龔敏陽　伍小燕莫小林　黃權(quán)芳　陳曉明　陳　朝（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院　南寧　530023）

抗復(fù)感顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察△

龔敏陽伍小燕*莫小林黃權(quán)芳陳曉明陳朝（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院南寧530023）

摘要：目的：考察抗復(fù)感顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：通過薄層色譜法定性鑒別方中黃芪和陳皮，選用高效液相色譜法對大黃素和大黃素甲醚進(jìn)行定量。結(jié)果：定性方法可靠，定量方法準(zhǔn)確、精密度和加收率較佳。結(jié)論：抗復(fù)感顆粒的定性、定量方法能有效控制制劑質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：抗復(fù)感顆粒 黃芪 陳皮 何首烏 大黃素 大黃素甲醚

抗復(fù)感顆粒是由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院自行研制開發(fā)的治療小兒反復(fù)呼吸道感染的純中藥醫(yī)院制劑，臨床用于治療反復(fù)呼吸道感染患兒［1］。本方由黃芪、陳皮、何首烏等8味藥材組成，其中黃芪為君藥，陳皮、何首烏為臣藥。對上述三種中藥材進(jìn)行定性研究，對何首烏中有效成分進(jìn)行含量測定研究。

1材料

Waters 2698型高效液相色譜儀（美國）；Waters光電二級管陣列檢測器（美國），Empower色譜工作站，GH252電子分析天平（日本A&D），黃芪、陳皮、何首烏等8味藥材（購于廣西萬寶堂醫(yī)藥有限公司）。黃芪、陳皮、何首烏對照藥材、黃芪甲苷、橙皮苷、大黃素標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為121462－200709、120969－200808、121454－200703、110781－200613、110721－201014、110756-200110。

2方法與結(jié)果

2.1黃芪的定性方法［2，3］

2.1.1供試品的制備：取抗復(fù)感顆粒10g，加乙醇30mL，加熱回流提取1h，過濾，濾液蒸干，殘渣加水20mL溶解，注入已處理好的中性氧化鋁柱（干法制備，中性氧化鋁10g），用40%乙醇30mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用水飽和正丁醇提取兩次，每次20mL，合并正丁醇（上層），用1%NaOH提取兩次，每次10mL，棄去堿液（下層），用正丁醇飽和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2取缺黃芪藥材制成的樣品，同法制成陰性對照溶液。

2.1.3取黃芪對照藥材0.1g，同法制得對照藥材溶液。

2.1.4精密稱取黃芪甲苷，用甲醇制成每毫升含1mg的溶液，制得對照品溶液。

2.1.5各吸取上述溶液2μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水（13∶7∶2）的下層為展開劑，展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10min。供試品溶液和對照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對照無相同斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.2陳皮的定性方法［2，4］。

2.2.1取抗復(fù)感顆粒10g，加甲醇30mL，加熱回流提取20min，過濾，濾液蒸干，殘渣加水20mL溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2取缺陳皮藥材制成的樣品，同上法制成陰性對照溶液。

2.2.3取陳皮對照藥材0.1g，同上法制得對照藥材溶液。

2.2.4精密稱取橙皮苷，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.5各吸取上述溶液1μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水（9∶3∶0.5）的下層為展開劑，上行展開，晾干，噴以1%三氯化鋁溶液，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品溶液和對照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對照無相同斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

2.3何首烏的定性方法［5］。

2.3.1取抗復(fù)感顆粒10g，加甲醇30mL，加熱回流提取30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加水20mL溶解，加乙醚10mL提取，蒸干，殘渣用甲醇1mL溶解，作為供試品溶液。

2.3.2取缺何首烏藥材制成的樣品，同法制成陰性對照溶液。

2.3.3稱取何首烏對照藥材0.2g，同法制得對照藥材溶液。

2.3.4稱取大黃素，加甲醇制成每毫升含1mg大黃素的溶液，作為對照品溶液。

2.3.5分別吸取上述溶液各1μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（7∶3∶0.5）為展開劑，上行展開，晾干，置氨水飽和的玻璃缸中，可見光下檢識。供試品溶液和對照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對照無相同斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

