楊　文

(四川省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，四川 成都 610041)

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防治蘭花根腐病的藥劑篩選及復(fù)配研究

楊文

(四川省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，四川 成都 610041)

摘要：采用室內(nèi)菌絲生長速率抑制法測定了 7 種殺菌劑對蘭花根腐病菌的室內(nèi)抑菌毒力，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了藥劑混配增效篩選實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：250g/L吡唑醚菌酯乳油和50%嘧菌環(huán)胺可濕性粉劑對蘭花根腐病菌的EC50分別為9.87mg/L和14.28mg/L。二元混配增效藥劑篩選結(jié)果顯示：250g/L吡唑醚菌酯乳油和50%嘧菌環(huán)胺可濕性粉劑按照2∶1體積比混配，對供試病菌的室內(nèi)抑菌增效作用明顯，為最佳增效配比。

關(guān)鍵詞：蘭花根腐病；立枯絲核病菌；殺菌劑；復(fù)配；聯(lián)合毒力

蘭花(Cymbidium)是植物分類上最大科之一,有800個(gè)屬35000多個(gè)種,分布廣泛，其眾多園藝品種極具觀賞價(jià)值。隨著人們生活水平的不斷提高,對高檔花卉的需求越來越大,蘭花種植面積也在不斷擴(kuò)大。蘭花原產(chǎn)于熱帶、亞熱帶及溫帶高海拔深山林谷地區(qū),經(jīng)園藝栽培后改變了原來的生長環(huán)境,但在栽培過程中常受到各種病原菌的危害[1]。蘭花根腐病是在蘭花種植中普遍發(fā)生的一種土傳病害，蘭花受到該病原危害時(shí)，初期根部有褐色病斑、凹陷、壞死等癥狀，嚴(yán)重時(shí)多個(gè)病斑會呈現(xiàn)環(huán)狀包圍莖基部和新長出的根系，最后造成整個(gè)根部腐爛，甚至導(dǎo)致蘭花植株不開花, 大大降低或失去其相應(yīng)的觀賞價(jià)值和商品價(jià)值[2],后期病部出現(xiàn)油菜籽狀小菌核。由于根部受損，根部吸收水分、養(yǎng)分能力下降，蘭株的生長遲緩，葉尖焦枯，葉片萎凋，苞葉變黑致死[3]，嚴(yán)重影響蘭花質(zhì)量。近年來，蘭花銷量波動(dòng)較大，其主要原因就是病蟲害造成蘭花的品質(zhì)下降。在蘭花的多種病蟲害中，以蘭花根腐病危害最為嚴(yán)重，隨著蘭花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，其危害也越來越重，不僅直接影響蘭花美觀、銷售，甚至成為蘭花產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸[4]。隨著氣候、栽培制度等因素的綜合作用，我國蘭花主要種植地蘭花根腐病發(fā)病情況普遍，已造成大量的經(jīng)濟(jì)損失，且蘭花根腐病有擴(kuò)大發(fā)生的趨勢[5]。

蘭花根腐病為土傳病害，其病原菌是立枯絲核菌(Rhizoctoniasola)[6]，該病原可以在土壤及植株殘?bào)w內(nèi)越冬。根據(jù)田間試驗(yàn)和人工接種試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，病菌發(fā)育適溫為20～24 ℃。溫度高，通風(fēng)不良，花盆積水，施肥過多，容易導(dǎo)致該病的發(fā)生。6～8月高溫濕雨天氣適宜根腐病的發(fā)生，降水量越大，發(fā)病越嚴(yán)重[7]。

目前，對觀賞蘭花根腐病的研究報(bào)道較少[8-12]，對蘭花根腐病的防治通常采用綜合治理的策略與方法, 但藥劑防治仍是不可缺少的防治措施之一[13]。根腐病的化學(xué)防治可選擇多菌靈、敵勁松、甲基硫菌靈、咪鮮胺錳鹽等廣譜性殺菌劑進(jìn)行種子消毒和灌根處理，但防治效果都不甚理想。雖然生產(chǎn)上已有一些有效藥劑, 但由于長期使用, 病菌已對其產(chǎn)生抗藥性，從而導(dǎo)致防治效果不佳。咪鮮胺、醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、百菌清和多菌靈等均屬于廣譜低毒高效殺菌劑，它們在作物、果蔬病害防治中效果較好[ 14-18]，但在蘭花根腐病的防治中的應(yīng)用尚未見報(bào)道。因此，對蘭花根腐病的防治有必要篩選和研制新的對環(huán)境友好、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、使用方便、防效良好的單劑或復(fù)配藥劑。基于上述現(xiàn)狀,本實(shí)驗(yàn)就幾種新型殺菌劑對蘭花根腐病菌的菌絲生長的抑制活性進(jìn)行了測定,旨在為生產(chǎn)上防治蘭花根腐病提供藥劑基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1 供試菌種立枯絲核菌(Rhizoctoniasola)，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 供試藥劑98%水楊菌胺原藥、25%溴菌腈微乳劑、250g/L吡唑醚菌酯乳油、50%氟啶胺懸浮劑、25%大蒜素可濕性粉劑、41%乙蒜素乳油、50%嘧菌環(huán)胺可濕性粉劑，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)無公害農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.3培養(yǎng)基馬鈴薯蔗糖(葡萄糖)培養(yǎng)基(PDA) ：馬鈴薯200g,葡萄糖15～20g，瓊脂10～15g，蒸餾水1000mL。將馬鈴薯去皮，洗凈，稱取200g，切成小塊，放入1000mL水中煮沸30min，用雙層紗布過濾，得馬鈴薯汁，補(bǔ)足水分，再將糖溶解，pH自然?？杉尤?.8%～2.0%瓊脂，即可得到固體培養(yǎng)基[19]。

