于 杰，侯詩夏，吳洪梅，張 昭，呂澤芳，周志欽（.西南大學(xué)園藝園林學(xué)院，重慶　40076；2.南方山地園藝學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶　40075；.四川大學(xué)輕紡與食品學(xué)院，四川 成都　60065）

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重慶地方名柚果肉酚類物質(zhì)含量及其抗氧化活性分析

于 杰1,2，侯詩夏3，吳洪梅1，張 昭1，呂澤芳1，周志欽1,2
（1.西南大學(xué)園藝園林學(xué)院，重慶400716；2.南方山地園藝學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400715；3.四川大學(xué)輕紡與食品學(xué)院，四川 成都610065）

摘 要：通過紫外分光光度計法和高效液相色譜法分別測定10種重慶地方名柚成熟果實(shí)囊衣、汁胞2 個部位的總酚、總黃酮含量及類黃酮、酚酸組分和含量，并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、鐵離子還原能力（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）測定、2,2’-聯(lián)氮-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）3種方法對其抗氧化活性進(jìn)行評價。結(jié)果表明：囊衣的總黃酮含量和類黃酮含量較高，‘琯溪蜜柚’總黃酮含量最高達(dá)10.97 mg/g，類黃酮中地奧司明含量最高，均值為1 000.72 μg/g，其含量最高為‘五布柚’，達(dá)到2 366.77 μg/g；汁胞的總酚含量和酚酸含量較高，‘真龍柚3號’總酚含量最高達(dá)8.84 mg/g，酚酸中沒食子酸含量最高，均值為1 040.16 μg/g，其含量最高為‘長壽沙田柚’，達(dá)到1 325.89 μg/g。利用DPPH法和FRAP法測定2 個部位抗氧化活性，汁胞高于囊衣，ABTS法則囊衣高于汁胞。綜合抗氧化能力指數(shù)表明，‘琯溪蜜柚’囊衣、‘梁平柚78-8’汁胞的抗氧化活性最強(qiáng)。通過本研究，不僅能夠了解重慶地方名柚果實(shí)囊衣、汁胞部位酚類物質(zhì)組分和含量，同時為柑橘酚類物質(zhì)的應(yīng)用選擇提供了一定的理論依據(jù)，促進(jìn)了柑橘果品營養(yǎng)學(xué)的發(fā)展。

關(guān)鍵詞：柚子；類黃酮；總酚；總黃酮；抗氧化

于杰, 侯詩夏, 吳洪梅, 等. 重慶地方名柚果肉酚類物質(zhì)含量及其抗氧化活性分析[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(12): 83-88. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201612014. http://www.spkx.net.cn

YU Jie, HOU Shixia, WU Hongmei, et al. Phenolic compositions and antioxidant capacity of the fruit pulp of popular pomelo cultivars in Chongqing[J]. Food Science, 2016, 37(12): 83-88. (in Chinese with English abstract) D OI:10.7506/ spkx1002-6630-201612014. http://www.spkx.net.cn

柚（Citrus grandis (L.) Osbeck）為蕓香科柑橘屬植物，自然雜種及選育品種眾多，原產(chǎn)于我國[1-3]。柚子不僅味道鮮美，含有豐富的活性物質(zhì)，而且對人體抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌、預(yù)防心血管疾病、糖尿病等具有一定的功效[4-7]。酚類物質(zhì)是植物的次級代謝產(chǎn)物，參與防御紫外線輻射、保護(hù)植物組織免受病蟲侵害，且能賦予植物特有的色澤[8-11]。柑橘果實(shí)中的酚類物質(zhì)主要包括類黃酮和酚酸[12-14]。近年來，關(guān)于柑橘酚類物質(zhì)及其抗氧化性相關(guān)研究已有較多報道[15-18]，但對于國內(nèi)柚子地方品種果肉不同部位活性物質(zhì)的檢測及抗氧化活性的系統(tǒng)性研究較少。本研究以10種重慶地方名柚果肉為研究對象，檢測了囊衣、汁胞2 個部位的總酚、總黃酮、類黃酮、酚酸含量，并評價了抗氧化活性，為柚類活性物質(zhì)的開發(fā)利用提供理論指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

