胡麗梅，張　瑞，鄒軍根（巴中市公安局物證鑒定所，四川 巴中 636099）

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·學(xué)術(shù)爭鳴·

接觸性生物檢材DNA提取方法的比較

胡麗梅，張瑞，鄒軍根
（巴中市公安局物證鑒定所，四川 巴中 636099）

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學(xué)；提取法；接觸性生物檢材；Chelex-100法；DNA IQTMSystem

在現(xiàn)代犯罪行為中，現(xiàn)場物證呈現(xiàn)多樣化、微量化的趨勢，接觸性生物檢材所占比例越來越大。接觸性生物檢材DNA模板量低，檢驗(yàn)分型效果不穩(wěn)定，隨著法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)的不斷提高、各種純化試劑盒和檢驗(yàn)設(shè)備的研發(fā)和應(yīng)用，其檢出率逐漸提高［1-2］。本研究采用Chelex-100法與DNA IQTMSystem（DC6700，美國Promega公司）分別對本實(shí)驗(yàn)室近年來實(shí)際檢案中的接觸性檢材進(jìn)行DNA提取，分析比較兩種方法的提取效果，報(bào)道如下。

1　材料及方法

1.1材料

57份接觸性生物檢材中，瓶口、吸管類檢材29份，手柄類工具檢材17份，口罩、手套、衣物類檢材11份，均來自本實(shí)驗(yàn)室日常檢案。

1.2方法

29份瓶口、吸管類檢材和17份手柄類工具檢材，采用普通醫(yī)用棉簽干濕兩步法進(jìn)行擦拭提??；11份口罩、手套、衣物類檢材，采用脫落細(xì)胞粘取器（公安部物證鑒定中心）粘取。以上檢材均取適量后分為兩份，分別采用Chelex-100法和DNA IQ純化法提取DNA。

Chelex-100法：檢材放入1.5mL的微量離心管，加入100 μL Chelex-100混懸液及3 μL蛋白酶K，56℃水浴30min，100℃煮沸8min，以離心半徑5cm，13000r/min，離心4min，取上清液適量擴(kuò)增。

DNA IQ純化法：檢材置于1.5mL的微量離心管中，加入DNA IQTMSystem裂解液300 μL及1 mol/L DTT 3μL，95℃煮沸30min，套管離心，去載體后加入3μL磁珠，混勻后室溫放置10min，旋渦振蕩后將微量離心管放在磁架上，小心吸去液體，然后用100μL洗液洗滌3次，室溫下空氣干燥10min，加入30μL的純水，65℃ 5min進(jìn)行洗脫，取洗脫液適量進(jìn)行擴(kuò)增。

使用Identifiler?Plus試劑盒（美國AB公司），10μL反應(yīng)體系，在9700型PCR擴(kuò)增儀（美國AB公司）上進(jìn)行28次循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在3130xl型遺傳分析儀（美國AB公司）上進(jìn)行電泳檢測，采用GeneMapper ID v3.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2　結(jié)果與討論

通過對上述檢驗(yàn)圖譜進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)，DNA IQTMSystem檢出率明顯高于Chelex-100法，結(jié)果見表1。

表1　兩種DNA提取方法效果比較?。鄯荩?）］

瓶口、吸管類檢材兩種方法檢出率均較高，尤其采用DNA IQ純化法時(shí)更高，且峰型均衡、無雜峰，峰高基本在1 000 RFU以上，大多數(shù)為單一來源；采用DNA IQ純化法檢驗(yàn)結(jié)果＜9個(gè)基因座的案例中，有2例瓶口無瓶蓋，2例吸管包裝不當(dāng)，可能致DNA降解嚴(yán)重。

手柄工具及口罩、手套、衣物類檢材，Chelex-100法的檢出率均不高；使用DNA IQ純化法提取，檢出率均有明顯提高，峰高基本在1000～2000RFU，但多

Chelex-100法提取DNA，因其操作簡便快捷、價(jià)格便宜、儀器設(shè)備要求低、在同一管中操作、檢材損失低、相對不易污染而廣泛用于常規(guī)檢材的DNA提?。?-3］，但對微量、腐敗、降解檢材的DNA提取有一定的局限性，如本研究使用該方法處理手柄工具及口罩、手套、衣物類檢材檢出率較低，分別為35.29%、18.18%，明顯低于DNA IQ純化法的70.58%、72.72%。

DNA IQ純化法提取DNA，在高濃度硫氰酸胍和鹽酸胍等存在的條件下，核酸吸附到二氧化硅上，而在低鹽條件下核酸被洗脫下來，運(yùn)用該系統(tǒng)提取DNA或?qū)helex-100法提取的DNA進(jìn)行純化，成功率得到普遍提高。當(dāng)然該方法操作較繁瑣，不適合大批量檢材的提取，如采用自動(dòng)化工作站進(jìn)行提取［4］，更省時(shí)、簡便。

參考文獻(xiàn)：

［1］王彥濤，宋道江.M48磁珠法和Chelex-100法提取脫落細(xì)胞DNA的初步比較［J］.刑事技術(shù)，2013，（2）：53-54.

［2］楊電，張麗萍，劉超，等.Chelex-100和兩種磁珠法提取接觸DNA效果的比較［J］.刑事技術(shù)，2012，（1）：11-13.

［3］范生貴，王興俊，王得椿.不同方法提取生物檢材DNA的比較研究［J］.生物技術(shù)世界，2014，（4）：121.

［4］楊電，劉超，徐曲毅，等.DNA IQ磁珠法結(jié)合MaxwellTM16自動(dòng)儀提取接觸DNA［J］.刑事技術(shù)，2011，（3）：3-5.

（本文編輯：李成濤）

中圖分類號：DF795.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.03.013

文章編號：1004-5619（2016）03-0215-02

作者簡介：胡麗梅（1984—），女，主要從事法醫(yī)物證學(xué)研究；E-mail：261031103@qq.com數(shù)檢出混合圖譜。

收稿日期：（2015-08-24）