翟麗慧　朱 靜　王海濱（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，北京 100048）

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產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶及碳青霉烯酶的腸桿菌科細菌檢測及耐藥性分析

翟麗慧朱 靜王海濱
（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，北京 100048）

【摘要】目的：了解腸桿菌科細菌中產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）及碳青霉烯酶菌株的檢出率，通過藥物敏感試驗分析常見腸桿菌科細菌的耐藥情況。方法：用ESBLs表型確證試驗檢測腸桿菌科細菌產(chǎn)ESBLs的情況，用改良Hodge試驗檢測細菌產(chǎn)碳青霉烯酶的情況。比較產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs菌株對抗生素的耐藥率。結(jié)果：2014年1—12月我院微生物室分離的889株大腸桿菌中產(chǎn)ESBLs 486株，陽性率54.7%；521株肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs 162株，陽性率31.1%。產(chǎn)ESBLs的大腸桿菌對氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素的耐藥率高達90%以上，對氨曲南的耐藥率為68.3%；產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素的耐藥率達86%以上，氨曲南的耐藥率為55.6%。147株耐碳青霉烯類抗生素腸桿菌科菌株產(chǎn)碳青霉烯酶132株，陽性率為89.8%，其中104株（78.8%）為肺炎克雷伯菌。結(jié)論：產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶是我院常見腸桿菌科細菌耐藥原因之一，在常規(guī)病原學檢測工作中應加強產(chǎn)酶菌株的檢測，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞超廣譜β內(nèi)酰胺酶碳青霉烯酶耐藥腸肝菌科

由于β內(nèi)酰胺類抗生素的廣泛應用，耐藥菌株越來越多，使臨床治療變得棘手。超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的產(chǎn)生導致細菌對第三代頭孢菌素和氨曲南等抗生素耐藥。質(zhì)粒介導的碳青霉烯酶使腸桿菌科細菌對碳青酶烯類抗生素耐藥情況日趨嚴重。本研究通過對2014年1—12月我院細菌室分離出的腸桿菌科細菌產(chǎn)酶情況及耐藥率進行分析，以期更好地指導臨床合理用藥。

1　材料與方法

1.1材 料

1.1.1菌株 腸桿菌科細菌（排除同一患者多個標本）共1 441株，其中大腸埃希菌889株、肺炎克雷伯菌521株、陰溝腸桿菌6株、黏質(zhì)沙雷菌25株。

1.1.2試劑及儀器 哥倫比亞血平板、中國藍培養(yǎng)基、MH培養(yǎng)基 （Oxoid）；E-test條（生物梅里埃）；MEM紙片（Oxoid）。藥敏卡：VITEK 2。儀器：VITEK 2-Compact。

1.2方 法

1.2.1ESBL表型確證實驗檢測ESBLsVITEK 2 AST-GN13_compact2配0.5麥氏濁度的菌懸液，VITEK 2 AST-GN13卡檢測。

1.2.2改良hodge試驗檢測碳青霉烯酶用生理鹽水配制0.5麥氏標準的對碳青酶烯類抗生素敏感的大腸埃希菌菌懸液，1∶10稀釋后均勻涂布MH平板，貼美羅培南紙片于平板中央，挑取耐藥菌株沿紙片邊緣向外劃直線，37 ℃孵育，24 h觀察結(jié)果。抑菌圈與試驗菌株交叉處有增強增長現(xiàn)象即為陽性結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學處理所有數(shù)據(jù)均采用Whonet 5.6軟件進行統(tǒng)計學分析。

2　結(jié) 果

2.1大腸桿菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs陽性率889株大腸埃希菌中產(chǎn)ESBLs 486株，陽性率54.7%；521株肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs 162株，陽性率31.1%。

2.2產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥情況對比產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對氨芐西林、第一代頭孢菌素頭孢唑啉、第三代頭孢菌素頭孢曲松和氨曲南以及慶大霉素的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌和非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌。見表1、表2。2.3碳青霉烯類抗生素耐藥率1 441株腸桿菌科細菌對厄他培南耐藥率12.9%，對亞胺培南耐藥率10.9%，對美羅培南耐藥率4.6% 。

表1 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌與非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對不同抗生素的耐藥率（%）

表2 產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌和非產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌耐藥率（%）

2.4耐碳青酶烯類抗生素常見腸桿菌科菌株產(chǎn)碳青酶烯酶陽性率147株耐碳青酶烯類抗生素腸桿菌科細菌產(chǎn)碳青霉烯酶陽性菌株132株，陽性率為89.8%,132株產(chǎn)碳青霉烯酶陽性菌中有104株（78.8%）為肺炎克雷伯菌。

3　討 論

ESBLs是細菌質(zhì)粒中TEM-1、TEM-2、SHV-1等位點基因發(fā)生突變而形成的新酶蛋白，通常替換的氨基酸有1~4個，它是質(zhì)粒上編碼ESBLs的耐藥表達，能使含氧亞氨基側(cè)鏈的第三代頭孢菌素和單環(huán)β內(nèi)酰胺類抗菌藥物失活[1-2]。ESBLs主要由腸桿菌科細菌產(chǎn)生，以肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌常見，產(chǎn)ESBLs菌株不僅對某些第三代頭孢菌素和氨曲南耐藥，而且對氨基糖苷類、喹諾酮類抗生素呈交叉耐藥[3]。ESBLs由質(zhì)粒介導，可以通過接合、轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)化等形式使耐藥基因在細菌中擴散[4]，因此準確檢測產(chǎn)ESBLs細菌、正確使用抗生素有助于控制耐藥菌的廣泛播散與暴發(fā)流行。

