易媛媛 其木格 王敏

·論著·

子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達及意義

易媛媛 其木格 王敏

目的 探討子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達及意義。方法 選取2011-11—2012-12于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩的晚期妊娠、單胎、患有子癇前期的孕婦60例，其中輕度子癇前期(輕度組)患者30例，重度子癇前期(重度組)患者30例，于同期隨機選取單胎正常晚期妊娠組20例為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定三組患者外周血、臍血中Chemerin水平。結果 與對照組比較，子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達均升高，其中外周血、臍血血清中重度組Chemerin的濃度最高，與對照組比較，P＜0.01，重度組與輕度組比較，P＜0.05。與空腹血糖的相關性研究中，外周血、臍血樣本中Chemerin與血糖無明顯相關性(P＞0.05)，而外周血、臍血樣本中Chemerin與血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈明顯正相關，P＜0.01。外周血血清中Chemerin的濃度與臍血血清中Chemerin的表達量相一致。結論 Chemerin在子癇前期患者外周血、臍血中高表達可能為診斷及治療子癇前期提供新思路。

子癇前期；趨化素；胰島素抵抗

子癇前期在臨床中又被稱為“先兆子癇”，是指懷孕期血壓正常，但孕20周之后，出現(xiàn)高血壓、蛋白尿以及水腫等為主要癥狀的一組臨床癥候群，大多數(shù)患者隨妊娠繼續(xù)病情加重，分娩后癥狀隨之減輕并逐漸消失，是妊娠期孕婦的常見疾病[1]。Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的與代謝綜合征相關的脂肪因子，參與調(diào)節(jié)胰島素抵抗及炎性反應[2]。由于子癇前期的發(fā)生、發(fā)展與血管內(nèi)皮的炎性反應密切相關，因此，本研究針對子癇前期患者血清中Chemerin的表達情況，探討其在子癇前期發(fā)生、發(fā)展中的可能機制，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011-11—2012-12于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩的晚期妊娠、單胎、患有子癇前期的孕婦60例。按照子癇前期嚴重程度分為輕度子癇前期患者(輕度組)30例，年齡22～38歲，平均(30.4±3.9)歲，孕周36.4～40.9周，平均(38.4±1.2)周；重度子癇前期患者(重度組)30例，年齡21～42歲，平均(31.4±5.3)歲，孕周32.0～40.3周，平均(36.6±2.7)周。選擇同期單胎正常晚期妊娠20例為對照組，年齡24～39歲，平均(29.2±3.5)歲，孕周37.0～40.7周，平均(39.1±1.1)周。三組年齡、孕周等一般資料差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。除空腹血糖指標外，子癇前期患者血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均高于對照組(P＜0.01)；重度組血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均高于輕度組(P＜0.01，表1)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器 ①microplate reader RT-2100c酶標儀(雷杜公司)。②RT-3000全自動洗板機(雷杜公司)。③ZHWY-100C型恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)。④80-1臺式電動離心機(金壇市杰瑞爾電器有限公司)。

表1 三組血壓、血糖、空腹胰島素定量指標等基線資料比較(±s)

表1 三組血壓、血糖、空腹胰島素定量指標等基線資料比較(±s)

注：1 mmHg＝0.133 kPa

參數(shù) 對照組 子癇前期 P值輕度組 重度組收縮壓(mmHg) 118.1±10.1 145.3±7.0 165.0±16.8 0.000 0舒張壓(mmHg) 74.8±7.6 92.0±8.1 111.5±11.9 0.000 0空腹血糖(mmol/L) 3.89±0.79 4.11±0.60 4.13±0.73 0.447 5空腹胰島素定量(μU/ml) 9.75±4.18 11.91±3.25 13.94±3.35 0.000 5胰島素抵抗指數(shù) 1.77±0.94 2.13±0.56 2.56±0.75 0.001 5

1.2.2 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。①自－80℃冰箱中取出血清4℃融化備用。冰箱中取出ELISA試劑盒，室溫平衡20 min。將所有液體充分搖勻備用。從鋁箔袋中取出微孔酶標板。每次加樣時間控制在5 min內(nèi)。②加樣：分別設置空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準品孔和樣本孔。標準品孔依次加入不同濃度標準品(標準品濃度依次為3、6、12、24、36 ng/mL)50 μL。在樣品孔中先加加待測樣品10 μL，再加樣品稀釋液40 μL(樣品稀釋5倍)。加樣時將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。③溫育：用封板膜封板后置于37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器中，振蕩混勻后溫育30 min。④配液：將30×洗滌緩沖液用蒸餾水1∶30稀釋后備用。⑤洗滌：小心揭掉封板膜，洗板機洗滌，每孔注入洗滌液350 μL，浸泡1 min，洗板5次。⑥加酶：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入酶標試劑50 μL。⑦溫育：同③。⑧洗滌：同⑤。⑨顯色：每孔先加顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B50 μL，封板膜封板，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色15 min。⑩終止：每孔加終止液50 μL終止反應，終止反應，此時藍色轉變?yōu)辄S色。測定：于加終止液后15 min內(nèi)，以空白孔調(diào)零，采用450 nm波長測定各孔OD值。計算：以標準物濃度為橫坐標，對應OD值為縱坐標，繪出標準品線性回歸曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 21.0軟件包對本組研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示，組間行t檢驗，多組均數(shù)的多重比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達 與對照組比較，子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達均升高，其中外周血、臍血血清中重度組Chemerin的濃度最高，與對照組比較，P＜0.01，重度組與輕度組比較，P＜0.05(表2)。