‘五布柚’（WB）、‘長壽沙田柚’（CS）、‘墊江白柚’（DJ）、‘紅心柚’（HX）、‘夔柚’（KY）、‘琯溪蜜柚’（GX）、‘虎蜜柚1號’（HM）、‘梁平柚78-8’（LP）、‘渝北沙田柚’（YB）、‘真龍柚3號’（ZL）。采自重慶市各區(qū)縣柚的主產(chǎn)區(qū)，在果實(shí)成熟季節(jié)，選擇生長發(fā)育良好的植株，在植株各個方向選取無病蟲害、果形正常、大小均勻的成熟果實(shí)。

圣草次苷、橙 皮苷、蘆丁、地奧司明、橙皮素、甜橙黃酮、川陳皮素、橘皮素、沒食子酸、綠原酸、阿魏酸百靈威公司（中國北京）；圣草酚、柚皮素、咖啡酸、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2,4,6-三吡啶基三嗪、2,2’-聯(lián)氮-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）、水溶性VE美國Sigma公司；其他試劑（均為分析純）成都市科龍化工試劑廠。

1.2儀器與設(shè)備

e2695高效液相色譜儀、2998型光電二極管陣列檢測器美國Waters公司；Milli-Q Advantage A10超純水系統(tǒng)美國Millipore公司；Lambda 25紫外-可見分光光度計美國珀金埃爾默公司；TDL-5A型臺式低速大容量離心機(jī)上海菲恰爾分析儀器有限公司；KQ5200DE型超聲清洗器昆山市超聲儀器有限公司；DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；ZN-04A型小型粉碎機(jī)北京興時利和科技發(fā)展有限公司；DG-800型旋渦混合器北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；JT3101N型電子天平（感量0.1 g，Max 3 100 g）上海精天電子儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1酚類物質(zhì)的提取

果實(shí)采摘后將其分成囊衣、汁胞2 個部位，40 ℃烘干，粉碎后過60 目篩。稱取0.4 g粉末，加入8 mL甲醇溶液，搖勻后于50 ℃超聲提取30 min，5 000 r/min離心15 min，取上清液，殘渣重復(fù)提取2 次，合并上清液后定容至25 mL，貯存?zhèn)溆肹19]。

1.3.2總酚、總黃酮含量的測定

總酚含量的測定參考Orthofer等[20]的方法，用福林-酚法測定，總酚含量用沒食子酸當(dāng)量（gallic acid equivalent，GAE）表示?？傸S酮含量的測定參考Kim等[21]的方法，含量用蘆丁當(dāng)量（rutin equivalent，RE）表示。結(jié)果均以干質(zhì)量計。

1.3.3高效液相色譜測定

準(zhǔn)確稱取14種酚類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品各10.00 mg，用甲醇溶液溶解并定容至10.00 mL，配制成1.00 mg/mL酚類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，保存于－20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

色譜條件參考張元梅等[22]的方法略加修改。Sunfire-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫25 ℃；流速0.7 mL/min；檢測波長：260（酚酸）、283（黃烷酮）、320（酚酸）、330（黃酮）、367 nm（黃酮醇）；進(jìn)樣體積10 μL；流動相：A甲醇、B 0.1%甲酸溶液；采用梯度洗脫程序，0～20 min，37%～50% A，2 0～3 5 m i n，5 0%～8 0% A，3 5～4 0 m i n，80%～100% A，40～50 min，100%～100% A，50～60 min，100%～37%A。

將樣品的高效液相色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖對照，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線對各個品種不同部位的酚類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。結(jié)果均以干質(zhì)量計。

