胡　明，朱　坤，張建水，劉建新

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◇基礎(chǔ)研究◇

小鼠顳葉癲癇慢性期CA3區(qū)損傷對(duì)齒狀回神經(jīng)再生的影響

胡明1,2，朱坤1，張建水2，劉建新1

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院：1. 神經(jīng)生物學(xué)研究所；2. 人體解剖與組織胚胎學(xué)系，陜西西安710061)

摘要：目的明確小鼠顳葉癲癇慢性期CA3區(qū)細(xì)胞丟失是否影響齒狀回神經(jīng)元新生。方法Pilocarpine誘導(dǎo)制作小鼠顳葉癲癇模型，在慢性期(誘導(dǎo)2月后)采用BrdU標(biāo)記齒狀回顆粒細(xì)胞下層(subgranular zone, SGZ)新生細(xì)胞，尼氏染色將標(biāo)本分為CA3區(qū)細(xì)胞部分丟失(Ⅰ型)和嚴(yán)重丟失(Ⅱ型)組。BrdU+NeuN免疫熒光雙標(biāo)染色觀察新生細(xì)胞向神經(jīng)元的分化，DCX和BrdU免疫熒光染色觀察兩組動(dòng)物齒狀回細(xì)胞增殖和新生細(xì)胞的存活。結(jié)果與Ⅱ型組動(dòng)物比較，Ⅰ型組動(dòng)物齒狀回SGZ和顆粒細(xì)胞層(granule cell layer, GCL)BrdU+NeuN雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量明顯增多(P<0.05)，但雙標(biāo)細(xì)胞占BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞總量的比例在兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；Ⅰ型和Ⅱ型組動(dòng)物齒狀回SGZ區(qū)DCX免疫陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量無(wú)顯著性差異(P>0.05)；BrdU標(biāo)記6周后，Ⅰ型組動(dòng)物齒狀回存活的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較Ⅱ型組明顯增多(P<0.05)。結(jié)論小鼠顳葉癲癇慢性期CA3區(qū)損傷通過(guò)影響新生細(xì)胞的存活而降低了海馬齒狀回神經(jīng)元新生。

關(guān)鍵詞：顳葉癲癇；海馬；齒狀回；神經(jīng)再生；神經(jīng)元；CA3區(qū)損傷

海馬神經(jīng)再生在顳葉癲癇后的改變已被視為該疾病的重要病理特點(diǎn)，其在海馬高興奮性病理性環(huán)路形成以及結(jié)構(gòu)修復(fù)中具有較大的潛在意義[1]。在顳葉癲癇慢性期，海馬神經(jīng)再生明顯下降[2-3]，但其機(jī)制尚未完全明了。已有研究表明癲癇慢性期齒狀回微環(huán)境的惡化，包括各種神經(jīng)因子表達(dá)的下調(diào)是造成海馬神經(jīng)再生下降的局部因素[4]。生理狀態(tài)下，海馬齒狀回新生神經(jīng)元向CA3區(qū)錐體細(xì)胞發(fā)出軸突投射，我們前期的研究已證實(shí)海馬CA3區(qū)損傷對(duì)齒狀回神經(jīng)再生具有負(fù)向影響[5]。海馬CA3區(qū)細(xì)胞丟失是顳葉癲癇的重要病理特點(diǎn)，因此我們推測(cè)顳葉癲癇慢性期CA3區(qū)細(xì)胞丟失可能是造成海馬神經(jīng)再生下降的重要因素。本研究采用Pilocarpine誘導(dǎo)的小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus, SE)，在疾病慢性期用BrdU標(biāo)記齒狀回新生細(xì)胞并追蹤其向成熟神經(jīng)元的分化，應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法對(duì)上述推測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證。

1材料與方法

1.1動(dòng)物雌性昆明小鼠購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，所有實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。在滿足研究要求的條件下，盡量減輕動(dòng)物痛苦和減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量。

