祝忠良　　龐珍珍　　劉津麟　　盧文靜　　周永列▲1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)院，浙江杭州　310053；.浙江省人民醫(yī)院檢驗科，浙江杭州　310014

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聯(lián)合檢測ANA、抗SSA和抗SSB對原發(fā)性干燥綜合征診斷的臨床意義

祝忠良1,2龐珍珍2劉津麟2盧文靜2周永列1,2▲
1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)院，浙江杭州310053；2.浙江省人民醫(yī)院檢驗科，浙江杭州310014

［摘要］目的調(diào)查浙江地區(qū)原發(fā)性干燥綜合征患者的抗核抗體及抗核抗體譜陽性分布特點(diǎn)及臨床意義。方法采用間接免疫熒光法和歐蒙線性免疫印跡法，回顧性分析2012年6月～2015年6月我院就診的162例臨床確診原發(fā)性干燥綜合征患者血清中抗核抗體及其抗核抗體檢測譜的結(jié)果。結(jié)果162例研究對象中抗核抗體陽性149例（占92.0%）。男7例，女155例。抗SSA陽性118例（占72.8%）；抗SSB陽性72例（占44.4%）；抗Ro52陽性119例（占73.4%）；三者陽性檢出率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。其他自身抗體檢出率均較低。ANA分別與抗SSA、抗SSB、抗Ro52聯(lián)合檢測的陽性率為87.6%、65.9%、83.2%。聯(lián)合檢測抗SSA、抗SSB具有相對較好的特異性為57%。 結(jié)論ANA陽性患者，聯(lián)合抗SSA、抗SSB判斷有助于提高原發(fā)性干燥綜合征診斷的特異性。

［關(guān)鍵詞］抗核抗體；干燥綜合征；抗SSA；抗SSB

原發(fā)性干燥綜合征（primary sj?gren's syndrome，pSS）是一個主要累及外分泌腺體的慢性炎癥性自身免疫病，臨床表現(xiàn)除了常見的唾液腺和淚腺功能受損外，還會有其他器官的受累而出現(xiàn)多系統(tǒng)損害的癥狀，如皮膚、腎、肺、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等［1，2］。本病大多起病隱匿，大多數(shù)患者難以判斷明確的起病時間，臨床表現(xiàn)也多種多樣，病情進(jìn)展輕重個體差異性較大。近年來對原發(fā)性干燥綜合征患者起病原因分析顯示與遺傳因素、EB病毒感染、免疫異常、環(huán)境因素高度相關(guān)。而抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）一直作為篩選自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）的重要標(biāo)志物，敏感性好，在AID的初步診斷、疾病進(jìn)展、治療效果和預(yù)后判斷等方面具有明顯的優(yōu)勢［3］。另外，免疫印跡法對抗核抗體譜檢測具有特異性強(qiáng)、自動化程度高的特點(diǎn)，但不足的是針對的抗原譜較窄。而在臨床中，對于原發(fā)性干燥綜合征的診斷依賴于病變腺體的病理學(xué)診斷［4］，對于患者具有創(chuàng)傷性，敏感性一般，可行性不佳，且只在國內(nèi)少數(shù)大型醫(yī)院才進(jìn)行。因此，對尋找簡便易行的提高原發(fā)性干燥綜合征的診斷敏感性和特異性的血清學(xué)指標(biāo)具有重要臨床意義。本文通過回顧性分析浙江地區(qū)162例原發(fā)性干燥綜合征病人抗核抗體及抗核抗體譜的特點(diǎn)，旨在尋找并驗證提高敏感性和特異性的血清學(xué)指標(biāo)，現(xiàn)報道如下。