1.3.4抗氧化活性測定

采用DPPH自由基清除率、鐵離子還原能力（ferricreducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）、ABTS＋·清除能力3種方法測定抗氧化活性，分別參考Gorinstein[23]、Benzie[24]、Almeida[25]和Seeram[26]等的方法略加修改?？寡趸芰τ盟苄訴E當(dāng)量（trolox equivalent，TE）表示。結(jié)果均以干質(zhì)量計。抗氧化活性綜合（antioxidant potency composite，APC）指數(shù)計算如下式所示：

1.4數(shù)據(jù)分析

用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，用Origin Pro 8.0軟件進(jìn)行作圖。所有數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)，測定結(jié)果用±s來表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素差異分析（one-way analysis of variance，ANOVA），皮爾森相關(guān)性分析（Pearson’s correlation analysis），以P＜0.05為顯著（*），P＜0.01為極顯著（**）。

2　結(jié)果與分析

2.1酚類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜分析結(jié)果

圖1　10種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖Fig. 1　HPLC chromatograms of 10 flavonoid standards

由圖1可知，10種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品在42 min內(nèi)能夠完全分離，峰形尖銳，對稱性好，可以滿足多種類黃酮的同時分離。

圖2　4種酚酸標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖Fig. 2　HPLC chromatograms of 4 phenolic acid standards

表1　各品種柚子囊衣酚類物質(zhì)含量Table 1 Phenolic compositions in the segment membrane of the 10 pomelo cultivars

由圖2可知，4種酚酸標(biāo)準(zhǔn)品在42 min內(nèi)能夠完全分離，峰形尖銳，對稱性好，可以滿足多種酚酸的同時分離。

2.2酚類物質(zhì)含量差異

2.2.1各品種柚子囊衣、汁胞總酚含量

圖3　各品種柚子囊衣、汁胞總酚含量Fig. 3　Total phenolic contents in the segment membrane and juice sac of the 10 pomelo cultivars

由圖3可知，囊衣的總酚含量差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的2.22 倍。囊衣GX的含量最高；其次是HX和WB；YB、KY、DJ的含量排在最后3 位。汁胞的總酚含量差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.77 倍。ZL的總酚含量最高達(dá)8.84 mg/g；其次是WB和LP；DJ、KY、HM的總酚含量排在最后3 位。

2.2.2各品種柚子囊衣、汁胞總黃酮含量

由圖4可知，囊衣的總黃酮含量差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.69 倍。囊衣GX的含量最高；其次是CS和HX；LP、KY、DJ的總黃酮含量排在最后3 位。汁胞的總黃酮含量差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.79倍。LP的總黃酮含量最高；其次是ZL和KY；HY、WB、GX的總黃酮含量排在最后3 位。

圖4　各品種柚子囊衣、汁胞總黃酮含量Fig. 4　Total flavonoid contents in the segment membrane and juice sac of the 10 pomelo cultivars

2.2.3各品種柚子囊衣酚類物質(zhì)的成分和含量

由表1可知，重慶地方名柚成熟果實(shí)囊衣以地奧司明、橙皮素、圣草次苷為主。地奧司明的含量在10種類黃酮中最高，均值為1 000.72 μg/g，占10種類黃酮總量的59.11%。地奧司明含量最高的是WB，含量為2 366.77 μg/g，其次是CS（1 491.07 μg/g）、GX（1 836.19 μg/g）；橙皮素含量最高的是DJ，含量為2 664.32 μg/g，其次是KY（2 661.63 μg/g）、WB（6.16 μg/g）；圣草次苷含量最高的是ZL，含量為188.27 μg/g，其次是KY（137.07 μg/g）、DJ（132.60 μg/g）。

表2　各品種柚子汁胞酚類物質(zhì)含量Table 2 Phenolic compositions in the juice sac of the 10 pomelo cultivars

表3　各品種柚子囊衣和汁胞的抗氧化活性Table 3 Antioxidant activities of the segment membrane and juice sac of the 10 pomelo cultivars

