楊榮明，劉立湘，鐘以文，張靈秀，田麗娟，羅 丹，宋培源

(1.上猶縣婦幼保健院a.皮膚科； b.內兒科； c.檢驗科； d.婦產(chǎn)科，江西 上猶 341200； 2.南昌大學基礎醫(yī)學院實驗中心，南昌 330046)

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90例尋常型兒童白癜風患者免疫相關指標檢測分析

楊榮明1a，劉立湘1b，鐘以文1c，張靈秀1d，田麗娟1c，羅 丹2，宋培源2

(1.上猶縣婦幼保健院a.皮膚科； b.內兒科； c.檢驗科； d.婦產(chǎn)科，江西 上猶 341200； 2.南昌大學基礎醫(yī)學院實驗中心，南昌 330046)

目的 了解尋常型兒童白癜風患者不同分期、不同病程及不同皮損面積的免疫功能狀態(tài)。方法 對90例尋常型兒童白癜風患者(進展期組52例、穩(wěn)定期38例)，分別采用流式細胞儀對外周血CD3+、CD4+和CD8+細胞進行定量分析，免疫透射比濁法檢測血清IgG、IgA、IgM和補體C3、C4，雙抗體夾心ELISA法檢測血漿IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平，同時以30例健康兒童(正常對照組)作對照。結果 進展期組外周血CD3+細胞、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于正常對照組，CD8+細胞高于正常對照組(均P<0.01)。進展期組IgG、IgM較正常對照組明顯增加，C3、C4明顯減少(P<0.01)；尋常型兒童白癜風患者皮損面積越大，IgG、IgA、IgM升高越明顯，C3、C4水平降低越明顯(P<0.01)。進展期組血清IL-2水平低于正常對照組，IL-6、IL-8、IL-18高于正常對照組(均P<0.01)，穩(wěn)定期組血清IL-6與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；病程在1年以內與1年以上的患者外周血T淋巴細胞亞群和血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；血清IL-2水平隨皮損面積增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平隨皮損面積增加而升高(P<0.05或P<0.01)。結論 尋常型兒童白癜風患者存在細胞免疫缺陷，體液免疫功能亢進，自身免疫和細胞因子共同參與了尋常型兒童白癜風的發(fā)生和進展。

兒童白癜風； 尋常型； T細胞亞群； 免疫球蛋白； 補體； 細胞因子

白癜風(vitiligo)是一種常見的色素脫失性皮膚黏膜疾病，臨床易診難治，其病因和發(fā)病機制目前尚不十分清楚。近年來，兒童白癜風的發(fā)病呈上升趨勢，但其與免疫機制的關系不明。為了解不同分期、不同病程及不同皮損面積尋常型兒童白癜風患者的免疫功能狀態(tài)，本研究對90例尋常型兒童白癜風患者外周血T淋巴細胞亞群、免疫球蛋白、補體及相關細胞因子進行檢測，并與30例健康兒童作對照，結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2013年6月至2015年7月上猶縣婦幼保健院門診確診的尋常型兒童白癜風患者90例，其中男57例，女33例，年齡5～15歲，平均9.9歲；病程2個月～8年，平均1.82年。入選患者均除外其他自身免疫性疾病，肝腎功能正常，且檢測前1個月內未接受任何治療。另選取同期在本院體檢的健康兒童30例作為正常對照組，其中男16例，女14例，年齡6～15歲，平均10.6歲。2組在性別及年齡組成上差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例分組

90例患者參照《白癜風臨床分型及療效標準》[1]，分為進展期組(52例)和穩(wěn)定期組(38例)。按患者每一手掌面積占體表面積1%計算，分為<1%(52例)、1%～5%(30例)、>5%(8例)3組。病程以1年為界分為病程≤1年(58例)和病程>1年(32例)2組。

1.3 標本采集

所有研究對象均于清晨空腹抽取外周靜脈血3 mL，3500 r·min-1離心1 min，收集上清液，置-80 ℃保存，24 h內送南昌華星醫(yī)學檢驗中心檢測。