1.2Pilocarpine誘導(dǎo)小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)選用25～30 g雌性昆明小鼠共60只。誘導(dǎo)在安靜、較暗的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。誘導(dǎo)前30 min皮下注射硝酸甲基東莨菪堿1 mg/kg(0.025 mg/mL)(Catalog No.S2250, Sigma, USA)以減輕Pilocarpine對(duì)周?chē)窠?jīng)的損害，然后腹腔注射Pilocarpine 300 mg/kg(75 mg/mL)(Catalog No.P6503, Sigma, USA)，5 min后給予聲音、提尾等輕微刺激，誘導(dǎo)動(dòng)物進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)。

1.3視頻監(jiān)測(cè)自發(fā)性反復(fù)癲癇發(fā)作在鼠籠上架設(shè)高清存儲(chǔ)式攝像頭，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(3只/籠)在慢性期接受為期1周、每天24 h的視頻監(jiān)測(cè)。分析視頻資料，剔除無(wú)自發(fā)性反復(fù)癲癇發(fā)作的動(dòng)物。

1.4BrdU標(biāo)記SE后2月進(jìn)行BrdU標(biāo)記。一次性腹腔注射BrdU(Catalog No.B5002, Sigma, USA)，劑量為150 mg/kg。

1.5取材BrdU標(biāo)記后2 h(分析細(xì)胞增殖)或6周(分析新生細(xì)胞存活和向神經(jīng)元的分化)后，20 g/L巴比妥鈉(Sigma)腹腔注射(0.2 mL/kg)麻醉后，分別用0.1 mol/L PBS緩沖液和40 g/L多聚甲醛(0.1 mol/L PBS緩沖液溶解)固定液灌注動(dòng)物，取腦，后固定3 h后置300 g/L蔗糖溶液中4 ℃過(guò)夜。恒溫冰凍切片機(jī)(Slee Technik, Mainz, Germany)切取40 μm厚含全長(zhǎng)背側(cè)海馬的冠狀腦片(前囟后2.80～4.52 mm)，每次連續(xù)切取5張，依次放入裝有0.1 mol/L PBS的10個(gè)板孔內(nèi)。反復(fù)上述操作，最終每個(gè)板孔內(nèi)包含6～8 片間隔200 μm的背側(cè)海馬腦片。

1.6甲苯胺藍(lán)尼氏染色每只動(dòng)物取一個(gè)板孔內(nèi)的全部腦片，將腦片錨定在載破片上，室溫下干燥，浸入甲苯胺藍(lán)染色液1 min，用清水洗滌3次，干燥、封片。

1.7BrdU+NeuN免疫熒光雙標(biāo)染色每只動(dòng)物取出一個(gè)板孔內(nèi)的腦片，0.1 mol/L PBS洗滌3次，浸入2 mol/L HCl 在37 ℃水浴箱內(nèi)變性30 min；洗滌后用小鼠抗BrdU(1∶300，Catalog No. VP-B209, Vector, USA)和兔抗NeuN(1∶1 000，Catalog No.MABN140，Millipore, USA)混合一抗溶液(用加入3 mL/L的Triton和10 mL/L的山羊血清的0.1 mol/L PBS配制)孵育，4 ℃過(guò)夜；0.1 mol/L PBS洗滌3次，用Cy3標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(1∶200，Catalog No.0311, ZSGB-Bio, China)和FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1∶200，Catalog No.0313, ZSGB-Bio, China)二抗混合液室溫孵育2 h，0.1 mol/L PBS洗滌3次，錨定、封片，激光共聚焦顯微鏡(TCS, Sp2, Leica, Germany)觀察。

1.8DCX免疫熒光染色每只動(dòng)物取出一個(gè)板孔內(nèi)的腦片，0.1 mol/L PBS洗滌3次，20 mL/L山羊血清封閉2 h，洗滌后用兔抗DCX(1∶1 000, Catalog No.ab18723, Abcam, UK)一抗溶液孵育，4 ℃過(guò)夜；0.1 mol/L PBS洗滌3次，用FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1∶200, Catalog No.0313, ZSGB-Bio, China)二抗室溫孵育2 h，0.1 mol/L PBS洗滌3次，DAPI復(fù)染。錨定、封片，熒光顯微鏡觀察。