▲通訊作者

1　資料與方法

1.1一般資料

162例原發(fā)性干燥綜合征患者均選自2012年6月～2015年6月我院住院患者，患者來自省內(nèi)各個縣市，患者之前未經(jīng)專科治療。所有研究對象均通過醫(yī)院倫理委員會備案審核。162例研究對象中，男7例，女155例，平均年齡（49±11）歲，均符合2012年美國風(fēng)濕病學(xué)會原發(fā)性干燥綜合征分類標(biāo)準(zhǔn)。健康對照組為我院2012年6月～2015年6月體檢者120例，男10例，女110例，平均年齡（47±10）歲。兩組之間性別、年齡等方面資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有標(biāo)本均使用BD公司的真空負(fù)壓采血管，采取清晨空腹不抗凝肘靜脈血約3～4 mL，用離心機(jī)2000 g，離心10 min，分離血清，立即檢測或放入-80℃保存待測。

1.2檢測方法

用間接免疫熒光法（IIF）檢測抗核抗體（ANA），試劑盒購自歐蒙公司；用線性免疫印跡法（LIA）檢測抗核抗體譜，向歐蒙公司購得抗核抗體譜（IgG）試劑盒（歐蒙印跡法）。免疫印跡儀為歐蒙公司EUROBlot-MasterⅡ，熒光顯微鏡為尼康80i型熒光顯微鏡。間接免疫熒光法檢測抗核抗體，被測抗體血清標(biāo)本的稀釋度分別為1∶100、1∶320、1∶1000、1∶3200，抗體效價≥1∶100即抗核抗體陽性。線性免疫印跡法檢測抗核抗體譜，膜條的顯色位置與標(biāo)準(zhǔn)譜對照，對應(yīng)抗體有一種及以上的抗體陽性，即視為陽性。操作方法和結(jié)果判讀均嚴(yán)格按照實(shí)驗室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和廠家提供的說明書執(zhí)行。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。其中，計數(shù)資料以百分比表示，組間比較采用Χ2檢驗，計量資料行t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1原發(fā)性干燥綜合征組各型陽性率與對照組比較

162例原發(fā)性干燥綜合征患者中抗核抗體（ANA）檢測結(jié)果陽性為149例，陽性檢出率為92%（149/162）；而抗核抗體譜的檢出率差異較顯著，陽性檢出率較高的分別是抗Ro52、抗SSA、抗SSB，其檢測結(jié)果陽性119例（119/162，73%）、118例（118/162，73%）、72例（72/162，44%），其他自身多肽抗體譜的檢出率均普遍較低或未檢測出。120例健康對照組檢出ANA陽性為6例占5%（6/120），抗SSA陽性3例占2.5%（3/120），抗Ro52陽性2例占1.7%（2/120），抗SSB陽性1例占0.83%（1/120），其他項目幾乎無陽性檢出。原發(fā)性干燥綜合征組各型陽性率與對照組比較，除PM-Scl、Jo-1、dsDNA外，檢出率均顯著高于對照組（P＜0.05）。見表1。

2.2聯(lián)合檢測自身抗體診斷敏感性和特異性的比較

抗核抗體及抗核抗體譜聯(lián)合檢測的敏感性結(jié)果：抗SSB+抗Ro52組合為93.0%，抗SSA+抗SSB組合為97.2%，ANA+抗SSA、ANA+抗SSB、ANA+抗Ro52組合均為100.0%；特異性方面：ANA+抗SSB組合為14.4%（最低），ANA+抗SSA組合為29.5%，ANA+抗RO52組合為30.2%，抗SSB+抗Ro52組合為42.2%，抗SSA+抗SSB組合為57.0%（最高）。敏感性=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。特異性=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)）×100%。聯(lián)合檢測自身抗體診斷敏感性和特異性的比較結(jié)果見表2。

