李麗容， 金開(kāi)正

(杭州萬(wàn)向職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310023)

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鐵線(xiàn)蓮組培快繁技術(shù)研究

李麗容， 金開(kāi)正

(杭州萬(wàn)向職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310023)

摘要[目的]研究不同激素濃度對(duì)鐵線(xiàn)蓮誘導(dǎo)、增殖和生根的影響，建立鐵線(xiàn)蓮組培快繁技術(shù)。[方法]以鐵線(xiàn)蓮莖段為外植體，在MS培養(yǎng)基中加入不同濃度的6-BA、NAA和IBA,研究不同激素濃度對(duì)其腋芽誘導(dǎo)分化、誘導(dǎo)芽增殖和繼代苗生根的影響。[結(jié)果]鐵線(xiàn)蓮腋芽誘導(dǎo)效果以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L為最佳；增殖培養(yǎng)以MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.50 mg/L為最佳；繼代苗生根培養(yǎng)以MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 2.0 mg/L最佳。[結(jié)論]建立了鐵線(xiàn)蓮組培快繁技術(shù)體系，為其規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞鐵線(xiàn)蓮；組織培養(yǎng)；誘導(dǎo)；增殖；生根

鐵線(xiàn)蓮(ClematisfloridaThunb.)，別名鐵線(xiàn)牡丹，為毛茛科鐵線(xiàn)蓮屬植物，多數(shù)為落葉或常綠草質(zhì)藤本，享有“藤本花卉皇后”之美稱(chēng)，花期4～9月，是一種近2年國(guó)內(nèi)新興花卉，因其花色繁多、千姿百態(tài)、繁花似錦而深受人們喜愛(ài)，成為庭院、陽(yáng)臺(tái)裝飾中造型造景不可缺乏的新元素[1]。目前，鐵線(xiàn)蓮常見(jiàn)的繁殖方式有播種、壓條、嫁接、分株或扦插，但由于播種、壓條、扦插等繁殖成活率低且繁殖系數(shù)小，難以實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。隨著科學(xué)技術(shù)水平的提高，植物組培繁殖是較理想的繁殖方式，因材料來(lái)自單一的個(gè)體，遺傳性狀一致且繁殖系數(shù)大，能夠迅速滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。筆者研究了不同激素濃度對(duì)鐵線(xiàn)蓮腋芽誘導(dǎo)、增殖、生根培養(yǎng)等的影響，以期為鐵線(xiàn)蓮的大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料及處理外植體選擇鐵線(xiàn)蓮莖段(半木質(zhì)化)[2]。將采集后的鐵線(xiàn)蓮莖段，剪去多余的葉片，剩余的莖段具有隱芽，放入玻璃器皿中，用少量洗衣粉沖洗20 min后，用流水沖洗1～2 h[3]，置于超凈工作臺(tái)上備用。

1.2培養(yǎng)基試驗(yàn)培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入不同濃度的6-BA、NAA、IBA及蔗糖30 g/L、瓊脂粉6.8 g/L，pH 5.8，滅菌后備用[4]。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)基設(shè)Y1：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Y2：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,Y3：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,Y4：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Y5：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L,Y6：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,Y7：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Y8：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,Y9：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，共9種處理，每種處理接種外植體30個(gè)，定期觀察腋芽的誘導(dǎo)情況。

誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)數(shù)/接種數(shù)×100%

1.3.2增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)基設(shè)Z1：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Z2：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L,Z3：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L，Z4：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Z5：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,Z6：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，共6種處理，每種處理接種誘導(dǎo)芽30個(gè)，定期觀察腋芽的增殖情況。1.3.3生根培養(yǎng)。將在繼代培養(yǎng)中的鐵線(xiàn)蓮壯苗分別接種至附加不同濃度6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，30 d后觀察增殖情況。

生根培養(yǎng)培養(yǎng)基設(shè)S1：MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L,S2：MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L,S3：MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 2.0 mg/L,共3種處理，每種處理接種壯苗30株，定期觀察壯苗的生根情況。

