研究設(shè)計(jì)的名稱和主要方法。如調(diào)查設(shè)計(jì)(分為前瞻性、回顧性或是橫斷面調(diào)查研究)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(應(yīng)告知具體的設(shè)計(jì)類型，如自身配對(duì)設(shè)計(jì)、成組設(shè)計(jì)、交叉設(shè)計(jì)、析因設(shè)計(jì)、正交設(shè)計(jì)等)，臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)(應(yīng)告知屬于第幾期臨床試驗(yàn)，采用了何種盲法措施等)；主要做法應(yīng)圍繞4個(gè)基本原則(重復(fù)、隨機(jī)、對(duì)照、均衡)概要說明，尤其要告知如何控制重要非試驗(yàn)因素的干擾和影響。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法的選擇：對(duì)于計(jì)量資料，應(yīng)根據(jù)所采用的設(shè)`計(jì)類型、資料所具備的條件和分析目的，選用合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，不應(yīng)盲目套用t檢驗(yàn)和單因素方差分析；對(duì)于計(jì)數(shù)資料，應(yīng)根據(jù)所采用的設(shè)計(jì)類型、定性變量的性質(zhì)和頻數(shù)所具備的條件及分析目的，選用合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，不應(yīng)盲目套用χ2檢驗(yàn)。對(duì)于回歸分析，應(yīng)結(jié)合專業(yè)知識(shí)和散點(diǎn)圖，選用合適的回歸類型，不應(yīng)盲目套用簡(jiǎn)單直線回歸分析；對(duì)于具有重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)檢驗(yàn)回歸分析資料，不應(yīng)簡(jiǎn)單化處理；對(duì)于多因素、多指標(biāo)資料，要在一元分析的基礎(chǔ)上，盡可能運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)分析方法，以便對(duì)因素之間的交互作用和多指標(biāo)之間的內(nèi)在聯(lián)系做出全面、合理的解釋和評(píng)價(jià)。

將圖1的四邊形OABC中的矢量等式r= b+ a- c的兩邊作自身的點(diǎn)積(數(shù)量積)有：rr= bb+ aa+ cc+ 2(ba- bc- ac)，即r2= b2+ a2+ c2+ 2(bacφ- bccφ?ψ- accψ)，[(b2+ a2+ c2- r2)/ 2+ bacφ] /c= acψ+ bcψ?φ，

5.統(tǒng)計(jì)結(jié)果的解釋和表達(dá)：應(yīng)寫明采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的具體名稱(如：成組設(shè)計(jì)資料的t檢驗(yàn)、兩因素析因設(shè)計(jì)資料的方差分析、多個(gè)均數(shù)之間兩兩比較的q檢驗(yàn)等)，統(tǒng)計(jì)量的具體質(zhì)(如：t=3.45，χ2=4.68，F(xiàn)=6.79等)；在用不等式表示P值的情況下，一般情況下選用P>0.05、P<0.05和P<0.01 3種表達(dá)方式，無須再細(xì)分為P<0.001或P<0.000 1。當(dāng)涉及總體參數(shù)(如總體均數(shù)、總體率)時(shí)，再給出顯著性檢驗(yàn)結(jié)果的同時(shí)，應(yīng)再給出95%可信區(qū)間(CI)。

Plasma 1H-NMR metabonomics research of Yang-deficiency constitution*

LiuFei,ZhangPeng△,WuDanjuan,ZhaoMinghai,JiTingting

(DepartmentofLaboratoryMedicine,NanFangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510515,China)

Objective Plasma etabonomics was used to study yang-deficiency constitution,for analyzing the characteristic metabolites.Methods Plasma samples from 8 participants with yang-deficiency constitution and 8 participants with balanced constitution were collected.Carr-Purcell-Meiboom-Gill(CPMG) pulse sequence was used to collect plasma data,and to observe small molecule metabolites in plasma.Differences in endogenous metabolites were detected by multivariate statistical analysis.Results Compared with balanced constitution,lactic acid(t=3.018),low density lipoprotein cholesterol(t=-2.849),fatty acids(t=-3.325),trimethylamine oxide(t=-5.217),N - acetyl glycoproteinare(t=-4.684) lower in plasma of yang-deficiency constitution,while glucose(t=3.390),phosphatidyl choline(t=3.901) and glutamine(t=5.177) are higher.Conclusion The biomarkers supply new ways for the individual differences from the point of view of metabonomics.Yang-deficiency constitution has some metabolism disorder of energy,sugar,lipid,and amino acid metabolism,the neurotransmitter,and viscera function.

yang deficiency;energy metabolism;physical constitution theory;balanced constitution;metabonomics

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.34.008

廣東省中醫(yī)藥局基金項(xiàng)目資助(20132184)。 作者簡(jiǎn)介：劉飛(1974-)，主管技師，碩士，主要從事臨床試驗(yàn)診斷學(xué)的研究?！?/p>

，E-mail:nfyyzp@126.com。

R446.1

A

1671-8348(2016)34-4775-04

2016-05-17

2016-08-05)