1.4 外周血T淋巴細胞亞群檢測

采用美國BDFACSCAL流式細胞儀對外周血CD3+、CD4+、CD8+細胞進行定量分析。

1.5 血清免疫球蛋白以及補體的測定

采用免疫透射比濁法測定血清IgG、IgA、IgM以及補體C3、C4，儀器為美國貝克曼IMMAGE800全自動生化分析儀，試劑盒由南昌普健公司提供。操作按說明書進行。

1.6 血清相關細胞因子的測定

采用雙抗體夾心ELISA法測定血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18，試劑盒由北京邦定生物技術有限公司提供，操作按說明書進行。

1.7 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 不同分期尋常型兒童白癜風患者與正常對照組外周血T淋巴細胞亞群表達比較

進展期組外周血CD3+細胞、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于正常對照組，CD8+細胞高于正常對照組(均P<0.01)；穩(wěn)定期組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

組別nCD3+/%CD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+正常對照組3068.28±1.4239.05±1.0225.57±0.491.53±0.068進展期組5263.26±1.82*35.84±0.87*28.34±0.99*1.26±0.038*穩(wěn)定期組3867.58±1.5038.47±1.6425.71±0.831.50±0.062

*P<0.01與正常對照組比較。

2.2 不同病程尋常型兒童白癜風患者外周血T淋巴細胞亞群表達比較

病程在1年以內與1年以上的兒童白癜風患者外周血CD3+、CD4+、CD8+細胞以及CD4+/CD8+比值比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

病程nCD3+/%CD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+病程≤1年5865.25±2.6536.99±1.7427.00±1.521.37±0.120病程>1年3264.79±2.8736.89±1.9527.65±1.671.34±0.135

2.3 不同分期尋常型兒童白癜風患者與正常對照組外周血免疫球蛋白及補體水平比較

進展期組IgG、IgM較正常對照組明顯增加，補體C3、C4明顯減少(P<0.01)，穩(wěn)定期組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，進展期組和穩(wěn)定期組IgA與正常對照組比較均差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同分期兒童白癜風患者與正常對照組外周血免疫球蛋白及補體水平比較

組別nIgGIgAIgMC3C4正常對照組3010.37±1.611.52±0.451.24±0.231.13±0.150.31±0.024進展期組5215.59±1.79*1.68±0.201.92±0.23*0.79±0.18*0.28±0.040*穩(wěn)定期組3811.13±1.851.64±0.291.34±0.191.08±0.150.30±0.026

*P<0.01與正常對照組比較。

2.4 不同皮損面積尋常型兒童白癜風患者外周血免疫球蛋白及補體水平比較

兒童白癜風患者外周血IgG、IgA、IgM水平隨皮損面積增加而增高，補體C3、C4水平隨皮損面積增加而下降。各檢測指標在3組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表4。

表4 不同皮損面積兒童白癜風患者外周血免疫球蛋白補體水平比較

皮損面積nIgGIgAIgMC3C4<1%5211.83±2.011.55±0.211.45±0.251.07±0.1420.31±0.0191%^5%3015.87±1.25*1.75±0.161.92±0.18*0.74±0.102*0.26±0.020*>5%817.83±1.55*#2.03±0.15*#2.24±0.24*#0.58±0.086*#0.22±0.015*#

*P<0.01與<1%比較，#P<0.01與1%～5%比較。

2.5 不同分期尋常型兒童白癜風患者與正常對照組血清相關細胞因子水平比較

進展期組血清IL-2水平低于正常對照組，血清IL-6、IL-8、IL-18水平高于正常對照組(均P<0.01)；穩(wěn)定期組血清IL-6與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，其他指標間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

組別nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)正常對照組304.14±0.5097.78±5.230.302±0.0190.26±0.035進展期租521.75±0.33*146.69±17.60*0.545±0.085*0.39±0.057*穩(wěn)定期組384.04±0.84103.84±7.80*0.310±0.0160.28±0.032

*P<0.01與正常對照組比較。

2.6 不同病程尋常型兒童白癜風患者血清相關細胞因子水平比較

病程在1年以內與1年以上的兒童白癜風患者血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表6。

病程nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)病程≤1年582.89±1.32125.97±25.760.433±0.1360.34±0.078病程>1年322.40±1.18133.36±25.030.471±0.1270.35±0.067

2.7 不同皮損面積尋常型兒童白癜風患者血清相關細胞因子水平

血清IL-2水平隨皮損面積增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平隨皮損面積增加而升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)，見表7。