2.4何首烏中大黃素和大黃素甲醚的含量測定［6］

2.4.1色譜條件：色譜柱：Inertsil ODS-SP；流動相：流動相A為甲醇，B為0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，0～20min，A 30%～50%；20～25min，A50%～80%；25～35min，A 80%～100%；35～50min；流速為1mL·min-1，檢測波長為483nm，柱溫：30℃。

2.4.2精密稱取大黃素、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇制得含大黃素4.32mg·mL-1、含大黃素甲醚9.60mg·L-1的溶液，得對照品溶液。

2.4.3精密稱取抗復(fù)感顆粒10g，加入50mL甲醇，加熱回流1h，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液25mL，水浴蒸干，精密加8%鹽酸溶液20mL，超聲處理5min，加三氯甲烷20mL，水浴加熱回流1h，冷卻，酸液加三氯甲烷10mL萃取3次蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移定容至10mL，得供試品溶液。另取用10g缺何首烏的陰性樣品，依上法制得陰性溶液。

2.4.4測定方法研究

2.4.4.1專屬性：分取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，進(jìn)樣量為10μL，依色譜條件測定，結(jié)果陰性樣品溶液無干擾，見圖3，說明本法專屬性良好。

2.4.4.2線性關(guān)系：取對照品溶液，進(jìn)樣量設(shè)為3、5、7、10、12、15、20、25、30μL按上述色譜條件測定，以峰面積（A）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ng）為縱坐標(biāo)，計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。大黃素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為C%= A*9.68×10-5+1.64，R=0.9993，n=9，證明進(jìn)樣量在 12.96～129.6mg·L-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。大黃素甲醚的標(biāo)準(zhǔn)曲線為C%=A*5.46×10－4+12.8，R=0.9993，n=9，證明進(jìn)樣濃度在28.8～288ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4.4.3精密度：依法連續(xù)進(jìn)樣對照品溶液6次，計算峰面積，大黃素峰面積的RSD為1.51%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.55%（n=6），證明儀器精密度好。

2.4.4.4穩(wěn)定性：取供試品溶液，分別于室溫下0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣10μL，依法測定，記錄峰面積，大黃素峰面積的RSD為2.72%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.38%（n=6），表明溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4.5重復(fù)性：依法制備測定抗復(fù)感顆粒6份，計算峰面積，大黃素峰面積的RSD為2.72%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD 為2.37%（n=6），證明重復(fù)性好。

2.4.4.6加樣回收率：取已知含量的抗復(fù)感顆粒共6份，各精密加入大黃素、大黃素甲醚對照品，依法測定，大黃素的回收率為99.1%，RSD為2.92%（n=6），大黃素甲醚的回收率為95.0%，RSD為2.98%（n=6），證明加樣回收率符合規(guī)定。

3討論

進(jìn)行含量測定的實(shí)驗時，通過參考文獻(xiàn)，流動相曾選擇甲醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）［7］，但供試品分離效果不理想。后換甲醇與0.1%醋酸梯度洗脫［8］，分離效果仍不滿意。最后換為本文所用流動相，分離效果和出峰時間均符合要求。

參考文獻(xiàn)

［1］王力寧，玉振喜，張曉春，等.系列抗復(fù)感合劑防治小兒反復(fù)呼吸道感染的臨床研究［J］.廣西中醫(yī)藥，1998，21（6）：4.

［2］國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283-285.

［3］王春怡，葉雪蘭，李衛(wèi)民，等.黃芪總皂苷提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2012，23（1）：94-96.

［4］連芳，陳丹，曾令軍，等.玳玳黃酮滴丸質(zhì)量分析［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31（7）：827-831.

［5］李勇軍，何迅，鄭林，等.蒲薏顆粒的定性定量研究［J］.中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志，2010，16（4）：24-27.

［6］蔡麗芬，鐘國躍，張倩，等.HPLC測定不同生長年限及采收期何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的含量 ［J］.中國中藥雜志，2010，35（10）：1221-1225.

［7］李靜，張莉，曹玲，等.高效液相色譜法測定首烏丸中大黃素的含量［J］.中國生化藥物雜志，2009，30（2）：118-120，123.

［8］孟軍華，金澤祥，趙漢琪，等.4種蓼科植物中大黃素型蒽醌類成分的測定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，32（8）：1080-1081.

中圖分類號：R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）07-0004-03

基金項目：△廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥管理局立項課題（GZYZ-10-10）全國中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項目

*通訊作者