李 智，張紅霞，楊 倩

(1．天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070;2．武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162)

藥品質(zhì)量與檢驗(yàn)

超高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢替唑鈉的有關(guān)物質(zhì)

李 智1，張紅霞2，楊 倩1

(1．天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070;2．武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162)

目的:建立超高效液相色譜梯度洗脫法測(cè)定注射用頭孢替唑鈉中的有關(guān)物質(zhì)。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2．1 mm，1．7 μm)色譜柱，以枸櫞酸溶液(取枸櫞酸3 g加水溶解并稀釋至900 ml)－乙腈(90∶10)為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，線性梯度洗脫;流速:0．3 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm。結(jié)果:在0．19～47．08 μg/ml濃度范圍內(nèi)，頭孢替唑峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(r=1．000 0)。結(jié)論:本法簡(jiǎn)便快速、專屬性強(qiáng)，可作為測(cè)定注射用頭孢替唑鈉有關(guān)物質(zhì)的有效方法。

注射用頭孢替唑鈉，超高壓液相色譜，梯度洗脫，有關(guān)物質(zhì)

頭孢替唑鈉為半合成的第一代頭孢菌素，具廣譜抗菌作用，通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁粘肽的生物合成而達(dá)到殺菌作用。頭孢替唑鈉最先由日本藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社開發(fā);1995年韓國(guó)新豐制藥株式會(huì)社獲得進(jìn)口藥品注冊(cè)證，獲準(zhǔn)進(jìn)口;國(guó)內(nèi)首仿企業(yè)為哈藥集團(tuán)制藥總廠。注射用頭孢替唑鈉為頭孢替唑鈉無(wú)菌原料直接分裝。本品較少發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，不良反應(yīng)中以過(guò)敏反應(yīng)最常見［1］。

頭孢替唑鈉和注射用頭孢替唑鈉收載于《中國(guó)藥典》2015年版［2］和《日本藥局方抗菌性物質(zhì)醫(yī)藥品手冊(cè)》2000年版［3］?！吨袊?guó)藥典》2015年版及其他現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查均采用HPLC法，C18色譜柱，枸櫞酸溶液－乙腈(90∶10)為流動(dòng)相，由于有機(jī)相比例較低，等度洗脫很難在短時(shí)間內(nèi)將極性小的雜質(zhì)沖出色譜柱;此外，本品有關(guān)物質(zhì)含量較少，《中國(guó)藥典》規(guī)定最大單一雜質(zhì)和總雜質(zhì)的限度分別為1．0%和1．5%。綜上，本實(shí)驗(yàn)建立了靈敏度更高、分離效能更好的UPLC梯度洗脫法測(cè)定注射用頭孢替唑鈉中的有關(guān)物質(zhì)，以更好地控制藥品的質(zhì)量，拓展新技術(shù)在藥物分析方面的應(yīng)用，并為下一步采用柱切換二維超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法研究頭孢替唑鈉的雜質(zhì)譜打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Waters ACQUITY UPLC液相系統(tǒng)，Empower 3色譜工作站(美國(guó)沃特世公司)，Mettler Toledo XS 205型電子分析天平(瑞士梅特勒公司)。頭孢替唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)130510－200301，純度90．0%);注射用頭孢替唑鈉［國(guó)內(nèi)抽樣樣品，共7批，涉及7家生產(chǎn)企業(yè)(1～7)］;枸櫞酸為分析純，乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Waters Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×2．1 mm，1．7 μm);以枸櫞酸溶液(取枸櫞酸 3 g加水溶解并稀釋至 900 ml)－乙腈(90∶10)為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行線性梯度洗脫;流速:0．3 ml/min;柱溫40℃;檢測(cè)波長(zhǎng): 254 nm;進(jìn)樣量2 μl。

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液的制備

2．2．1 供試品溶液 取本品約25 mg，精密稱定，置25 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．2．2 對(duì)照溶液 精密量取供試品溶液1 ml，置100 ml量瓶，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．2．3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液 取頭孢替唑?qū)φ掌芳s25 mg，置25 ml量瓶中，加0．1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml，放置1 min，加水10 ml，再加0．1 mol/L鹽酸溶液1 ml中和，用水稀釋至刻度，搖勻，即得系統(tǒng)適用性對(duì)照溶液，以溶劑作為空白溶液。分別取系統(tǒng)適用性對(duì)照溶液、供試品溶液和空白溶液，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。色譜圖見圖1。

圖1 供試品(A)對(duì)照品(B)空白(C)UPLC色譜圖

2.3 專屬性考查試驗(yàn)

2．3．1 酸破壞試驗(yàn) 取本品約10 mg，置具塞試管中，加0．1 mol/L的鹽酸溶液1 ml，水浴加熱15 min后，加0．1 mol/L的氫氧化鈉溶液1 ml和水8 ml，搖勻，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，同時(shí)隨行空白試驗(yàn)。

2．3．2 堿破壞試驗(yàn) 取本品約10 mg，置具塞試管中，加0．1 mol/L的氫氧化鈉溶液1 ml，室溫放置1 min后，加0．1 mol/L的鹽酸溶液1 ml和水8 ml，搖勻，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，同時(shí)隨行空白實(shí)驗(yàn)。

2．3．3 氧化破壞試驗(yàn) 取本品約10 mg，置具塞試管中，加30%的過(guò)氧化氫溶液1 ml，室溫放置1 min后，加水9 ml，搖勻，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，同時(shí)隨行空白試驗(yàn)。