1.9BrdU免疫熒光染色每只動(dòng)物取出一個(gè)板孔內(nèi)的腦片，0.1 mol/L PBS洗滌3次，浸入2 mol/L HCl在37 ℃水浴箱內(nèi)變性30 min；洗滌后用小鼠抗BrdU(1∶300，Catalog No.VP-B209, Vector, USA)一抗溶液孵育，4 ℃過(guò)夜；0.1 mol/L PBS洗滌3次，用FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1∶200，Catalog No.0311, ZSGB-Bio, China)二抗室溫孵育2 h，0.1 mol/L PBS洗滌3次，DAPI復(fù)染。錨定、封片，熒光顯微鏡觀察。

2結(jié)果

2.1Pilocarpine誘導(dǎo)SE的行為學(xué)表現(xiàn)Pilocarpine誘導(dǎo)的行為學(xué)變化包括起始的肌肉緊張，尾部翹起，發(fā)展到四肢肌肉痙攣，劇烈跳動(dòng)，摔倒，最后維持在頭頸部肌肉抽動(dòng)、持續(xù)快速點(diǎn)頭的狀態(tài)。動(dòng)物出現(xiàn)連續(xù)無(wú)中斷的發(fā)作距離Pilocarpine腹腔注射時(shí)間為(17.82±10.84)min，持續(xù)時(shí)間為(7.23±1.59)h。腹腔注射生理鹽水對(duì)照組動(dòng)物無(wú)異常行為學(xué)改變。本研究共誘導(dǎo)成功52只動(dòng)物，8只動(dòng)物因發(fā)作嚴(yán)重死亡。

2.2自發(fā)性反復(fù)癲癇發(fā)作情況52只成功誘導(dǎo)為SE的動(dòng)物接受視頻監(jiān)測(cè)，其中48只動(dòng)物出現(xiàn)自發(fā)性反復(fù)性癲癇發(fā)作，發(fā)作頻率為(1.8±0.9)次/24 h，單次持續(xù)時(shí)間為(18±8.4)s。

2.3甲苯胺藍(lán)尼氏染色結(jié)果尼氏染色可見(jiàn)癲癇慢性期動(dòng)物海馬CA3區(qū)細(xì)胞大量丟失，齒狀回顆粒細(xì)胞則無(wú)明顯丟失。出現(xiàn)自發(fā)性反復(fù)性癲癇發(fā)作的24只動(dòng)物在BrdU標(biāo)記2 h后處死，根據(jù)染色結(jié)果從中選取12只動(dòng)物的標(biāo)本，其中Ⅰ型組(CA3區(qū)細(xì)胞部分丟失)(圖1A)和Ⅱ型組(CA3區(qū)細(xì)胞嚴(yán)重丟失)(圖1B)各6只。另外24只動(dòng)物在BrdU標(biāo)記6周后處死，根據(jù)染色結(jié)果從中選取12只動(dòng)物的標(biāo)本，其中Ⅰ型組(CA3區(qū)細(xì)胞部分丟失)和Ⅱ型組(CA3區(qū)細(xì)胞嚴(yán)重丟失)各6只。為排除CA1區(qū)細(xì)胞丟失對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，選取的12只動(dòng)物標(biāo)本CA1區(qū)細(xì)胞丟失均不嚴(yán)重。

圖1尼氏染色顯示CA3區(qū)細(xì)胞部分(Ⅰ型)和嚴(yán)重(Ⅱ型)丟失Fig.1 Cell loss in the CA3 area in types Ⅰ and Ⅱ mice (×10)