我院臨床分離的腸桿菌科細菌有大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、黏質(zhì)沙雷菌等，以大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌最為常見。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs陽性率較高，分別達到54.7%和31.1%。產(chǎn)ESBLs的菌株對氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素和氨曲南的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBL菌株。

碳青霉烯酶由質(zhì)粒介導，能夠水解碳青霉烯類、青霉素類、頭孢菌素類和氨曲南等多種抗生素[5]。本組資料顯示碳青霉烯類抗生素耐藥菌株89.8%產(chǎn)碳青霉烯酶，其中肺炎克雷伯菌產(chǎn)碳青霉烯酶陽性檢出率最高。

綜上所述，產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶是我院常見腸桿菌科細菌耐藥的原因之一。兩種耐藥機制如果同時存在，會使臨床治療更為棘手。非產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率較產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌高，推測可能存在其他耐藥機制。碳青霉烯類抗生素耐藥菌株除產(chǎn)碳青霉烯酶還可產(chǎn)其他類酶，如頭孢菌素酶等[6-7]。臨床治療中可根據(jù)細菌的耐藥性分析選擇敏感抗生素，并在長期使用抗生素的過程中及時檢測耐藥性以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

參考文獻

［1］方平，潘曉龍，周東升，吳東生，吳祥林.產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶和高產(chǎn)Ampc酶革蘭陰性桿菌耐藥性檢測 [J]. 中國抗感染化療雜志2005,5(5)：270-274.

［2］袁海燕. 肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBL和AmpC酶的檢測及耐藥性分析 [J] .西部醫(yī)學2010，,2（3）：542-543.

［3］李霞，邢志廣，王明永.尿路感染大腸埃希菌的分離鑒定及抗菌藥物選擇 [J] .現(xiàn)代預防醫(yī)學2011,38(8):1518-1519.

［4］孫紅，喬艷，郭普，李峰，沈繼龍.肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBL的檢測及耐藥性分析 [J] .中華全科醫(yī)學,2011,9(5)：797-798.

［5］魏麗華，余蘭.腸桿菌科細菌產(chǎn)碳氫霉烯酶研究進展[J].醫(yī)學信息2011，24（3）：1464-1466.

［6］曹紅，姚冬梅，田國東.某醫(yī)院產(chǎn)碳氫霉烯酶細菌的檢測與流行狀況分析 [J].實用預防醫(yī)學2011,18(3)：520-522.

［7］葉智穎，呂火祥，胡慶豐，魏取好，沈蓓瓊.耐碳青霉烯類抗生素的肺炎克雷伯菌KPC酶檢測分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志2011,21(2)：454-455.

Detection and drug resistance analysis of the enterobacteriaceae bacteria producing extended spectrum β-lactamase and carbapenemase

Zhai Lihui, Zhu Jing, Wang Haibin. Clinical Laboratory, First Hospital Affiliated to the Chinese PLA General Hospital, Beijing 100048, China
Corresponding author: Wang Haibin(E-mail: 1197131586@qq.com)

AbstractObjective: To detect the bacterial strains producing extended spectrum β-lactamase (ESBLs) and carbapenemase, and analyze the resistance of the strains by drug sensitivity test. Methods: Confirmatory tests with ESBL phenotype was performed to confirm the ESBLs production, and modified Hodge test was executed to detect the carbapenemase products of bacteria. Results: From January to December 2014, a total of 889 strains of Escherichia coli were isolated in the First Affiliated Hospital of the Chinese PLA General Hospital, of which 486 strains produced ESBLs, the positive rate was 54.7%; while 162 of 521 strains of Klebsiella pneumoniae (31.1%) produced ESBLs. The resistant rate of E. coli prouducing ESBLs was as high as more than 90% to the third generation cephalosporins as like ampicillin and ceftriaxone, and was 68.3% to aztreonam. The resistant rate of Klebsiella pneumoniae prouducing ESBLs was as high as more than 86% to the third generation cephalosporins as like ampicillin and ceftriaxone, and was 55.6% to aztreonam. In 147 strains of Enterobacteriaceae bacteria resisting to the antibiotic of carbapenemase, 132 strains proudced carbapenemase, the positive rate was 89.8%, among them 104 strains(78.8%) were klebsiella pneumoniae. Conclusions: Production of ESBLs and carbapenemase was the major mechanism making the Enterobacteriaceae bacteria form resistance. So the detection of enzyme producing strain should be emphasized in the conventional pathogenic detection to provide the basis for rationally clinical drug use.

Key words:Extended spectrum β-lactamase;Carbapenemase;Drug resistance;Enterobacteriaceae

DOI:10. 3969/j. issn. 1672-8521. 2016. 01. 007

通訊作者：王海濱，副主任技師（E-mail: 1197131586@qq.com）

收稿日期：（2015-06-25）