李寧寧，郭　海，雷延飛

(河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 451191)

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半夏厚樸湯加味對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜血流量及脂質(zhì)過氧化損傷的影響研究

李寧寧，郭海，雷延飛

(河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 451191)

[摘要]目的觀察半夏厚樸湯加味對(duì)慢性萎縮性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜血流量及脂質(zhì)過氧化損傷的影響，探討其作用機(jī)制。方法隨機(jī)選取18只大鼠作為正常組，90只大鼠用N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍制作CAG模型。將造模成功后CAG大鼠隨機(jī)分為模型組、維酶素組、半夏厚樸湯加味高劑量組、半夏厚樸湯加味中劑量組、半夏厚樸湯加味低劑量組，每組18只。維酶素組給予維酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚樸湯加味高、中、低劑量組分別給予半夏厚樸湯水煎劑10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，連續(xù)10周。檢測(cè)各組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性，胃黏膜組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。結(jié)果模型組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著低于正常組(P均<0.05)，胃黏膜組織中MDA活性明顯高于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著均顯著高于模型組(P均<0.05)，MDA活性均明顯低于模型組(P均<0.05)，且高、中劑量組效果優(yōu)于低劑量組(P均<0.05)。結(jié)論半夏厚樸湯加味可能通過增加胃黏膜血流量、調(diào)節(jié)胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂質(zhì)過氧化損傷而起保護(hù)和修復(fù)胃黏膜作用。

[關(guān)鍵詞]慢性萎縮性胃炎；半夏厚樸湯加味；大鼠

慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是以胃黏膜固有腺體萎縮和腸上皮化生及不典型增生為病理特征的慢性炎癥過程，具有發(fā)病緩慢、病勢(shì)纏綿、遷延難愈的特點(diǎn)，因其癌變率較高而被WHO列為癌前病變[1]。本研究以中醫(yī)傳統(tǒng)理論為基礎(chǔ)和指導(dǎo)，探討了半夏厚樸湯加味對(duì)CAG模型大鼠胃黏膜血流量及脂質(zhì)過氧化損傷指標(biāo)的影響及其作用機(jī)制，旨在為半夏厚樸湯加味在臨床上治療CAG提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠108只，雌雄各半，體質(zhì)量200～220 g，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(魯)20130001。

1.2藥物與試劑半夏厚樸湯加味由半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉、黃芪、白術(shù)等藥物組成，購于河南省第二人民醫(yī)院，各味藥材粉碎，加水適量，超聲輔助提取2次，每次30 min，經(jīng)濃縮后，制備為濃度分別為每毫升含藥材250，500，1 000 mg的供試液，冰箱保存?zhèn)溆?，灌胃給藥前復(fù)溫。維酶素片，河南環(huán)海藥業(yè)有限公司提供，搗碎，用蒸餾水配成混懸液，灌胃給藥。N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)，由百靈威科技有限公司提供，每3 d用電子天平稱取MNNG 2 g，以蒸餾水2 000 mL稀釋配成濃度1 mg/mL的保存液，4 ℃冰箱避光保存。每日把保存液稀釋為100 μg/mL作為CAG模型大鼠的飲水。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。

1.3造模與分組給藥隨機(jī)選取18只大鼠作為正常組，其余90只大鼠參照文獻(xiàn)[2]方法進(jìn)行CAG造模。大鼠自由飲用上述MNNG稀釋液，飲用瓶外涂黑色漆以避光，瓶?jī)?nèi)液體每日更換，共8周；同時(shí)每只每周一、周四各給予40%乙醇灌胃1次，每只2 mL，共8周。將造模成功后CAG大鼠隨機(jī)分為模型組、維酶素組、半夏厚樸湯加味高劑量組、半夏厚樸湯加味中劑量組、半夏厚樸湯加味低劑量組，每組18只。維酶素組給予維酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚樸湯加味高、中、低劑量組分別給予半夏厚樸湯水煎劑10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，連續(xù)10周。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1大鼠一般狀態(tài)實(shí)驗(yàn)過程中定期觀察所有大鼠的體質(zhì)量、精神狀態(tài)、活動(dòng)、進(jìn)食、毛色及腹水情況等。