重慶地方名柚成熟果實(shí)囊衣以沒食子酸、綠原酸為主。沒食子酸的含量在4種酚酸中最高，均值為383.96 μg/g，占4種酚酸總量的56.76%。沒食子酸含量最高的是GX，含量為694.64 μg/g，其次是CS （563.33 μg/g）、HX（431.18 μg/g）；綠原酸含量最高的是GX，含量為469.28 μg/g，其次是ZL（414.62 μg/g）、KY（378.88 μg/g）。

2.2.4各品種柚子汁胞酚類物質(zhì)的成分和含量

由表2可知，重慶地方名柚成熟果實(shí)汁胞以地奧司明、蘆丁、橙皮素為主。地奧司明的含量在10種類黃酮中最高，均值為357.00 μg/g，占10種類黃酮總量的44.15%。地奧司明含量最高的是LP，含量為930.51 μg/g，其次是KY（592.52 μg/g）、DJ（589.07 μg/g）；蘆丁含量最高的是KY，含量為709.31 μg/g，其次是DJ （708.58 μg/g）、ZL（583.70 μg/g）；橙皮素含量最高的是KY，含量為777.20 μg/g，其次是DJ（777.03 μg/g）。

重慶地方名柚成熟果實(shí)汁胞以沒食子酸、綠原酸為主。沒食子酸的含量在4種酚酸中最高，均值為1 040.16 μg/g，占4種酚酸總量的83.92%。沒食子酸含量最高的是CS，含量為1 325.89 μg/g，其次是ZL （1 318.74 μg/g）、WB（1 295.77 μg/g）；綠原酸含量最高的是HX，含量為497.02 μg/g，其次是WB （412.26 μg/g）、YB（274.03 μg/g）。

2.3各品種柚子囊衣、汁胞抗氧化活性

如表3所示，由DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)可知，囊衣DPPH自由基清除能力差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.61 倍。囊衣DPPH自由基清除能力最強(qiáng)的是ZL；其次是GX和CS；最弱的是LP。汁胞DPPH自由基清除能力差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的2.11 倍。汁胞DPPH自由基清除能力最強(qiáng)的是LP；其次是WB和YB；最弱的是GX。

由FRAP實(shí)驗(yàn)可知，囊衣FRAP值差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.65 倍。囊衣FRAP最強(qiáng)的是GX；其次是LP和DJ；最弱的是KY。汁胞FRAP值差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.88 倍。汁胞FRAP最強(qiáng)的是LP；其次是ZL和HM；最弱的是GX。

由ABTS＋·清除實(shí)驗(yàn)可知，囊衣ABTS＋·清除能力差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的1.59 倍。囊衣ABTS＋·清除能力最強(qiáng)的是GX；其次是HX和CS；最弱的是KY。汁胞ABTS＋·清除能力差異顯著（P＜0.05），最高值是最低值的2.31 倍。汁胞ABTS＋·清除能力最強(qiáng)的是LP；其次是CS和WB；最弱的是KY。

不同品種柚子囊衣的APC指數(shù)變幅為62.72%～ 96.92%，汁胞的APC指數(shù)變幅為48.95%～100.00%，柚子囊衣部位GX的APC指數(shù)最高，這表明GX的DPPH自由基清除能力、FRAP、ABTS＋·清除能力的綜合抗氧化活性最強(qiáng)；其次是ZL和DJ；KY的APC指數(shù)最低，這表明KY的DPPH自由基清除能力、FRAP、ABTS＋·清除能力的綜合抗氧化活性最弱。柚子汁胞部位LP的APC指數(shù)最高，這表明LP的DPPH自由基清除能力、FRAP、ABTS＋·清除能力的綜合抗氧化活性最強(qiáng)；其次是WB 和YB；GX的APC指數(shù)最低，這表明GX的DPPH自由基清除能力、FRAP、ABTS＋·清除能力的綜合抗氧化活性最弱。