皮損面積nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)<1%523.42±1.21111.44±15.320.360±0.0800.29±0.0411%^5%301.82±0.55*149.25±15.21*0.556±0.095*0.41±0.039*>5%81.56±0.62*162.63±18.18*#0.598±0.104*0.45±0.051*##

*P<0.01與<1%比較，#P<0.05與1%～5%比較，##P<0.01與1%～5%比較。

3 討論

白癜風是一種常見的后天性色素脫失性皮膚黏膜疾病，可發(fā)于任何年齡段，但以10～30歲居多，占總數(shù)的62.65%，其病因及發(fā)病機制目前有黑素細胞自毀學說、遺傳學說、自身免疫學說、神經(jīng)化學因子學說、微量元素相對缺乏說等，也可能多種因素互為因果[2]，其中免疫機制失衡導致的免疫炎性損傷是其主要的發(fā)病機制之一[3]。

T淋巴細胞是機體的主要免疫效應細胞，是皮膚免疫的主要參與者。當T細胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時，可導致機體免疫功能的紊亂[4]。本研究結果顯示尋常型進展期兒童白癜風患者CD3+、CD4+細胞、CD4+/CD8+比值顯著下降，CD8+細胞升高，但與病程無明顯關系，提示尋常型進展期兒童白癜風患者存在細胞免疫功能低下。當T細胞受到抗原刺激而激活，進一步刺激CD4+不斷分泌減少，而具有細胞毒性作用的CD8+細胞不斷增殖，造成對黑素細胞的損傷和破壞，從而誘發(fā)白癜風。

免疫球蛋白最基本的特征是能與相應的抗原結合，活化補體，促進吞噬、溶解等作用[5]。有研究[6]報道白癜風患者血清免疫球蛋白均低于健康人群，認為免疫球蛋白異常與血中免疫調節(jié)性T細胞的不平衡和不成熟B淋巴細胞的增多有關。本研究采用免疫透射比濁法對90例尋常型兒童白癜風患者及30例正常對照組血清IgG、IgA、IgM及補體C3、C4水平進行檢測，結果表明2組IgA與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，進展期組IgG、IgM較正常對照組明顯增加，穩(wěn)定期組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明尋常型兒童白癜風患者血清內存在抗黑素細胞IgG、IgM抗體，并且其抗體滴度與疾病的活動性和皮損范圍有明顯關系，這些抗體與相應的抗原結合，通過免疫復合物產(chǎn)生補體，與抗體聯(lián)合介導的細胞毒作用破壞黑素細胞。尋常型兒童白癜風患者補體C3、C4下降,尤以進展期明顯，考慮與補體生成缺陷及過度消耗，以致循環(huán)免疫復合物不能有效消除有關。提示尋常型兒童白癜風患者存在體液免疫功能亢進，體液免疫介導了白癜風的發(fā)病與進展。

IL-2是由輔助性T淋巴細胞產(chǎn)生的一種重要免疫調節(jié)因子，具有促進T細胞增殖、誘生LAK細胞、促進B細胞產(chǎn)生抗體、促進T細胞殺傷作用及增強NK細胞活性等作用[7]。有研究[8-9]報道，血清IL-2水平在許多自身免疫性疾病和血液病、腫瘤患者中均明顯低下。本研究結果表明，尋常型進展期兒童白癜風患者血清IL-2水平顯著低于正常對照組(P<0.01)，提示患者細胞免疫功能受抑制。

IL-6是一種來源于單核巨噬細胞及淋巴細胞的多功能細胞因子，能調節(jié)多種細胞功能，包括細胞增殖、細胞分化、免疫防御機制及血細胞生成等，與自身免疫性疾病的發(fā)生密切相關[10]。IL-6能抑制黑素細胞的增殖和黑素生成，能增進黑素細胞表面ICAM-1等的表達，誘導多克隆B淋巴細胞活化，促進自身抗體產(chǎn)生，引起黑素細胞損傷[11]。本研究結果表明，尋常型兒童白癜風患者血清IL-6水平顯著高于正常對照組(P<0.01)，提示IL-6在尋常型兒童白癜風發(fā)病中發(fā)揮了重要的作用。