1.4.2胃黏膜血流量給藥10周后，每組隨機(jī)取6只大鼠，參照文獻(xiàn)[3]方法，用中性紅清除法測(cè)胃黏膜血流量。

1.4.3胃液酸度與胃蛋白酶活性每組剩余的12只大鼠禁食12 h后麻醉，打開腹腔結(jié)扎幽門，向胃內(nèi)注射生理鹽水2 mL，15 min后摘除全胃，收集胃液于離心管。胃液離心后，二步滴定法[3]測(cè)定胃液游離酸度和胃液總酸度，麥?zhǔn)戏╗4]測(cè)定胃蛋白酶活性。

1.4.4胃黏膜病理改變情況及SOD、MDA、GSH-Px活性將1.4.3步驟所得鼠胃進(jìn)行常規(guī)解剖，在胃體及胃竇小彎處取1.5 cm×1.0 cm組織塊，制備病理切片，HE染色，顯微鏡下觀察胃黏膜病理改變情況。其余目檢胃黏膜損傷情況后，蒸餾水洗凈胃內(nèi)容物，濾紙吸干水分后，加入適量蒸餾水用超聲波勻漿器制成胃黏膜勻漿，嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟測(cè)定胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性。

2結(jié)果

2.1各組大鼠一般狀態(tài)模型組大鼠活動(dòng)和食量減少，被毛蓬松，消瘦。維酶素組及半夏厚樸湯加味低劑量組大鼠體質(zhì)量稍輕，被毛稍微散亂，但較潔凈。半夏厚樸湯加味高、中劑量組大鼠食量較好，活動(dòng)靈活，體質(zhì)量接近正常組。

2.2各組胃黏膜血流量正常組為(26.56±5.25)mL/(kg·h)，模型組為(12.27±1.47)mL/(kg·h)，維酶素組為(16.49±2.35)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯加味低劑量組為(17.42±4.57)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯中劑量組為(23.54±5.12)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯高劑量組為(26.21±4.82)mL/(kg·h)。模型組大鼠胃黏膜血流量顯著低于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著高于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組均明顯高于低劑量組(P均<0.05)。

2.3各組胃液酸度與胃蛋白酶活性模型組大鼠胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性均明顯低于正常組(P均<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性均明顯高于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組均明顯高于低劑量組(P均<0.05)。見表1。

表1　各組胃液酸度與胃蛋白酶活性±s)

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與半夏厚樸湯低劑量組比較，P<0.05。

2.4各組病理表現(xiàn)正常組大鼠胃黏膜完整，上皮細(xì)胞排列整齊，腺體形態(tài)規(guī)則，排列緊密。模型組大鼠胃黏膜層明顯變薄，腺體數(shù)目顯著減少，體積縮小，腺體排列紊亂，固有層可見大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，少數(shù)大鼠可見腸上皮化生。維酶素組大鼠胃黏膜可見點(diǎn)狀炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體輕度萎縮，排列整齊。半夏厚樸湯加味低劑量組胃黏膜結(jié)構(gòu)輕度紊亂，腺體輕度萎縮，黏膜層有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；高、中劑量組胃黏膜上皮排列整齊，腺體大小形態(tài)較一致，腺體萎縮不明顯。病理表現(xiàn)見圖1～5。

2.5各組胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性模型組大鼠胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性明顯低于正常組(P均<0.05)，MDA活性明顯高于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均明顯高于模型組(P均<0.05)，MDA活性均明顯低于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組改善情況均明顯優(yōu)于低劑量組(P均<0.05)。見表2。

圖1　正常組光鏡下胃黏膜表現(xiàn)(HE染色，×400)

圖2　模型組光鏡下胃黏膜表現(xiàn)(HE染色，×400)

圖3　半夏厚樸湯加味低劑量組光鏡下胃黏膜表現(xiàn)(HE染色，×400)

圖4　半夏厚樸湯加味中劑量組光鏡下胃黏膜表現(xiàn)(HE染色，×400)

圖5　半夏厚樸湯加味高劑量組光鏡下胃黏膜表現(xiàn)(HE染色，×400)