1.4培養(yǎng)條件光照時(shí)間12 h/d，溫度(25±2)℃，相對(duì)濕度60% ，光照強(qiáng)度1 000 lx。

2結(jié)果與分析

2.1不同激素濃度對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響將鐵線(xiàn)蓮?fù)庵搀w用75%乙醇30 s+0.1%氯化汞8 min+吐溫2滴消毒后[5]，分別接種至腋芽誘導(dǎo)的9種培養(yǎng)基中，接種14 d后，觀察其腋芽誘導(dǎo)情況[6]，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,處理Y2、Y3、Y4、Y5對(duì)鐵線(xiàn)蓮的誘導(dǎo)分化有較強(qiáng)的促進(jìn)作用；處理Y1、Y6、Y9對(duì)鐵線(xiàn)蓮的誘導(dǎo)分化作用較弱；而處理Y7和Y8對(duì)鐵線(xiàn)蓮的誘導(dǎo)分化表現(xiàn)出一定的抑制作用。方差分析結(jié)果表明，處理Y2對(duì)鐵線(xiàn)蓮腋芽的誘導(dǎo)分化較其他8個(gè)處理有極顯著的促進(jìn)作用；處理Y3、Y4對(duì)鐵線(xiàn)蓮腋芽的誘導(dǎo)分化較處理Y5、Y1、Y6、Y7、Y8、Y9具有極顯著的促進(jìn)作用；Y5、Y1、Y6、Y7、Y8、Y9處理對(duì)鐵線(xiàn)蓮腋芽的誘導(dǎo)分化有一定差異，但未達(dá)顯著水平。

表1不同激素濃度對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響

Table 1Effects of different hormone concentration on induction ofClematisfloridaaxillary buds

處理Treatment接種數(shù)Inoculationquantity誘導(dǎo)腋芽數(shù)Inductionaxillarybuds誘導(dǎo)率Inductionrate∥%Y13033.0cdC110.0Y23051.7aA172.2Y33045.7bB152.2Y43042.0bB140.0Y53034.0cC113.3Y63033.0cdC110.0Y73029.3dC97.8Y83029.70dC98.9Y93031.0cdC103.3

注：同列不同小寫(xiě)字母表示處理間差異顯著(P<0.05),不同大寫(xiě)字母表示處理間差異極顯著(P<0.01)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant difference(P<0.05), different capital letters stand for extremely significant difference among treatments(P<0.01).

2.2不同激素濃度對(duì)增殖培養(yǎng)的影響將在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的不定芽分別接種至不同濃度6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，30 d后觀察增殖情況[7]，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知, 處理Z2和Z3對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽的增殖有較強(qiáng)的促進(jìn)作用；其他處理Z1、Z4、Z5、Z6對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽的增殖有較強(qiáng)的抑制作用。方差分析結(jié)果表明，處理Z2和Z3較其他4個(gè)處理對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽的增殖有極顯著的促進(jìn)作用；處理Z4與Z1、Z5差異未達(dá)極顯著水平，但與處理Z6差異達(dá)極顯著水平；處理Z1、Z5、Z6對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽增殖的影響差異不顯著。

表2不同激素濃度對(duì)增殖培養(yǎng)的影響

Table 2Effects of different hormone concentration on proliferation culture

處理Treatment接種數(shù)Inoculationquantity增殖個(gè)數(shù)Proliferationnumber增殖率Proliferationrate∥%Z13024.0bcBC80.0Z23038.3aA127.8Z33040.3aA134.4Z43027.0bB90.0Z53023.3cBC77.8Z63022.0cC73.3

注：同列不同小寫(xiě)字母表示處理間差異顯著(P<0.05),不同大寫(xiě)字母表示處理間差異極顯著(P<0.01)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant difference(P<0.05), different capital letters stand for extremely significant difference among treatments(P<0.01).