表2 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達(±s)

表2 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達(±s)

注：與對照組比較，#P＜0.01；重度組與輕度組比較，*P＜0.05

參數(shù) 對照組 子癇前期 P值輕度組 重度組外周血血清(ng/L) 7.41±1.44 10.87±1.73# 13.36±2.69*# 0.000臍血血清(ng/L) 7.92±2.44 10.54±1.85# 12.61±2.61*# 0.000

2.2 Chemerin與血壓、血糖、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)的相關性 與空腹血糖的相關性研究中，外周血、臍血樣本中Chemerin與血糖無明顯相關性(P＞0.05)，而外周血、臍血樣本中Chemerin與血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈明顯正相關，P＜0.01。外周血血清中Chemerin的濃度與臍血血清中Chemerin的表達量相一致(表3，圖1～2)。

表3 Chemerin與血壓、血糖、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)的相關性

圖1 外周血血清中Chemerin濃度與IR相關性的比較

圖2 臍血血清中Chemerin濃度與IR相關性的比較

3 討論

妊娠期高血壓是嚴重威脅母嬰健康，也是孕產(chǎn)婦和圍生兒觸發(fā)疾病與死亡的主要原因之一[3]。子癇前期患者除伴有血壓升高、蛋白尿等癥狀外，同時肥胖、炎癥反應、胰島素抵抗也是常見癥狀。這些表現(xiàn)均提示子癇前期患者產(chǎn)后遠期發(fā)生代謝性疾病及心腦血管疾病的風險大大增加[4]。研究結果表明[5]，胰島素抵抗、糖脂代謝異常等癥狀是子癇前期的重要致病因素，而脂肪組織在研究中被證明在孕前及孕期胰島素抵抗方面起了重要的調(diào)節(jié)作用。這說明妊娠期胰島素抵抗及代謝有脂肪細胞因子的參與調(diào)節(jié)。趨化素(Chemerin)是近期發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細胞因子，其廣泛在人體的多種組織存在與表達，該因子參與天然免疫和適應性免疫、炎癥反應、糖脂代謝及胰島素抵抗的調(diào)節(jié)。所以不斷有研究嘗試論證其與代謝綜合征、2型糖尿病、肥胖、妊娠期糖尿病及子癇前期之間的密切關系[6]。

本次研究結果顯示Chemerin與空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈正相關，與國外相關研究結果相一致[7]，這也表明Chemerin以能夠通過多種機制和途徑參與胰島素抵抗的發(fā)生與發(fā)展。Chemerin在3T3-L1細胞內(nèi)以自分泌、旁分泌的方式釋放，與鄰近的受體相結合，胰島素刺激信號增強引起葡萄糖攝取增多，與此同時使胰島素樣受體底物1(IRS-1)酪氨酸的磷酸化水平增強，以調(diào)節(jié)脂肪組織的胰島素敏感性。由此可見Chemerin能夠在脂肪細胞中發(fā)揮一定的作用使脂肪組織對胰島素的敏感性發(fā)生變化從而增加對葡萄糖的攝取[8]。

高胰島素血癥可導致血壓升高，由于機體NO合成能力下降且伴隨脂質(zhì)代謝紊亂，影響前列腺素E2的合成，最終使外周血管的阻力增加。胰島素抵抗(IR)引起子癇前期發(fā)病可能通過以下途徑[9-12]：隨著IR在妊娠期逐漸加重，細胞對糖代謝及糖的攝取在下丘腦的調(diào)解下不斷增加，此時腦干交感神經(jīng)中樞對這一現(xiàn)象的抑制作用不斷減弱，結果就是交感神經(jīng)興奮性增加，兒茶酚胺類物質(zhì)分泌、合成增多，最終血管收縮加強。受激素的影響，妊娠期機體都存在不同程度的胰島素抵抗(IR)，這種IR隨著孕齡的增加而加重[13-15]。同時發(fā)現(xiàn)正常妊娠婦女也存在著不同程度的IR，當患有子癇前期時，IR明顯升高，且重度患者升高更加明顯，此文結果證明胰島素抵抗程度與子癇前期病情程度正相關，結論與國內(nèi)外研究結果相一致[8]。

綜上所述，Chemerin在子癇前期患者外周血、臍血中高表達可能為診斷及治療子癇前期提供新思路。

[1]羅小東，董曉靜，周瑾，等.45例早發(fā)型子癇前期患者血清Chemerin、CRP的變化及意義[J].重慶醫(yī)學，2014，43(15)：1857-1859.

