梁逸仙　林春明　葉錦俊

【摘要】 目的 探討CD16+56+、CD19+、自然殺傷T細(xì)胞（NKT）在原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（URSA）中的表達(dá)情況。方法 30例URSA患者作為觀察組， 30例正常女性作為對照A組， 30例正常妊娠孕婦作為對照B組， 對比三組研究對象外周血液中淋巴細(xì)胞的表達(dá)情況。結(jié)果 觀察組CD16+56+、CD19+、NKT水平均明顯高于對照A組和對照B組（P<0.05）。結(jié)論 CD16+56+、CD19+、NKT的高表達(dá)在URSA中有著重要意義， 為孕婦的診斷和治療提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)；CD16+56+；CD19+；自然殺傷T細(xì)胞

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.013

【Abstract】 Objective To investigate expression of CD16+56+， CD19+ and nature killer T cells （NKT） in unexplained recurrent spontaneous abortion （URSA）. Methods There were 30 URSA patients as observation group， 30 normal women as control group A and 30 normal pregnant women as control group B. Comparison was made on expression of peripheral blood lymphocyte in three groups. Results The observation group had obviously higher CD16+56+， CD19+ and NKT levels than control groups A and B （P<0.05）. Conclusion High expression of CD16+56+， CD19+ and NKT contains important significance in URSA， and they can provide reference for diagnosis and treatment.

【Key words】 Unexplained recurrent spontaneous abortion； CD16+56+； CD19+； Nature killer T cells

NKT是一種具有兩面性的T細(xì)胞亞群， 其主要的功能是進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)作用， 如若NKT受到刺激之后會立即分泌大量的巨噬細(xì)胞、γ-干擾素等發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[1]。在URSA的檢測中CD16+56+是檢測該種T細(xì)胞亞群的主要標(biāo)志， 本文就對URSA患者外周血樣中CD16+56+、CD19+、NKT指標(biāo)的表達(dá)情況進(jìn)行檢測， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年7月～2015年9月收治的URSA患者共30例作為觀察組， 年齡22～38歲， 平均年齡（28.6±4.6）歲， 平均體重（53.9±5.2）kg；選取同期進(jìn)行檢查的正常女性和正常妊娠婦女各30例分別作為對照A組與對照B組， 對照A組平均年齡（28.4±5.2）歲， 平均體重（57.5±5.7）kg；對照B組平均年齡（29.6±6.5）歲， 孕周4～20周， 平均孕周（12.3±2.0）周。觀察組入選標(biāo)準(zhǔn)：患者流產(chǎn)次數(shù)≥3次， 對夫妻的染色體進(jìn)行分析和內(nèi)分泌激素檢測結(jié)果均正常；無陰道感染性疾病、陰道畸形等病癥， 對患者的丈夫或固定性關(guān)系者的精液進(jìn)行分析確保為健康者。觀察組排除標(biāo)準(zhǔn)：排除上述情況以外的所有重復(fù)性流產(chǎn)的患者， 藥物流產(chǎn)的患者及受傷等原因?qū)е铝鳟a(chǎn)的患者。

1. 2 檢測設(shè)備及試劑 實驗中所使用的細(xì)胞檢測儀是由美國BD公司生產(chǎn)的FACSCalibur流式細(xì)胞儀；TBNK檢測試劑盒均購自美國BD公司， 試劑批號：溶血劑3201886， 破膜劑3321244， TBNK3126647， 鞘液3103115。

1. 3 方法 所有檢測標(biāo)本， 于清晨空腹抽取靜脈血獲得， 并與15% EDTA二鈉進(jìn)行抗凝， 定容至2 ml， 取適量標(biāo)本行前期處理后于BD流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測CD16+56+、CD19+、NKT水平， 均用鞘流流式細(xì)胞儀法進(jìn)行測定。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組CD16+56+、CD19+、NKT水平均明顯高于對照A組和對照B組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

URSA患者病因多未查明， 給治療帶來很多的困擾， 目前在該類患者的診斷檢測和治療方面均沒有非常有效的措施， 但是在大量的研究中發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞的表達(dá)情況與習(xí)慣性流產(chǎn)（RSA）發(fā)病相關(guān)聯(lián)。

科學(xué)研究表明[2]， NK細(xì)胞所占的比例與女性的URSA發(fā)病有直接的聯(lián)系， 通過對患者外周靜脈血液中的NK細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記檢測發(fā)現(xiàn)， 其中CD16+56+約占90%以上的比例。該種細(xì)胞中存在很多的溶細(xì)胞顆粒， 對于妊娠期孕婦的胚胎不僅有排斥作用， 甚至有可能直接進(jìn)行殺傷， 所以會出現(xiàn)重復(fù)流產(chǎn)的現(xiàn)象[3， 4]。本次實驗中觀察組患者的CD16+56+表達(dá)量均明顯高于正常未孕者和正常妊娠人群， 針對有RSA病史的未孕者其該種細(xì)胞的表達(dá)量較高的原因， 可以解釋為由于某種潛在的致病因素影響所致。

CD19+是B細(xì)胞檢測的共有標(biāo)志， 相關(guān)的研究資料結(jié)果顯示URSA患者其外周血液中的CD19+表達(dá)量會相對更高， 但是目前在該方面意見還未達(dá)成一致[5]， 鑒于此本次實驗分別對3種類型的研究對象抽樣檢測， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)有URSA史或者難免會出現(xiàn)流產(chǎn)的孕婦其血樣中的CD19+表達(dá)量相較于正常妊娠或者正常女性的表達(dá)量明顯較高（P<0.05）。

NKT細(xì)胞是20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)的一種表達(dá)T細(xì)胞表面受體的細(xì)胞， 具有高度的CD1d限制性， 該細(xì)胞在接受抗原刺激后， 在2 h內(nèi)就有大量的細(xì)胞因子產(chǎn)生。在張旸[6]研究中發(fā)現(xiàn)正常妊娠的滋養(yǎng)層NKT細(xì)胞數(shù)量會隨著妊娠進(jìn)行而下降， 而在自發(fā)性流產(chǎn)中， NKT細(xì)胞數(shù)量隨著妊娠的進(jìn)行而呈上升趨勢， 這與本文研究結(jié)果相一致， 表明NKT細(xì)胞數(shù)量的增加成熟在URSA過程中具有重要意義。

綜上所述， 在 URSA患者的外周血液中其CD16+56+、CD19+、NKT指標(biāo)的水平表達(dá)均明顯升高， 因此推測其可能直接參與URSA病變過程， 從而為孕婦的診斷和治療提供相關(guān)的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[5] 吳軍， 李薇， 錢云峰， 等.初診惡性腫瘤患者外周血CD3+ CD56+ NKT樣細(xì)胞的檢測.實用醫(yī)學(xué)雜志， 2015， 31（5）：756-759.

[6] 張旸.原因不明復(fù)發(fā)性自發(fā)性流產(chǎn)小鼠模型中NKT細(xì)胞失調(diào)研究.福建醫(yī)科大學(xué)， 2008.

[收稿日期：2016-01-14]