張靜雯　伍蔚萍（浙江燎原藥業(yè)股份有限公司　臨?！?17016）

HPLC法測定硫酸氫氯吡格雷中的左旋樟腦磺酸雜質(zhì)的含量

張靜雯伍蔚萍（浙江燎原藥業(yè)股份有限公司臨海317016）

摘要：目的：建立硫酸氫氯吡格雷中左旋樟腦磺酸雜質(zhì)的HPLC檢測方法。方法：采用Agilent 1200色譜系統(tǒng)；色譜柱為Welch XB C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相A為三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.5），流動相B為乙腈，梯度洗脫：0～10min，流動相B 為20%，10～15min流動相從20%升到80%，15～20min流動相B為80%，20～21min流動相B從80%下降到20%，21～30min，流動相B為20%；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長為207nm；進樣量為10μL。結(jié)果：左旋樟腦磺酸雜質(zhì)可與硫酸氫氯吡格雷中的雜質(zhì)分開，檢測限為0.02%。結(jié)論：該法簡單、快速、準確和重復性好，可用于硫酸氫氯吡格雷原料藥中左旋樟腦磺酸雜質(zhì)的控制。

關(guān)鍵詞：左旋樟腦磺酸 硫酸氫氯吡格雷 雜質(zhì)含量 HPLC

硫酸氫氯吡格雷，化學名為2-（2-氯苯基）-2-（6，7-二氫噻吩并［3，2-c］吡啶-5-基）乙酸甲酯硫酸氫鹽，是一種新型高效安全的抗血小板凝結(jié)藥物。大量的臨床研究表明，它具有藥效顯著、安全和耐受性強的優(yōu)點，具有良好的市場前景［1］。硫酸氫氯吡格雷合成工藝中需要左旋樟腦磺酸作為其中間體消旋體的拆分劑，因此在硫酸氫氯吡格雷原料藥中需要控制左旋樟腦磺酸的殘留量，限度要求為0.10%。筆者查閱大量文獻，并未發(fā)現(xiàn)有對硫酸氫氯吡格雷中左旋樟腦磺酸的檢測報道，因此筆者通過試驗，確定可使用HPLC方法對硫酸氫氯吡格雷中的左旋樟腦磺酸進行檢測。通過對此方法進行驗證，證明該方法的專屬性強，靈敏度高，穩(wěn)定性好，可有效控制硫酸氫氯吡格雷原料藥中的左旋樟腦磺酸雜質(zhì)的含量。

1實驗材料

Agilent 1200（包括二元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、VWD檢測器、Chemistaion色譜工作站）；UV-2540紫外分光光度計（島津）；XS205型電子天平（梅特勒-托利多公司）。

左旋樟腦磺酸對照品（Adamas-beta），硫酸氫氯吡格雷樣品（浙江燎原藥業(yè)股份有限公司自制），甲醇、乙腈（色譜級，天津康科德科技有限公司）、純凈水（娃哈哈品牌），三乙胺（分析純，上海凌峰化學試劑有限公司）磷酸（分析純，國藥集團）。

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1標準儲備溶液：精密稱取適量的左旋樟腦磺酸對照品，用稀釋液［乙腈:水（20:80）］溶解制成濃度為1.0mg/mL的溶液。

2.1.2標準溶液：移取1.0mL標準儲備溶液，置于100mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，即得濃度為10μg/mL的溶液。

2.1.3樣品溶液：稱取適量硫酸氫氯吡格雷樣品，用稀釋液溶解配制成濃度為10mg/mL的溶液。（必要時可超聲以使樣品溶解完全！）2.1.4加樣混合溶液：稱取約100mg硫酸氫氯吡格雷樣品，置于10.0mL量瓶中，用1.0mL稀釋液溶解，再移取0.1mL標準儲備溶液置于上述量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，即得。

2.2色譜條件：Welch XB C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相A:取1.0mL三乙胺置于1000mL水中，用50%磷酸調(diào)節(jié)pH 為2.5；流動相B：乙腈；洗脫程序：梯度洗脫，具體洗脫程序見表1；檢測波長為207nm；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃；進樣量為10μL；運行時間30min。

2.3方法學考察

2.3.1紫外波長的確定：使用UV-2540紫外分光光度計，以甲醇作為空白參比，取標準溶液作為測試溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，獲得紫外吸收光譜見圖1。

從圖1看出，左旋樟腦磺酸僅在200nm左右有少許紫外吸收，考慮波長太低，溶劑空白干擾變大，選擇207nm作為測定波長。

2.3.2專屬性考察：分別取標準溶液、樣品溶液、加樣混合溶液進樣測定，獲得色譜圖2～4。由圖4可見，左旋樟腦磺酸與相鄰色譜峰得到較好的分離，硫酸氫氯吡格雷中其他雜質(zhì)峰均未對左旋樟腦磺酸的測定造成干擾。

表1梯度洗脫程序

2.3.3檢測限（LOD）：按照信噪比為3∶1的要求配制左旋樟腦磺酸的檢測限溶液（移取標準溶液2.0mL置于10.0mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，即得，濃度約為2μg/mL）。檢測限溶液須連續(xù)進樣3針，從Agilent Chemstation工作站圖譜數(shù)據(jù)獲得3次進樣的信噪比S/N值分別為3.2、3.3、3.5，平均值為3.3，符合結(jié)果要求。當檢測限濃度約為2μg/mL時，相當于在樣品中的含量為0.02%，對于限度要求0.10%來說，此方法靈敏度已可滿足雜質(zhì)定量的要求。

2.4樣品測定：取3批硫酸氫氯吡格雷樣品，按“樣品溶液”方法操作制備溶液，每批樣品平行制備2份，每份測定1次，記錄色譜圖。

左旋樟腦磺酸含量計算方式：限量法即要求樣品溶液中左旋樟腦磺酸的峰面積（AU）不得大于標準溶液中左旋樟腦磺酸峰面積（AS），即AU≤AS。（限度為0.10%）

具體結(jié)果見表2。

表2　3批樣品中左旋樟腦磺酸的測定

3討論

3.1左旋樟腦磺酸僅在200nm左右低波處有紫外吸收，由于乙腈截止波長比甲醇低很多，選擇乙腈作為流動相有機相較好，可以避免溶劑的干擾。

3.2由于考慮到左旋樟腦磺酸在成品硫酸氫氯吡格雷中潛存性不大，方法開發(fā)實驗中對多批硫酸氫氯吡格雷樣品檢測，均未檢出此雜質(zhì)，再考慮到方法驗證的成本以及檢測方法的簡便性，對此雜質(zhì)的檢測方法用限量法較合適。

3.3因為本檢測方法屬于雜質(zhì)限量控制，按照ICH Q2［2］以及《中國藥典》附錄9101［3］等對分析方法驗證指南，對雜質(zhì)限量檢測方法驗證，方法學考察專屬性和檢測限即可。

參考文獻

［1］姜丹.急性缺血性腦血管病早期診斷和對策 ［J］.安徽醫(yī)藥，2005，9（8）：624-626.

［2］ICH Q2（R1）：Validation of Analytical procedures:Text and Methodology.

［3］2015版中華人民共和國藥典四部通則：9101藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則.

中圖分類號：R927.2

文獻標識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）07-0012-02