劉引霞，鄒　莎，李志芳，梁愛芬

(廣東省東莞市康華醫(yī)院　523000)

·臨床研究·

東莞市不孕不育患者細(xì)胞遺傳學(xué)分析

劉引霞，鄒莎，李志芳，梁愛芬

(廣東省東莞市康華醫(yī)院523000)

目的探討東莞地區(qū)染色體異常與不孕不育的關(guān)系。方法對(duì)該院625例不孕不育患者進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)分析，采集外周血，按照常規(guī)方法制備染色體標(biāo)本。G顯帶，進(jìn)行眾數(shù)分析及核型分析。結(jié)果共檢出異常核型11例，染色體異常發(fā)生率為1.76%，多態(tài)型36例，占總數(shù)的5.76%。結(jié)論染色體異常可導(dǎo)致不孕不育，提示不孕不育與遺傳因素密切相關(guān)。

不孕不育；染色體異常；細(xì)胞遺傳學(xué)

近年來(lái)由于環(huán)境污染、食品安全、社會(huì)壓力等諸多因素影響，不孕不育的患病率呈上升趨勢(shì)。女性不孕病因主要有器質(zhì)性病變(如輸卵管阻塞、盆腔炎、陰道炎等)、排卵障礙(如多囊卵巢綜合征、高泌乳素、卵巢早衰等)；男性不育病因主要以精子少、弱、畸形等情況多見。本研究主要討論遺傳因素對(duì)不孕不育造成的影響。

1資料與方法

1.1一般資料2014年8月至2015年2月因不孕不育來(lái)本院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的患者共625例，其中男353例，女272例，年齡20～45歲，主要臨床表現(xiàn)為不孕不育、不良妊娠史(反復(fù)自然流產(chǎn)、畸胎、胚胎停育)、閉經(jīng)，小睪丸綜合征、封閉抗體、精液質(zhì)量異常(弱畸形精子癥)等。

1.2方法無(wú)菌條件下，抽取患者外周血10 mL，肝素抗凝，常規(guī)進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)68 h，收獲前2.5 h加入20 μg/L的秋水仙素2滴，使細(xì)胞停滯在分裂中期，再經(jīng)過低滲、固定等處理后，制備染色體并G顯帶。計(jì)數(shù)20個(gè)中期分裂相，分析3個(gè)核型。嵌合病例，計(jì)數(shù)分析50個(gè)中期分裂相，并計(jì)算比例。剩余懸液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Excel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2結(jié)果

異常核型結(jié)果11例，占總數(shù)的1.76%，多態(tài)型36例，占總數(shù)的5.76%。平衡易位7例，性染色體異常2例，1例為月經(jīng)周期正常的女性不孕患者，1例為男性不育患者；其余2例異常為缺失和不明附加片段。見表1。

表1　不孕不育患者異常核型結(jié)果

續(xù)表1　不孕不育患者異常核型結(jié)果

3討論

X染色體是女性性器官發(fā)育的性染色體，X染色體異常與不孕、不育有直接關(guān)系。X染色體畸變?nèi)旧w綜合征中Turner綜合征、Klinefelter綜合征、超X綜合征等都涉及X染色體的異常。女性性染色體異常，常見于Turner綜合征，又稱先天性卵巢發(fā)育不全綜合征。其染色體核型包括X單體、嵌合體、等臂X、X 缺失等。這類患者典型臨床表現(xiàn)為身材矮小，原發(fā)閉經(jīng)，不孕，B 超顯示幼稚子宮，卵巢發(fā)育不良。45，X 是Turner綜合征最常見的核型，約占全部患者的30%～55%[1]。因來(lái)本院檢查不孕不育的患者，全部都成年，臨床沒有典型的表型。所以，檢查出來(lái)與不孕不育有關(guān)的X染色體異常的患者表型正常，有月經(jīng)，性腺發(fā)育正常，只是長(zhǎng)年不孕不育。檢查出1例患者X染色體短臂缺失的核型占多數(shù),Xp短臂遠(yuǎn)端含SHOX基因的小片段缺失而XP22.3區(qū)帶仍然存在，常表現(xiàn)為矮身材和其他相關(guān)的骨骼畸形，但無(wú)卵巢衰竭表現(xiàn)，因此Tunner綜合征的特征不明顯。但因?yàn)樵摶颊呤钦麄€(gè)短臂的缺失，不存在XP22.3區(qū)帶的存在，在現(xiàn)階段也只是表現(xiàn)出身材矮小，無(wú)癥狀癥狀的出現(xiàn)[2]，但如果由于X染色體長(zhǎng)臂是性腺發(fā)育關(guān)鍵區(qū)域，變異時(shí)容易引起性腺發(fā)育異常和生育能力降低[3]。

