周雪敏，劉先寶，蔡吉苗，陳奕鵬，黃貴修

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茄類鐮刀菌引起的橡膠樹莖桿潰瘍病防治藥劑篩選試驗(yàn)

周雪敏1，2，劉先寶2，蔡吉苗2，陳奕鵬2，黃貴修2

（1.海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南 海口570228；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)部熱帶作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/海南省熱帶農(nóng)業(yè)有害生物監(jiān)測與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 海口571101）

摘 要：通過菌落生長速率法對由茄類鐮刀菌（Fusarium solani）引起的橡膠樹莖桿潰瘍病進(jìn)行防控藥劑篩選試驗(yàn)。結(jié)果表明，卉友（50%咯菌腈WP）的EC50最小，抑菌效果最好，其次是施保功（50%咪鮮胺錳鹽WP）和多菌靈（50%多菌靈WP），凱潤（250g/mL吡唑醚菌酯EC）和甲基硫菌靈（70%甲基托布津WP）的EC50最大，抑制作用最差。3個混配組合中多菌靈和施保功混配具有增效作用，其他組合表現(xiàn)加和作用。建議生產(chǎn)上使用咯菌腈、咪鮮胺錳鹽和多菌靈等防治橡膠樹莖桿潰瘍病。

關(guān)鍵詞：茄類鐮刀菌；橡膠樹；莖桿潰瘍??；藥劑篩選

橡膠樹（Hevea brasiliensis）為大戟科（Euphobiaceae）橡膠樹屬（Hevea）多年生熱帶雨林喬木樹種，其所產(chǎn)的天然橡膠是一種不可替代的工業(yè)原料和戰(zhàn)略物資，與人民的日常生活、國防及工業(yè)建設(shè)息息相關(guān)。由于天然橡膠具有合成膠不能取代、獨(dú)特的物理化學(xué)特性，全球?qū)μ烊荒z的年需求量持續(xù)增加［1］。1904年，橡膠樹首次引入我國云南地區(qū)［2］。新中國成立后，天然橡膠產(chǎn)業(yè)獲得了迅速發(fā)展，種植范圍擴(kuò)大至整個熱區(qū)，目前已經(jīng)成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的重要支柱。我國的橡膠樹種植面積居世界第3位［3］，但我國的橡膠產(chǎn)量不能自給，自2002年起，一直是世界上最大的進(jìn)口國［4］。近幾年，我國天然橡膠（不含膠乳）的進(jìn)口量穩(wěn)步增長。2012年進(jìn)口量為185.91萬t，2014年增加到224.54 t，同比增長約5.01%［5］。隨著我國經(jīng)濟(jì)及國防事業(yè)的快速發(fā)展，供需缺口不斷擴(kuò)大，使得天然橡膠在國民經(jīng)濟(jì)中的戰(zhàn)略物資地位將越來越重要。

橡膠樹莖桿潰瘍病是2014年以來新發(fā)的一種莖桿病害，該病為害中幼齡苗和開割樹，可造成植株長勢變?nèi)酰瑯淦け巡⒊霈F(xiàn)流膠現(xiàn)象，嚴(yán)重影響膠乳的產(chǎn)量和品質(zhì)，因此該病的防治已成為生產(chǎn)中必須關(guān)注的一個新問題。2014—2015年，中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所在對海南省橡膠樹主栽區(qū)的病情調(diào)查中發(fā)現(xiàn)橡膠樹莖桿潰瘍病在各橡膠農(nóng)場普遍發(fā)生，并確定該病由茄類鐮刀菌（Fusarium solani）侵染引起。目前國內(nèi)尚未有關(guān)于該病藥劑篩選方面的研究，因此我們進(jìn)行了該病原菌的室內(nèi)藥劑篩選試驗(yàn)，為大田防治該病害提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株HHNBS01由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供，病原菌的培養(yǎng)采用PDA培養(yǎng)基（參照方中達(dá)［6］的方法配制）。