2．3．4 加熱破壞試驗(yàn) 取本品約10 mg，置具塞試管中，加水10 ml溶解，搖勻，置水浴加熱0．5 h后，放置至室溫，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。

2．3．5 光照破壞試驗(yàn) 取本品約10 mg，置稱量瓶中，加水10 ml溶解，搖勻，置254 nm紫外燈下光照0．5 h后，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。專屬性試驗(yàn)色譜圖見圖2，該色譜條件下，頭孢替唑的降解產(chǎn)物均能與主峰較好分離，方法專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系考查 取頭孢替唑?qū)φ掌芳s50 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作儲(chǔ)備液。再分別精密量取儲(chǔ)備液適量，用溶劑定量稀釋制成濃度為0．2、0．5、1．0、2．0、5．0、10、20和50 μg/ml的溶液，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明，在0．19～47．08 μg/ml濃度范圍內(nèi)，頭孢替唑峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為 Y= 8 138．9 X－242．4(r=1．000 0)。

2.5 檢測(cè)限與定量限 精密量取線性關(guān)系考查中的溶液適量用水稀釋至一定濃度，測(cè)定頭孢替唑的最小檢出限(按S/N=3計(jì)算)，得到最小檢出濃度為0．028 μg/ml，最低定量濃度為0．085 μg/ml。

圖2 酸破壞(A)堿破壞(B)氧化破壞(C)加熱破壞(D)光照破壞(E)色譜圖

2．6 精密度試驗(yàn) 取注射用頭孢替唑鈉樣品(生產(chǎn)企業(yè)1，批號(hào)A1502211－2)，稱取6份，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算得最大單一雜質(zhì)和總雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的RSD分別為1．4%和1．1%。

2．7 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 因本品的貯藏條件涼暗干燥處且β－內(nèi)酰胺類抗生素大多不穩(wěn)定，故取供試品溶液(生產(chǎn)企業(yè)1，批號(hào)A1502211－2)，分別于4℃條件下放置0、1、2、4、6、8和12 h后進(jìn)樣測(cè)試。結(jié)果表明，主峰面積的RSD為0．15%，總雜質(zhì)峰面積的RSD為1．1%，雜質(zhì)個(gè)數(shù)未見增加，即供試品溶液于4℃放置12 h基本穩(wěn)定。

2．8 樣品中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定 取注射用頭孢替唑鈉樣品7批，按“2．2．1”項(xiàng)下方法操作，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。供試品特征色譜圖見圖3，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

圖3 供試品溶液UPLC色譜圖

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 本法沿用了現(xiàn)行注射用頭孢替唑鈉標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查所用的枸櫞酸溶液－乙腈系統(tǒng)，建立了梯度洗脫方法。此方法與等度洗脫法比較，分析時(shí)間明顯縮短，分離雜質(zhì)的能力更強(qiáng)，檢出雜質(zhì)的數(shù)量更多，特別是主峰后極性較小雜質(zhì)的有效檢出，明顯優(yōu)于等度洗脫法，見表2、圖3和圖4。本法快速、靈敏、專屬性好，適用于注射頭孢替唑鈉有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。

圖4 等度洗脫法測(cè)定供試品溶液HPLC色譜圖

3.2 雜質(zhì)譜分析 本文所建立的方法可實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)的有效分離，經(jīng)比較，不同廠家生產(chǎn)的注射用頭孢替唑鈉的雜質(zhì)譜存在明顯差異，雜質(zhì)譜的差異往往與藥品的生產(chǎn)工藝密切相關(guān)，同時(shí)受到貯藏條件等因素的影響。考慮到UPLC在線柱切換液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以適用于流動(dòng)相中添加了非揮發(fā)性鹽類的情況，且UPLC較HPLC具有更高的靈敏度，更好的分辨率及更小的柱前死體積［4，5］。因此，本文所建立的方法為下一步采用超高效液相色譜在線柱切換質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究本品雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)研究打下基礎(chǔ)。

1 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典臨床用藥須知化學(xué)藥和生物制品卷(2010年版)［M］，北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2011:649

2 中國(guó)藥典［S］．二部．2015:290－291

3 日本藥局方抗菌性物質(zhì)醫(yī)藥品手冊(cè)．2000:Ⅱ78

4 楊亞莉，楊劍寧，胡敏，等．HPLC法分析可利霉素的組分［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，44(10):1183－1186

5 楊倩，李偉，曹曉云，等．注射用頭孢唑肟鈉的雜質(zhì)譜研究［J］．中國(guó)藥學(xué)雜志，2014，49(19):1750－1754

Determination of related substances in ceftezole sodium for injection by UPLC

Li Zhi，Yang Qian
(Tianjin Institute for Drug Control，Tianjin 30070)

Objective:To develop a UPLC method for determination of the related substances in Ceftezole Sodium for Injection．Methods:Waters Acquity UPLC BEH C18column(2．1 mm ×100 mm，1．7 μm)was adopted．Citric acid solution(3 g of citric acid in 900 ml of water)－acetonitrile(90∶10)was used as mobile phase A，and acetonitrile as mobile phase B．Gradient elution was applied．The flow rate was 0．3 ml/min．The detection wave length was at 254 nm．Results:The linear range of ceftezole sodium was between 0．19 μg/ml and 47．08 μg/ml(r=1．000 0)．This method manifested fine repeatability，specificity and good stability of the test solution．Conclusion:This method is convenient，quick，specific and suitable for determination of the related substances of Ceftezole Sodium for Injection．

ceftezole sodium for injection，UPLC，gradient elution，related substances

R927．2

A

1006-5687(2016)03-0001-03

2016-02-17