[2]肖玲，王心，尚麗新.脂肪細胞因子Chemerin在妊娠期高血壓疾病中的水平變化[J].中國婦幼保健，2012，27(32)：5165-5168.

[3]周愛華.硫酸鎂聯(lián)合拉貝洛爾治療妊娠期高血壓疾病臨床療效觀察[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2011，10(11)：840-841.

[4]呂敬媛，宮慶娟，陸瑤.Chemerin及NO在子癇前期患者血清中的相關性分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學，2014，37(4)：45-46.

[5]林小紅，牛建民，雷瓊，等.子癇前期與代謝的相關性研究[J].婦產(chǎn)與遺傳：電子版，2012，2(2)：16-20.

[6]Matthew CE，Mark L，Kerry BG，et al.Chemerin exac er-bates glucose intolerance in mouse modelsof obesity anddiabetes[J].Endocrinology，2010，151(5)：1998-2007.

[7]YamawakiH，KurarnotoJ，KameshimaS，etal.Omentina novel adipecytokine inhibits TNF-induced vascular inflammation in human endothelial cells[J].Biochem Biophys Res Commun，2011(408)：339-343．

[8]Steppan CM，Lazar MA.The current biology of resistin[J].J Intern Med，2004(255)：439-447.

[9]郭昌龍，于松，王啟迪，等.子癇前期患者外周血IGH-CDR3免疫組庫的變化[J].中國計劃生育學雜志，2016，24(3)：160-164.

[10]盛佳佳，劉雨生，吳莉，等.子癇前期患者外周血中Th17、Treg細胞變化及意義[J].臨床輸血與檢驗，2013，15(1)：7-10.

[11]夏良萍，蔡琴，張曉鳳.重度子癇前期患者外周血Th17和Treg細胞變化及意義[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2016，34(1)：18-20.

[12]苗露，楊海瀾，韓方，等.OX40L和ICAM-1在子癇前期患者外周血中的表達水平及意義[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2016，13(14)：86-89.

[13]張世芬，張穎新，徐軍，等.Th17/Treg細胞在子癇前期患者外周血及胎盤組織中的表達水平[J].臨床輸血與檢驗，2016，18(1)：9-13.

[14]李寒松，李煒，王少為.子癇前期臍血流異常與圍生兒預后相關性分析[J].中國生育健康雜志，2010，21(2)：67-70.

[15]彭聰.孕婦血清、臍血及胎盤組織中髓過氧化物酶水平和子癇前期發(fā)病的關系[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2016，15(3)：270-272.

Objective To discuss the expression and significance of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers.Methods 60 pregnant women with late pregnancy，single birth and preeclampsia were selected for the study who were admitted to Obstetrical Department of the First Affiliated Hospital to Inner Mongolia Medical University from November 2011 to December 2012 for cesarean delivery.Among which there were 30 cases with mild preeclampsia(Mild group)，30 cases with severe preeclampsia(Severe group).Simultaneously 20 cases with normal late pregnancy and single birth were randomly selected to be the control group.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was adopted to measure the Chemerin level in peripheral blood and umbilical cord blood in the three groups.Results Compared with the control group，the expression of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers all increased，among which the concentration of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood serum was the highest in the severe group.Comparison between the severe group and the control group showedP＜0.01，while comparison between the severe group and the mild group showedP＜0.05.In the relevant research with fasting blood glucose，Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood had no obvious correlation with fasting blood glucose(P＞0.05).While Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood was clearly positively correlated with blood pressure，fasting insulin ration，and insulin resistance index(P＜0.01).The concentration of Chemerin in peripheral blood serum was consistent with the expression quantity of Chemerin in umbilical cord blood serum.Conclusion The high expression of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers can provide new thoughts for the diagnosis and treatment of preeclampsia.

Preeclampsia；Chemerin；Insulin resistance

2016-06-27)

1005-619X(2016)11-1121-04

10.13517/j.cnki.ccm.2016.11.001

010050 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院產(chǎn)科

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學科技百萬工程項目(YKD2013KJBW013)；內(nèi)蒙古自治區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生科研計劃項目(201302078)