根據(jù)結(jié)構(gòu)及其殺菌機(jī)理［7］，供試藥劑有9類13種，見表1。

表1 供試藥劑、生產(chǎn)廠家和藥劑濃度設(shè)置

1.2 試驗(yàn)方法

將病菌接種于PDA培養(yǎng)基中，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，用滅過菌的打孔器沿菌落邊緣打取直徑5 mm的菌餅備用。

1.2.1單劑毒力測定 采用菌絲生長速率法［8］對HHNBS01進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，計(jì)算13種供試殺菌劑的抑制中濃度（EC50）。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定各藥劑的最低抑制濃度，以該濃度為依據(jù)設(shè)置5個濃度梯度（表1）。WP、AS和EW加適量無菌水，EC 和TC加適量丙酮，配制成5個濃度梯度的母液，用移液槍吸取1 mL不同濃度的藥液注入49 mL約45℃的PDA培養(yǎng)基中，立即混勻后倒入9 cm的滅菌培養(yǎng)皿中，制成表1中濃度的含毒平板，以無菌水（WP、AS和EW類）或丙酮（EC和TC類）作為對照。將菌餅接種于平板中央，置于28℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，每個處理3次重復(fù)。培養(yǎng)5 d后十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長抑菌率。根據(jù)藥劑濃度對數(shù)（橫坐標(biāo)）及對應(yīng)的菌絲生長抑制率概率值（縱坐標(biāo)）做回歸分析，求出毒力回歸方程y = a + bx，并計(jì)算出藥劑抑制中濃度（EC50）和相關(guān)系數(shù)r，根據(jù)EC50值評價(jià)殺菌劑毒力大小。菌絲生長抑菌率（%）=〔（對照菌落直徑-0.5）-（處理菌落直徑-0.5）〕×100/（對照菌落直徑-0.5）。

1.2.2 藥劑兩兩混配效果測定 根據(jù)單劑毒力測定結(jié)果，對毒力最高的咯菌腈、咪鮮胺錳鹽和多菌靈進(jìn)行兩兩混配［9］，有效成分配比為4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4，每個配比配制成相應(yīng)5個濃度梯度的含毒PDA平板，計(jì)算采用菌絲生長速率法對茄類鐮刀菌進(jìn)行聯(lián)合毒力測定。計(jì)算混配劑對菌絲生長抑菌率，分別求得藥劑不同混配比例的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)r。根據(jù)Wadley公式計(jì)算增效系數(shù)SR［10］，確定不同比例混劑的相互作用。EC50理論值=（a+b）/〔（a/EC50A）+（b/EC50B）〕，SR=EC50（理論值）/EC50（實(shí)際值），式中A、B分別為兩個農(nóng)藥單劑，a、b分別為相應(yīng)單劑在混劑中含量比率；以SR值代表相互作用程度。當(dāng)SR≤0.5時，表示拮抗作用；當(dāng)SR≥1.5時，表示增效作用；當(dāng)SR在0.5～1.5之間時，表示加和作用。

表2 不同殺菌劑對橡膠樹莖桿潰瘍病的毒力回歸方程和EC50

2 結(jié)果與分析

2.1 供試殺菌劑的綜合分析

從表2可以看出，咯菌腈、咪鮮胺錳鹽和多菌靈的抑菌效果較好，其EC50值均小于1 mg/L，其中咯菌腈抑菌效果最好。氟硅唑、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇的EC50值在2.0494～12.5892 mg/L，具有一定的抑菌作用；丙環(huán)唑、春雷霉素、百菌清和代森錳鋅的抑制作用較弱，其EC50值在31.6273～73.4134 mg/L，抑菌效果很差，吡唑醚菌酯和甲基托布津的抑制作用最差，其EC50值分別為183.0474、297.2803 mg/L。

2.2 各類供試殺菌劑抑菌效果分析

2.2.1 三唑類 氟硅唑、戊唑醇、丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑是三唑類殺菌劑。從表2可以看出，氟硅唑的EC50為2.0494 mg/L，有一定的抑菌效果，戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑的EC50分別為12.5892、11.5785 mg/L，抑菌效果較差，而丙環(huán)唑的EC50為31.6273 mg/L，抑菌效果很差。