1.2方法

1.2.1蘭花根腐病菌的活化將保存在試管中的蘭花根腐病菌用接種針挑起少量菌絲，接種到直徑為9.0cm盛有滅菌PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。然后置于22℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)72h備用。

1.2.2藥劑的配制將7種供試藥劑用無菌水分別溶解配制成有效成分為1000mg/L的藥液備用。

1.2.3供試藥劑對蘭花根腐病菌的抑菌活性測定采用菌絲生長速率抑制法[20]，測定藥劑對蘭花根腐病菌的抑菌活性。將98%水楊菌胺TC、25%溴菌腈ME、250g/L吡唑醚菌酯EC、50%氟啶胺SC、25%大蒜素WP、41%乙蒜素EC、50%嘧菌環(huán)胺WP7種農(nóng)藥按1.2.2中的濃度，分別取1mL藥液和9mL PDA培養(yǎng)基移至滅菌培養(yǎng)皿中，混合均勻，靜置。待培養(yǎng)基冷卻后，分別將直徑為0.5cm的生長狀況相似的蘭花根腐病菌菌餅接入培養(yǎng)皿中央，以無藥培養(yǎng)基接入相同的蘭花根腐病菌菌餅作對照，每處理3次重復(fù)。置于22℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h，觀察記錄菌落大小，用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算抑菌率。抑菌率計(jì)算公式如下：

1.2.4單劑藥劑毒力測定通過上述供試藥劑對蘭花根腐病抑菌活性的研究，初步篩選出抑菌率相對較高的藥劑用來進(jìn)行抑制菌絲生長毒力測定。將抑菌活性較高的農(nóng)藥用無菌水稀釋成6個(gè)濃度梯度，測定單劑對蘭花根腐病菌的抑制濃度區(qū)間，并計(jì)算其EC50值，選出對蘭花根腐病抑制效果較強(qiáng)的2種不同的藥劑。

1.2.5混合藥劑對蘭花根腐病抑菌活性測定用Horsfall[21]方法測定，即在2個(gè)單劑的抑菌濃度區(qū)間和EC50值大小的基礎(chǔ)上，確定2種藥劑的混配比例。將篩選出的藥劑分別取2種單劑的有效中濃度藥液按1∶1、2∶1、l∶2比例進(jìn)行復(fù)配，然后測定其抑制蘭花根腐病菌的菌絲生長速率，方法同1.2.3，測定每個(gè)復(fù)配比例的EC50值。

1.2.6混劑聯(lián)合毒力的評價(jià)以藥劑濃度對數(shù)值為自變量x、以菌絲生長抑制率的幾率值為因變量y計(jì)算出毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)r，按Wadley[22]法計(jì)算增效系數(shù)(SR)，根據(jù)增效系數(shù)(SR)評價(jià)藥劑混用的聯(lián)合作用類型。

EC50(ob)=10(5-a)/b

EC50(th) =(X + Y)/(X / EC50X+ Y /EC50Y)

SR =EC50(th)/EC50(ob)

其中，X、Y為2種成分在復(fù)配藥劑中所占的比例，EC50(th)為混劑理論EC50值，EC50(ob)為混劑實(shí)際EC50值，即SR<1.0，表示為拮抗作用；1.0≤SR<1.5，表現(xiàn)為加和作用；SR≥1.5，表現(xiàn)為增效作用。

2結(jié)果與分析

2.17種藥劑對蘭花根腐病菌菌絲生長抑制作用測定結(jié)果

98%水楊菌胺原藥、25%溴菌腈微乳劑、250g/L吡唑醚菌酯乳油、50%氟啶胺懸浮劑、25%大蒜素、41%乙蒜素乳油、50%嘧菌環(huán)胺WP 7種殺菌劑對蘭花根腐病菌菌絲生長的抑制結(jié)果見圖1。

圖1　7種殺菌劑對蘭花根腐病菌菌絲生長抑制作用測定結(jié)果

由圖1可知，7種藥劑對蘭花根腐病菌菌絲生長的抑制作用存在明顯差異。在7種藥劑中，250g/L吡唑醚菌酯EC、50%嘧菌環(huán)胺WP和25%溴菌腈微乳劑對蘭花根腐病菌的抑制作用較大，明顯高于其他藥劑，抑制率分別為80.5%、78.1%、74.6%。因此，以下試驗(yàn)選用250g/L吡唑醚菌酯EC、50%嘧菌環(huán)胺WP和25%溴菌腈微乳劑作為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的測試藥劑。