在不孕不育患者中最容易出現(xiàn)的是Y染色體DNA序列的重復(fù)復(fù)制、缺失導(dǎo)致Y染色質(zhì)區(qū)域的增長(zhǎng)和縮短，引起Y染色體長(zhǎng)度變異導(dǎo)致臨床通俗所稱的大Y和小Y。雖然在歸類時(shí)，將本院引起Y染色體長(zhǎng)度變異的大Y、小Y歸納到了多態(tài)性一欄，但是國(guó)內(nèi)大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道了不少大Y、小Y的患者也伴有無(wú)精少精癥狀的發(fā)生。主要是因?yàn)闊o(wú)精子癥因子(AZF)定位于Yq11.23區(qū)域上，它的缺失或突變可能造成精子生成障礙[4]。因?yàn)榧?xì)胞遺傳學(xué)G顯帶方法的局限性，對(duì)于小于20 Mb的片段在顯微鏡觀察中很難分辨，所以對(duì)于一些無(wú)精及少精的患者建議臨床同時(shí)行基因芯片技術(shù)檢測(cè)微缺失、微重復(fù)?；蛘咴诤诵吞崾敬骙、小Y的基礎(chǔ)上，利用多重PCR方法對(duì)Y染色體上25個(gè)STS位點(diǎn)擴(kuò)增進(jìn)行確認(rèn)，提高檢出率。Y染色體易位或倒位的改變?nèi)旧w在減數(shù)分裂時(shí)形成倒位環(huán)，分離后的兩種不平衡配子與正常配子結(jié)合后，造成遺傳物質(zhì)不平衡，出現(xiàn)缺失或重復(fù)，從而導(dǎo)致流產(chǎn)或不育的發(fā)生[5]。

染色體平衡易位是不孕不育患者中最多見的一個(gè)原因，平衡易位因?yàn)闆]有遺傳物質(zhì)的丟失，所以個(gè)體表型正常，但可以遺傳。兩夫妻表型正常，不管是男方或者女方，只要一方出現(xiàn)平衡易位，就很容易導(dǎo)致女方在懷孕早期反復(fù)流產(chǎn)。平衡易位患者的胎兒在減數(shù)分裂中可產(chǎn)生正常和各種不平衡重排的配子，當(dāng)與正常配子結(jié)合形成正常、平衡易位、部分三體、部分單體4種類型的合子，后3 種合子由于基因量的嚴(yán)重失衡，可導(dǎo)致不育、反復(fù)流產(chǎn)、死胎或生育染色體異常后代[6]。在臨床實(shí)踐中還發(fā)現(xiàn),部分染色體平衡易位個(gè)體也有表型的異常表現(xiàn)。對(duì)于這一類的患者，現(xiàn)在臨床一般對(duì)其采取在輔助生殖技術(shù)并行胚胎植入前遺傳學(xué)診斷PGD技術(shù)，在胚胎培植期通過遺傳檢測(cè)技術(shù)選擇正常的或沒有發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的胚胎，植入孕婦體內(nèi)，避免孕育有家族遺傳疾病的胎兒，減少反復(fù)流產(chǎn)的發(fā)生。

隨體增長(zhǎng)：13、14、15、21、22號(hào)染色體是近端著絲粒染色體。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為隨體增長(zhǎng)，對(duì)于不孕不育的結(jié)果沒有必然聯(lián)系。但也有學(xué)者認(rèn)為這些染色體是隨體增長(zhǎng)還是短臂增長(zhǎng)，單純的隨體柄或隨體增長(zhǎng)，沒有含有基因的多或少的區(qū)別，不會(huì)對(duì)生育功能產(chǎn)生影響；如果是短臂增長(zhǎng)，引起部分的rRNA高度重復(fù)，可能使染色體不分離，形成了染色體異常的配子或合子，最終導(dǎo)致流產(chǎn)、不孕或生育畸形兒。提到的高度重復(fù)是指短臂，有基因編碼的，會(huì)有重復(fù)或者其他片段插入的可能，患者最好進(jìn)行基因芯片檢查。

次縊痕變異：次縊痕主要存在于第1、9 和16號(hào)染色體及Y染色體的長(zhǎng)臂異染色質(zhì)區(qū)，Y染色體次縊痕變異已經(jīng)討論過，不做贅述。對(duì)于常染色體的次縊痕變異，主要考慮異染色質(zhì)區(qū)有沒有高度重復(fù)或缺失的DNA序列，即基因，有基因的重復(fù)或缺失就會(huì)影響細(xì)胞分裂，造成同源染色體配對(duì)困難，產(chǎn)生不平衡的配子，形成非整倍體的子代，發(fā)生流產(chǎn)或不平衡的配子不能受精而死亡，從而造成不孕不育，無(wú)基因的缺失和重復(fù)就是1種染色體多態(tài)性的變化。

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2016-01-21修回日期：2016-03-20)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.044

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1673-4130(2016)12-1701-02