2.2.2 苯并咪唑類 多菌靈和甲基托布津是苯并咪唑類殺菌劑。多菌靈的EC50為0.7594 mg/L，抑菌效果較好，而甲基托布津的EC50為297.2803 mg/ L，抑菌效果最差。

2.2.3 其他 咯菌腈為苯吡咯類殺菌劑，其EC50 為0.0804 mg/L，抑菌效果最好；咪鮮胺錳鹽為咪唑類殺菌劑，其EC50為0.4145 mg/L，抑菌效果較好；異菌脲為二甲酰亞胺類殺菌劑，其EC50為9.8553 mg/L，抑菌效果較差。春雷霉素屬于農(nóng)用抗生素，百菌清為取代苯類殺菌劑，代森錳鋅為有機(jī)硫類殺菌劑，其EC50分別為31.6273、64.1517、73.3324、73.4134 mg/L，抑菌效果均很差，而吡唑醚菌酯為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，其EC50值為183.0474 mg/L，抑菌效果很差。

2.3 藥劑兩兩混配毒力測定

試驗(yàn)結(jié)果表明咯菌腈與咪鮮胺錳鹽、咯菌腈與多菌靈兩種混配藥劑在4種配比下SR都在0.5～1.5之間，均表現(xiàn)為加和作用。而多菌靈與咪鮮胺錳鹽以4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4的比例混配對茄類鐮刀菌的EC50都小于0.3，均表現(xiàn)出顯著的抑菌作用。通過計(jì)算，SR均大于1.5，說明多菌靈與咪鮮胺錳鹽兩種藥劑在5個配比下均表現(xiàn)為增效作用（表3）。

3　結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用菌絲生長速率法進(jìn)行13種殺菌劑對橡膠樹莖桿潰瘍病茄類鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明：供試藥劑對病菌菌絲均有一定的抑制作用，但藥劑間抑制效果存在較大的差異。在供試殺菌劑中咯菌腈對茄類鐮刀菌的毒力最強(qiáng)，其EC50為0.0804 mg/L，其次是咪鮮胺錳鹽和多菌靈；氟硅唑、異菌脲和苯醚甲環(huán)唑3種殺菌劑對茄類鐮刀菌的毒力較強(qiáng)，吡唑醚菌酯和甲基托布津?qū)υ摼囊种菩Ч畈?。本試?yàn)中，通過聯(lián)合毒力測定得出多菌靈和咪鮮胺錳鹽在4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4等5個配比下均表現(xiàn)為增效作用。建議生產(chǎn)上使用咯菌腈、咪鮮胺錳鹽和多菌靈等防治橡膠樹莖桿潰瘍病。

茄類鐮刀菌可引起煙草、甘草、豌豆等多種植物的病害，一些研究者也進(jìn)行了相關(guān)研究，本研究與他們的研究結(jié)果有異同。其中咯菌腈和多菌靈抑制效果的測定結(jié)果與曹雪梅［11］的報(bào)道相一致，而楊紹麗等［12］報(bào)道甲基托布津的抑制效果好于多菌靈，其EC50為0.0001 mg/L，；翟亞娟等［13］的研究結(jié)果顯示苯醚甲環(huán)唑的抑制效果好于多菌靈，其EC50為0.4605 mg/L，本試驗(yàn)結(jié)果與他們的結(jié)果相反。這些研究結(jié)果之間的差異，可能是菌株間存在差異所致。

從藥劑的作用機(jī)理來看，咯菌腈為非內(nèi)吸苯吡咯類殺菌劑，多菌靈為內(nèi)吸性殺菌劑和，咪鮮胺錳鹽屬于咪唑類殺菌劑，具有內(nèi)吸、傳導(dǎo)、預(yù)防、保護(hù)、治療等多重作用。生產(chǎn)上建議采用兩種或者兩種以上作用機(jī)理不同的、無互相抗性的殺菌劑混用或輪換使用，這樣既能對病害進(jìn)行有效防治，又可避免單一藥劑的大量使用而產(chǎn)生病菌耐藥性的情況。

表3 多菌靈與咪鮮胺錳鹽混配毒力測定結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

［1］ Lieberei R. South American leaf blight of the rubber tree（Hevea spp.）：new steps in plant domestication using physiological features and mole cularmarkers［J］. Ann Bot，2007，100（6）：1125-1142.