表1　pSS患者與健康對照組抗核抗體譜檢測結(jié)果［n（%）］

3　討論

原發(fā)性干燥綜合征是最常見的自身免疫性疾病之一，廣泛分布于全球，我國人群的患病率為0.29%～0.70%，在老年人群中患病率為3%～4%。本病女性患者遠(yuǎn)大于男性患者，男女比為1：9～1：20。本研究中發(fā)病年齡多在40～50歲，顯示女性患者大多處于更年期附近，雌激素水平波動較大，可能是原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病的誘因之一，與之前雌激素對原發(fā)性干燥綜合征有相關(guān)性的報道相符合。懷疑本病時要檢測抗核抗體和特異性抗核抗體譜以及口干眼干等情況，確診原發(fā)性干燥綜合征需要與其他抗核抗體相關(guān)性疾病相鑒別。目前，對原發(fā)性干燥綜合征的治療以緩解患者癥狀為主，激素、免疫抑制劑、干擾素等對于緩解眼口干效果有限，除對癥治療外，系統(tǒng)用藥可改變原發(fā)性干燥綜合征的免疫病理進(jìn)程，可減緩疾病的進(jìn)展和延長患者的生存期，尚未報道可以根治疾病的方法。近年來臨床檢測指標(biāo)與診斷方法有所改進(jìn)［5，6］，但由于其臨床表現(xiàn)多種多樣，容易漏診或誤診。因此，早期診斷和特異性診斷很有必要。原發(fā)性干燥綜合征的免疫學(xué)血清標(biāo)志物中則有多種特異性自身抗體和高滴度的免疫球蛋白存在，這些對本病的診斷具有重要意義［7］。

本研究回顧性分析162例原發(fā)性干燥綜合征患者血清中的自身抗體及其自身抗體檢測譜［8］，發(fā)現(xiàn)患者抗核抗體的陽性率為92.0%，抗核抗體譜中以抗SSA、抗 SSB、抗Ro52等陽性為主，陽性檢出率分別為72.8%、44.4%、73.4%，其他自身抗體檢出率均較低或沒有檢測到。表1顯示，健康對照組會極少量地檢測到自身抗體，但是滴度都很低，與原發(fā)性干燥綜合征有顯著性差異。研究表明，自身抗體陽性是干燥綜合征的重要特征之一，與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［9］。而本次研究中所有抗核抗體陽性患者都是初診患者，部分原發(fā)性干燥綜合征患者臨床癥狀出現(xiàn)比較輕或者沒有，文獻(xiàn)報道，原發(fā)性干燥綜合征患者臨床癥狀出現(xiàn)前平均4～6年檢測到相關(guān)自身抗體是被低估了的結(jié)果，實(shí)際情況應(yīng)更早檢測到自身抗體［6］。對于一部分抗體持續(xù)性陽性、高滴度的患者，很有可能發(fā)展為自身免疫性疾病，具體會發(fā)展成哪一類的自身免疫性疾病還未明確，因此采用單獨(dú)的ANA檢測具有敏感性高而特異性不強(qiáng)的缺點(diǎn)。然而，具有互補(bǔ)性很強(qiáng)的自身抗體譜能有助于疾病的分類，本研究中抗SSA、抗SSB的陽性檢出率相對較高（包含疊加綜合征），具有診斷的特異性。同時這些抗核抗體譜的陽性檢出患者甚至可以在臨床癥狀出現(xiàn)前預(yù)測是否將發(fā)展為高?；颊?，尤其是出現(xiàn)嚴(yán)重臟器病變或并發(fā)肺纖維化、中樞神經(jīng)系損害、預(yù)后較差的患者有重要意義。但是這種臨床癥狀出現(xiàn)前檢測到的自身抗體對疾病預(yù)后和治療效果的相關(guān)性還沒有深入報道［10～12］。

抗SSA、抗SSB陽性（高滴度更有診斷意義）是指南中診斷原發(fā)性干燥綜合征的指標(biāo)之一［13，14］，是體外診斷pSS的標(biāo)志性抗體。文獻(xiàn)報道［15，16］，抗SSA的敏感性高，抗SSB抗體特異性相對較高，患者在臨床癥狀出現(xiàn)前檢測到相關(guān)自身抗體主要是ANA，其次為抗SSA和抗SSB，其中，在臨床癥狀出現(xiàn)前18年檢測到ANA，平均6年檢測到抗SSA抗體，平均4年檢測到抗SSB抗體?？筍SA抗體和抗SSB抗體陽性是發(fā)展成為原發(fā)性干燥綜合征的危險因素。