表2　各組胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與半夏厚樸湯低劑量組比較，P<0.05。

3討論

CAG以病情遷延、長(zhǎng)期消化不良為特征，其發(fā)生與胃黏膜血流量的減少關(guān)系密切，而良好的血液循環(huán)可為胃黏膜提供必需的營(yíng)養(yǎng)，去除代謝有害物質(zhì)，是保證胃黏膜完整性及維護(hù)其屏障功能的保障[5]。目前該病具體發(fā)病原因尚未完全闡明，但已發(fā)現(xiàn)CAG的形成與氧自由基損傷、脂質(zhì)過氧化物作用關(guān)系密切[6-7]。SOD和GSH-Px是體內(nèi)自由基清除系統(tǒng)中重要的酶，可清除H2O2和O2-，保護(hù)細(xì)胞不受自由基的損傷，二者活性可在一定程度上反映機(jī)體清除自由基的能力。MDA是脂質(zhì)過氧化的最終分解產(chǎn)物，可與脂質(zhì)過氧化中間產(chǎn)物自由基損傷膜結(jié)構(gòu)，改變膜成分的活性及抗原性而影響膜的正常功能，所以MDA水平是脂質(zhì)過氧化物損傷效應(yīng)的特征指標(biāo)[8]。目前西醫(yī)治療CAG主要是抗菌、保護(hù)胃黏膜、增強(qiáng)胃動(dòng)力藥物聯(lián)合運(yùn)用，但療效不佳，而且病情容易反復(fù)[9-10]。

CAG屬于中醫(yī)學(xué) “胃脘痛” “痞滿”“腹脹”等范疇，病機(jī)多為虛實(shí)夾雜，以脾胃虛弱、肝腎虧虛為本，濕熱、邪毒、血脈瘀阻為標(biāo)[11]。半夏厚樸湯中半夏、厚樸理氣和胃、消痞除滿，生姜、紫蘇行氣和胃，茯苓健脾祛濕，加味黃芪、白術(shù)益氣健脾，鼓舞中氣，諸藥合用，共奏辛開苦降、行氣化濁、和胃調(diào)脾、補(bǔ)中益氣、梳理中焦之效，通則不痛，中氣暢通，痛止痞消。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著低于正常組，胃黏膜組織中MDA活性明顯高于正常組；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著均顯著高于模型組，MDA活性均明顯低于模型組，且高、中劑量組效果優(yōu)于低劑量組。提示半夏厚樸湯加味干預(yù)，可增加CAG模型大鼠胃黏膜血流量，改善胃黏膜分泌功能，減輕脂質(zhì)過氧化損傷，逆轉(zhuǎn)胃黏膜萎縮，達(dá)到修復(fù)胃黏膜的目的。

綜上所述，半夏厚樸湯加味可能通過增加胃黏膜血流量、調(diào)節(jié)胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂質(zhì)過氧化損傷而起保護(hù)和修復(fù)胃黏膜作用，這為半夏厚樸湯加味在臨床上治療CAG提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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Study on the effect of Banxia Houpo Decoction on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis

LI Ningning,GUO Hai, LEI Yanfei

(Henan Medical College,Zhengzhou 451191,Henan, China)

Abstract:0bjective It is to observe the effect of Banxia Houpo Decoction (BHD) on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis(CAG), and to investigate the mechanism. Methods 18 rats were randomly selected as normal group, another 90 rats were selected to establish CAG model with N methyl N nitro N nitrosoguanidine．The successful models were randomly divided into model group, Vitacoenzyme group treated with Vitacoenzyme 0.28 g/kg, high, medium and low dose of BHD groups treated with 10.0, 5.0, 2.5 g/kg BHD respectively, 18 rats in each group. All the rats were treated once per day and for 10 weeks. After 10 weeks, secretion of gastric acid and pepsin activity, gastric mucosal blood flow(GMBF), the SOD, MDA and GSH in gastric mlucosa were observed or detected. Results The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly lower while that of MDA was higher in model group than those in normal group (P all<0.05). The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly higher while that of MDA was lower in Vitacoenzyme group and BHD groups than those in model group (P all<0.05), and the decrease or increase were more significant in high dose group and medium group than that in low dose group (P<0.05). Conclusion Banxia Houpo Decoction has good curative effect on CAG, its mechanism may be related with improving blood circulation of gastric mucosa, strengthening gastric mucosl protective screen, regulating gastric acid and pepsin activity, resisting the free radical imp airment and so on.

Key words:chronica trophic gastritis; Banxia Houpo Decoction; Chinese medicine treatment; raexperiemntal study

[作者簡(jiǎn)介]李寧寧，女，碩士，講師，主要從事胃腺癌的防治研究工作。

[基金項(xiàng)目]河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(142102310089)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.20.002

[中圖分類號(hào)]R-332

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)20-2170-04

[收稿日期]2015-12-02