2.2單劑對蘭花根腐病菌菌絲生長毒力測定

在上述結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步測定了吡唑醚菌酯、嘧菌環(huán)胺和溴菌腈對蘭花根腐病菌菌絲生長的室內(nèi)毒力測定，結(jié)果見表1。

表1　3種殺菌劑對蘭花根腐病菌室內(nèi)毒力測定結(jié)果

從表1可以看出，通過將殺菌劑的菌絲生長抑制幾率值和各藥劑濃度對數(shù)值之間進(jìn)行線性回歸分析，得到了吡唑醚菌酯等3種殺菌劑對蘭花根腐病的毒力回歸方程。其中吡唑醚菌酯抑制蘭花根腐病菌菌絲生長的毒力最高，其EC50為9.870mg/L；其次為嘧菌環(huán)胺，其EC50為14.28mg/L；溴菌腈效果較差，其EC50為43.34mg/L。因此以下實(shí)驗(yàn)選用吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺進(jìn)行復(fù)配。

2.3混劑對根腐病菌菌絲生長抑制作用測定結(jié)果

從表1可以得知，吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺對蘭花根腐病的EC50分別為9.870mg/L和14.28mg/L。將吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺分別按1∶1、2∶1、1∶2的體積比進(jìn)行復(fù)配，并分別設(shè)吡唑醚菌酯、嘧菌環(huán)胺和空白作為對照，設(shè)置3次重復(fù)。測定吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺混劑對蘭花根腐病的毒力回歸，并計(jì)算EC50增效系數(shù)，結(jié)果如表2所示：

表2　吡唑醚菌酯與嘧菌環(huán)胺復(fù)配對蘭花根腐病室內(nèi)毒力測定結(jié)果

由表2可知，當(dāng)吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺按一定比例混配后表現(xiàn)出不同的作用，按1∶1和1∶2混配時(shí)均表現(xiàn)拮抗作用，按2∶1混配時(shí)，測得其增效系數(shù)SR=3.243，大于1.5，因此表現(xiàn)為增效作用。

4討論

目前蘭花已成為大眾的觀賞性花卉，并具有極高的商品價(jià)值和藥用價(jià)值。對于蘭花真菌病害,國內(nèi)外均有報(bào)道。斯垂德教授[23]主編的《花卉作物病害》記述了36種真菌病害；庇隆[24]的《花木病蟲害》也記述了一些蘭花真菌病害；劉仲健[2]主編的《中國蘭花觀賞與培育及病蟲害防治》記述了32種真菌病害；劉翔[25]鑒定了臺灣地區(qū)蘭花的5種真菌病害；吳應(yīng)祥[26]鑒定了國內(nèi)蘭花發(fā)生的5種真菌病害；陳述富等[1]鑒定了4種真菌病害，在這些真菌病害中尤以蘭花根腐病對蘭花品質(zhì)和質(zhì)量危害最大。在蘭花根腐病的防治中主要以化學(xué)防治為主，因此有必要研究出新型的、有效的單劑或復(fù)配藥劑來防治蘭花根腐病，以提高蘭花的觀賞價(jià)值和商品價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)采用抑制菌絲生長速率法測定水楊菌胺、溴菌腈、吡唑醚菌酯、氟啶胺、大蒜素、乙蒜素、嘧菌環(huán)胺7種藥劑對蘭花根腐病菌的生物活性，從中篩選出2種抑制效果較好的藥劑進(jìn)行一定比例復(fù)配，測定聯(lián)合毒力。測得結(jié)果為吡唑嘧菌酯和嘧菌環(huán)胺對蘭花根腐病的EC50值分別為9.870mg/L、14.28mg/L。嘧菌環(huán)胺的毒力小于吡唑醚菌酯，將兩者按比例為1∶1、2∶1、1∶2的配比進(jìn)行混配，其中以2∶1的比例混配抑菌效果最好為78.6%，對蘭花根腐病的增效系數(shù)為3.243，具有明顯增效作用。研究結(jié)果為生產(chǎn)中農(nóng)藥復(fù)配或混用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

雖然藥劑能有效地防治蘭花根腐病菌，但其作用機(jī)制還需要進(jìn)一步加強(qiáng)研究，為抗病育種和高效低毒農(nóng)藥的篩選提供理論依據(jù)，從而提高農(nóng)產(chǎn)品的安全性。本實(shí)驗(yàn)所用藥劑較少，不能代表所有藥劑，因此有待于以后用更多的藥劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?？梢园押Y選出的復(fù)配藥劑做成適于各種環(huán)境的不同劑型，使其藥效得到更好地發(fā)揮，更有利于蘭花根腐病的防治。

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收稿日期：2016-4-4

作者簡介：楊文(1968-)，女，現(xiàn)任四川省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心副主任，高級農(nóng)藝師。主要從事植物保護(hù)及農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作。1131181225@qq.com。