本研究以ANA、抗SSA、抗Ro52和抗SSB的聯(lián)合檢測，分析對原發(fā)性干燥綜合征診斷的敏感性和特異性。表2中各組之間的比較顯示敏感性都比較高，最高達(dá)100.0%。值得注意的是其特異性不理想，最低的僅14.4%。聯(lián)合檢測研究組中特異性最高的組合能達(dá)到57.0%。綜合分析表2各組合，我們認(rèn)為抗SSA+ 抗SSB組合有較好的臨床意義［17，18］，其敏感性為97.2%，特異性為57.0%。由此分析可見，抗核抗體聯(lián)合抗核抗體譜可以作為很好的疾病篩選指標(biāo)，而對疾病的診斷方面，抗SSA+抗SSB雙陽性能大幅提高對原發(fā)性干燥綜合征的診斷價值。因此，鼓勵各醫(yī)院積極開展自身免疫性疾病的篩查，尤其是要注重聯(lián)合檢測，特別是聯(lián)合檢測的組合選擇和結(jié)果分析［19，20］，本文對近年來的臨床資料進(jìn)行分析，研究結(jié)果顯示在原發(fā)性干燥綜合征患者臨床癥狀出現(xiàn)前檢測到相關(guān)自身抗體是被低估了的結(jié)果，實(shí)際情況應(yīng)更早檢測到自身抗體，為臨床提供流行病學(xué)依據(jù)，更好地為患者服務(wù)。同時，我們也應(yīng)該綜合選擇其他檢查，如眼睛和口腔的活檢（敏感性為63.9%）、影像學(xué)（敏感性為77.8%）和生物化學(xué)檢測，對發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)的系統(tǒng)性病變的患者早診斷早治療。本研究中也存在研究數(shù)量較少和未能有效區(qū)分少數(shù)的重疊綜合征的病例［21，22］，也有文獻(xiàn)報道系統(tǒng)性紅斑狼瘡［23，24］（SLE）等患者中也會出現(xiàn)低頻率抗SSA和抗SSB陽性，今后將進(jìn)一步完善數(shù)據(jù)。

總之，聯(lián)合檢測和綜合分析對疾病的診斷和轉(zhuǎn)歸有重要的臨床意義，值得臨床推廣。

表2　聯(lián)合檢測自身抗體的診斷敏感性與特異性比較（%）

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［中圖分類號］R593.2

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］B

［文章編號］1673-9701（2016）13-0125-04

［基金項目］浙江省自然科學(xué)基金資助項目（LQ14H100001）

收稿日期：（2015-12-10）

Combination of ANA，anti-SSA and anti-SSB detection in the clinical diagnosis of primary Sj?gren's syndrome patients

ZHU Zhongliang1,2PANG Zhenzhen2LIU Jinlin2LU Wenjing2ZHOU Yonglie1,2
1.College of Life Science，Zhejiang University of Traditional Chinese Medical，Hangzhou310053，China；2.Department of Clinical Laboratory，Zhejiang Provincial People's Hospital，Hangzhou310014，China

［Abstract］Objective To study the distribution characteristics and clinical value of antinuclear antibodies（ANA）and ANAs spectrum of the primary sj?gren's syndrome（pSS）patients in Zhejiang province.Methods Indirect fluorescence （IIF）and Euroline ANA Profile methods were used to detect the 162 serum specimens of pSS patients in Zhejiang Provincial People's Hospital from June 2012 to June 2015，then analyzed the data.Results Among the 162 pSS patients，which including 7males and 155 females.The ANA of the 149 pSS patients were positive（92.0%）.The positive rate of SSA，SSB and Ro52 antibodies were 118（72.8%），72（44.4%）and 119（73.4%）respectively.The three kinds of antibodies were significantly higher than control group（P＜0.05）.The positive rate of ANA combine detection of SSA，SSB and Ro52 were 87.6%、65.9%and 83.2%respectively.The specificity of combined detection of SSA and SSB was 57%.Conclusion In the ANA positive specimens，combined detection of SSA and SSB will improve the specificity of the pSS patients.

［Key words］Antinuclear antibody；Primary sj?gren's syndrome；Anti-SSA antibody；Anti-SSB antibody