［2］ 林位夫，周忠毓. 我國天然橡膠生產(chǎn)的回顧和展望［J］. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院，1999（4）：63-68.

［3］ 曾霞，鄭服叢，黃茂芳等. 世界天然橡膠技術(shù)現(xiàn)狀與展望［J］. 中國熱帶農(nóng)業(yè)，2014（1）：31-36.

［4］ 中研網(wǎng). 2014年1～10月我國進(jìn)口天然橡膠數(shù)據(jù)［EB/ OL］http：//www.chinairn.com/news/20141205/143 724863.shtml，2014-12-05.

［5］ 崔小明. 我國天然橡膠進(jìn)口現(xiàn)狀及未來發(fā)展影響因素分析［J］. 中國橡膠，2015（11）：28-31.

［6］ 方中達(dá). 植病研究方法［M］. 第3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.

［7］ 紀(jì)兆林，劉娟，童蘊(yùn)慧，等. 不同殺菌劑對桃流膠病的毒力測定［J］. 中國南方果樹，2012，41（4）：39-41.

［8］ 孫廣宇，宗兆鋒. 植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：142-144.

［9］ 胡育海，嚴(yán)秀琴，顧振芳，等. 六種殺菌劑對西瓜炭疽病菌的毒力測定［J］．上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版），2007，25（4）：402-404.

［10］ 梁偉伶，臺蓮梅，靳學(xué)慧，等. 馬鈴薯早疫病菌室內(nèi)殺菌劑篩選及配比試驗(yàn)［J］．植物保護(hù)，2009，35 （4）：168-171.

［11］ 曹雪梅. 甘草根腐病病原學(xué)研究及室內(nèi)藥劑篩選［D］. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.

［12］ 楊紹麗，吳仁峰，楊德枝. 豇豆根腐病菌的生物學(xué)特性及室內(nèi)殺菌劑毒力測定［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（22）：5479-5481.

［13］ 翟亞娟，白慶榮，高潔，等. 紅花根腐病病原菌鑒定及藥劑敏感性研究［J］. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013 （8）：59-61.

（責(zé)任編輯 楊賢智）

中圖分類號：S767.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1004-874X（2016）03-0116-04

收稿日期：2015-09-09

基金項(xiàng)目：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所引進(jìn)人才科研啟動基金（Hzs1002）

作者簡介：周雪敏（1990-），女，在讀碩士生，E-mail： 418454656@qq.com

通訊作者：黃貴修（1968-），男，研究員，E-mail：hgxiu@vip.163.com

Screening of fungicides against of rubber tree stem canker induced by Fusarium solani

ZHOU Xue-min1，2，LIU Xian-bao2，CAI Ji-miao2，CHEN Yi-peng2，HUANG Gui-xiu2
（1. Environment and Plant Protection College，Hainan University，Haikou 570228，China；2. Environment and Plant Protection Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Integrated Pest Management on Tropical Crops，Ministry of Agriculture/ Hainan Key Laboratory for Monitoring and Control of Tropical Agricultural Pests，Haikou 571101，China）

Abstract：Fungicides against induced by Fusarium solani strain rubber tree stem canker isolated from Hainan province were screened from 13 fungicides in laboratory by hypha growth rate method. The resultes showed that fludioxonil 50% WP had the lowest EC50thus the best inhibition effect against F. solani，followed by prochlorazmanganese chloride complex 50% WP and carbendazim 50% WP. Whereas pyraclostrobin 250 g/mL EC and thiophanatemethyl 70% WP had the highest EC50thus poor inhibition effect. Among three combinations of three fungicides，synergistic inhibition on mycelium growth was obtained when prochloraz-manganese chloride complex 50% WP and carbendazim 50 % WP were mixed. Fludioxonil 50% WP，the rest combinations had additive effect. Prochloraz-manganese chloride complex 50 % WP and carbendazim 50% WP were suggested to be applied in the field control of rubber tree stem canker .

Key words：Fusarium solani；Hevea brasiliensis；stem canker；screening of fungicide