3　結(jié) 論

本研究以重慶地方名柚果肉為對象，分別檢測了各個品種囊衣、汁胞的總酚、總黃酮、類黃酮、酚酸的含量，并對其抗氧化活性進(jìn)行了評價。不同品種2 個部位的酚類物質(zhì)含量差異顯著，總酚和酚酸的含量：汁胞＞囊衣；總黃酮、黃烷酮及黃酮的含量：囊衣＞汁胞。GX囊衣的總酚、總黃酮含量最高；ZL汁胞的總酚含量最高；LP汁胞的總黃酮含量最高。3種抗氧化方法測定2 個部位的抗氧化活性強(qiáng)弱均值比較，DPPH自由基清除能力：汁胞＞囊衣；FRAP：汁胞＞囊衣；ABTS＋·清除能力：囊衣＞汁胞，結(jié)果表明GX囊衣、LP汁胞的綜合抗氧化活性最強(qiáng)。本研究將為柑橘資源的實(shí)踐利用提供數(shù)據(jù)支持，也為柑橘果品營養(yǎng)、醫(yī)藥和保健價值的開發(fā)研究提供了依據(jù)，具有一定的社會價值和經(jīng)濟(jì)價值。同時，為重慶地方名柚的規(guī)范化種植以及產(chǎn)品推廣、貯藏加工等提供理論參考，促進(jìn)重慶市柑橘產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

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Phenolic Compositions and Antioxidant Capacity of the Fruit Pulp of Popular Pomelo Cultivars in Chongqing

YU Jie1,2, HOU Shixia3, WU Hongmei1, ZHANG Zhao1, Lü Zefang1, ZHOU Zhiqin1,2
(1. College of Horticulture and Landscape Architecture, Southwest University, Chongqing400716, China; 2. Key Laboratory of Horticulture for Southern Mountainous Regions, Ministry of Education, Chongqing400715, China; 3. College of Light Industry, Textile and Food Engineering, Sichuan University, Chengdu610065, China)

Abstract:In this study, ultraviolet spectrophotometry and high performance liquid chromatography (HPLC) were used to determine the contents of phenols and flavonoids in the segment membrane (SM) and juice sac (JS) of 10 popular cultivars of pomelo (Citrus grandis) in Chongqing. In addition, the antioxidant capacities of these two parts were evaluated by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical) (DPPH), ferric reducing antioxidant power (FRAP) and 2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) (ABTS) methods. Results showed that total flavonoids and the individual contents of 10 measured flavonoid compounds were higher in the SM. The total flavonoid content of ‘Guanxi’ pomelo was the highest (10.97 mg/g). Among the flavonoids, diosmin was the most abundant with an average of 1 000.72 μg/g. Among 10 cultivars,‘Wubu’ had the highest diosmin content (2 366.77 μg/g). However, the contents of total phenolic compounds and phenolic acid were higher in the JS. The highest total phenolic content of 8.84 mg/g was found in ‘Zhenlongyou No. 3’. Gallic acid was the most predominant phenolic acid with an average of 1 040.16 μg/g and its highest level of 1 325.89 μg/g was noted in ‘Changshou Shatian’. The JS was found to have stronger DPPH radical scavenging and FRAP capacity, but exhibit weaker ABTS radical scavenging capacity than the SM. Overall, the segment membrane of ‘Guanxi’ and the juice sac of ‘Liangpingyou 78-8’ possessed the highest antioxidant activity. This study not only reveals the phenolic composition of the SM and JS of the popular pomelo cultivars in Chongqing, but also offers a theoretical basis for utilizing the phenolics in citrus and promoting the development of nutritional studies on citrus fruits.

Key words:pomelo; individual flavonoids; total phenolics; total flavonoids; antioxidant capacity

收稿日期：2015-08-24

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31171930）；重慶市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（CSTC2013JCYJA8002）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（XDJK2014C091）；西南大學(xué)博士基金項(xiàng)目（SWU112016）

作者簡介：于杰（1977—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)楣窢I養(yǎng)學(xué)。E-mail：yujie1978@126.com

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201612014

中圖分類號：TS255.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2016）12-0083-06引文格式：