2.3不同激素濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響將在繼代培養(yǎng)中的壯苗分別接種至附加不同濃度6-BA、IBA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，30 d后觀察增殖情況，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，處理S3和S2對(duì)鐵線(xiàn)蓮的生根有較強(qiáng)的促作用，處理S3、S2的生根率分別達(dá)83.3%和70.0%。方差分析結(jié)果表明，處理S3與S1差異極顯著，與S2差異顯著。

2.4馴化移栽將培養(yǎng)室的鐵線(xiàn)蓮試管苗轉(zhuǎn)移至半遮陰的自然光下進(jìn)行鍛煉，鐵線(xiàn)蓮試管苗在自然光下恢復(fù)植物體內(nèi)葉綠體的光合作用，并打開(kāi)培養(yǎng)瓶的瓶蓋注入少量的水使幼苗逐漸降低溫度，慢慢轉(zhuǎn)向有菌，這樣幼苗周?chē)沫h(huán)境逐步與自然環(huán)境相似。

表3　不同激素濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響

在移栽過(guò)程中應(yīng)著重考慮栽培基質(zhì)，是鐵線(xiàn)蓮組培苗能否存活、正常生長(zhǎng)的關(guān)鍵。適宜的基質(zhì)應(yīng)是保水性和透氣性均較好，使用樹(shù)皮、泥炭土與珍珠巖混合基質(zhì)，以1∶2∶1最為適宜[8]。

3結(jié)論

3.1不同激素濃度對(duì)鐵線(xiàn)蓮芽誘導(dǎo)分化的影響該試驗(yàn)結(jié)果表明, 在MS培養(yǎng)基中加入不大于1.5 mg/L 6-BA和不大于0.5 mg/L NAA處理組合對(duì)鐵線(xiàn)蓮的芽誘導(dǎo)具有較強(qiáng)的促進(jìn)作用,其中，以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L(Y2)的誘導(dǎo)效果最佳，其次為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(Y3)；而2.0 mg/L 6-BA處理對(duì)鐵線(xiàn)蓮的誘導(dǎo)分化表現(xiàn)出一定的抑制作用。

3.2不同激素濃度對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽增殖生長(zhǎng)的影響該試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽增殖有較強(qiáng)促進(jìn)作用的處理方式以MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L(Z3)為最佳，其次為MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L(Z2)。而Z1、Z4、Z5、Z6處理對(duì)鐵線(xiàn)蓮不定芽的增殖有較強(qiáng)的抑制作用。

3.3不同激素濃度對(duì)鐵線(xiàn)蓮繼代苗生根的影響該試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 2.0 mg/L(S3)對(duì)鐵線(xiàn)蓮繼代苗生根的促進(jìn)作用最佳，其次為MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L(S2)。

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作者簡(jiǎn)介李麗容(1983- )，女，浙江溫州人，實(shí)驗(yàn)師，從事植物遺傳育種和植物配置方面的研究。

收稿日期2016-04-16

中圖分類(lèi)號(hào)S 604.3+3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)15-138-02

Study on the Tissue Culture Rapid Propagation Technique ofClematisflorida

LI Li-rong, JIN Kai-zheng

(Hangzhou Wangxiang Polytechnic, Hangzhou, Zhejiang 310023)

Abstract[Objective] The aim was to study effects of different hormone concentration on induction, proliferation and rooting of Clematis florida, to establish tissue culture rapid propagation technique of Clematis florida. [Method] With Clematis florida stem segments as explants, adding different concentrations of 6-BA, NAA, IBA growth hormone in MS culture medium, effects of different hormone concentration on induction differentiation, bud proliferation, and rooting culture of successive seedling were studied. [Result] Clematis florida axillary bud induction effects in MS + 6-BA 1.0mg 0.2 mg/L way was the best; proliferation cultured in MS + 6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg / L treatment was the best; successive generation of rooting culture in process S3: MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 2.0 mg/L was the best. [Conclusion] The tissue culture rapid propagation technique system of Clematis florida is established, which can provide theoretical basis for large-scale production.

Key wordsClematis florida; Tissue culture; Induction; Proliferation; Rooting