IL-8主要來源于單核巨噬細胞，它對T淋巴細胞、中性粒細胞有強烈的趨化和激活作用[12]。本研究結果顯示，尋常型進展期兒童白癜風患者血清IL-8水平顯著高于正常對照組(P<0.01)，提示其體內趨化機制存在異常，IL-8可能參與了白癜風的免疫機制。

IL-18主要來源于單核巨噬細胞，可刺激Th1細胞產(chǎn)生IFN-γ，并增強自然殺傷細胞的細胞毒效應[10]。本研究結果顯示，尋常型進展期兒童白癜風患者血清IL-8水平顯著高于正常對照組(P<0.01)，推測血清IL-18通過刺激Th1細胞和NK細胞相關細胞因子的產(chǎn)生發(fā)揮細胞毒作用，破壞黑素細胞，進而誘發(fā)白癜風。

此外，本研究結果亦顯示，血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平與病程無明顯關系，血清IL-2水平隨皮損面積增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平隨皮損面積增加而升高。說明血清相關免疫因子水平在一定程度上反映白癜風病情的嚴重程度，聯(lián)合檢測這些指標可以作為白癜風病情的評估依據(jù)。

綜上所述，尋常型兒童白癜風患者存在細胞免疫功能低下，而體液免疫功能亢進，自身免疫和細胞因子在白癜風的發(fā)病和進展中發(fā)揮了重要的作用。從免疫學這一角度深入研究尋常型兒童白癜風的發(fā)病機制，尋找特異性的客觀指標，將有利于評估病情及判斷疾病的活動性，為臨床提供靶向治療帶來新思路、新方法。

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(責任編輯：鐘榮梅)

Detection and Analysis of Immune-Related Indexs in 90 Children with Vitiligo Vulgaris

YANG Rong-ming1a,LIU Li-xiang1b,ZHONG Yi-wen1c,ZHANG Ling-xiu1d,TIAN Li-juan1c,LUO Dan2,SONG Pei-yuan2

(1a.Department of Dermatology； 1b.Department of Internal Pediatrics； 1c.Department of Laboratory； 1d.Department of Gynaecology and Obstetrics，Shangyou County Maternal and Child Health Hospital，Shangyou 341200，China； 2.Experiment Center,College of Basic Medical Sciences，Nanchang University，Nanchang 330046,China)

Objective To understand the state of immune function in different stages,courses and lesion areas of vitiligo vulgaris in children.Methods Fifty-two children with progressive vitiligo vulgaris,38 children with stable vitiligo vulgaris and 30 healthy children were selected as progressive group,stable group and control group,respectively.The levels of CD3+,CD4+and CD8+cells in peripheral blood were measured by flow cytometry.Serum levels of immunoglobulin(IgG,IgA,IgM) and complement (C3,C4) were measured by immune transmission turbidimetry.Plasma levels of IL-2,IL-6,IL-8 and IL-18 were measured by double antibody sandwich ELISA.Results Compared with control group,the number of CD3+cells and CD4+cells,CD4+/CD8+ratio and levels of C3,C4 and IL-2 decreased but the number of CD8+cells and levels of IgG,IgM,IL-6,IL-8 and IL-18 increased in progressive group(P<0.01).The increased lesion areas were associated with the elevated levels of IgG,IgA,IgM,IL-6,IL-8 and IL-18 and the reduced levels of C3,C4 and IL-2(P<0.05 orP<0.01).The difference was significant in serum IL-6 level between stable group and control group(P<0.01).However,there were no significant differences in peripheral blood T-lymphocyte subpopulations and serum IL-2,IL-6,IL-8 and IL-18 levels between children with disease course shorter than 1 year and children with disease course longer than 1 year(P>0.05).Conclusion Children with vitiligo vulgaris have cellular immunodeficiency and humoral immune hyperfunction.Both autoimmunity and cytokines are involved in the occurrence and development of vitiligo vulgaris in children.

childhood vitiligo; vulgaris; T-lymphocyte subpopulation; immunoglobulin; complement; cytokines

2016-01-19

江西省衛(wèi)生廳科技計劃項目(20142078)

楊榮明(1973—)，男，學士，主治醫(yī)師，主要從事皮膚性病學的研究。

R758.4+1

A

1009-8194(2016)04-0044-05

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.04.020