A：Ⅰ型，CA3區(qū)細(xì)胞部分丟失；B：Ⅱ型，CA3區(qū)細(xì)胞嚴(yán)重丟失。B中標(biāo)尺=200 μm。

2.4BrdU+NeuN免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果BrdU標(biāo)記6周后，在海馬齒狀回SGZ和GCL可見(jiàn)核染的BrdU+NeuN雙標(biāo)細(xì)胞(圖2B、C，箭頭所示)。Ⅰ型組動(dòng)物(圖2B，B1～B3)SGZ-GCL雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量(312±56)較Ⅱ型組(圖2C，C1～C3)(194±38)明顯增多(方差齊，F(xiàn)=2.298,t=4.119,P=0.0021)(圖2D)。但BrdU+NeuN雙標(biāo)細(xì)胞所占BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞的比例在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(方差齊，F(xiàn)=1.490，t=0.854 7，P=0.412 7)(圖2E)。

圖2Ⅰ和Ⅱ型組動(dòng)物齒狀回BrdU+NeuN免疫熒光雙標(biāo)染色情況

Fig.2 Double labeling of BrdU+NeuN by immunofluorescence staining in the dentate gyrus of types Ⅰ and Ⅱ mice (×40)

A：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；B：Ⅰ型組動(dòng)物BrdU+NeuN雙標(biāo)染色，B1～B3為B圖中大箭頭所示區(qū)域的分色圖片；C：Ⅱ型組動(dòng)物BrdU+NeuN雙標(biāo)染色，C1～C3為C圖中大箭頭所示區(qū)域的分色圖片；D：雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖；E：雙標(biāo)細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)圖。C中標(biāo)尺=100 μm，也適用于B；C3中的標(biāo)尺=50 μm，也適用于B1～B3和C1～C2。

2.5DCX染色TLE慢性期小鼠海馬齒狀回SGZ可見(jiàn)突起明顯的DCX免疫陽(yáng)性細(xì)胞(圖3B、C)。但Ⅰ型組(1 284±209，圖3B)和Ⅱ型組動(dòng)物(1 205±159，圖3C)SGZ區(qū)域DCX免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有顯著性差異(方差齊，F(xiàn)=2.246，t=0.669 1，P=0.518 6)(圖3D)。

2.6BrdU染色BrdU標(biāo)記2 h后，齒狀回SGZ的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量在Ⅰ型組(1 136±119，圖4B)和Ⅱ型組(1 361±108，圖4C)之間無(wú)顯著性差異(方差齊，F(xiàn)=1.590，t=1.121，P=0.288 4)(圖4F)。但在BrdU標(biāo)記后6周，Ⅰ型組SGZ-GCL存留的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(712±118，圖4D)較Ⅱ型組(346±90，圖4E)明顯增多(方差齊，F(xiàn)=2.170，t=8.875，P=0.0007)(圖4G)。

圖3Ⅰ和Ⅱ型組動(dòng)物齒狀回DCX免疫熒光染色

Fig.3 DCX immunofluorescence staining in the dentate gyrus of types Ⅰ and Ⅱ mice (×40)

A：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；B：Ⅰ型組動(dòng)物DCX染色；C：Ⅱ型組動(dòng)物DCX染色；D：DCX免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計(jì)圖。C中標(biāo)尺=100 μm。

圖4Ⅰ和Ⅱ型組動(dòng)物齒狀回BrdU免疫熒光染色

Fig.4 BrdU immunofluorescence staining in the dentate gyrus of types Ⅰ and Ⅱ mice (×40)

A：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；B：Ⅰ型組動(dòng)物BrdU染色(標(biāo)記后2 h)；C：Ⅱ型組動(dòng)物BrdU染色(標(biāo)記后2 h)；D：Ⅰ型組動(dòng)物BrdU染色(標(biāo)記后6周)；E：Ⅱ型組動(dòng)物BrdU染色(標(biāo)記后6周)。F：BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(標(biāo)記后2 h)統(tǒng)計(jì)圖；G：BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(標(biāo)記后6周)統(tǒng)計(jì)圖。E中標(biāo)尺=100 μm。

3討論

我們前期的研究表明，Pilocarpine誘導(dǎo)的小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)2月后，動(dòng)物出現(xiàn)典型顳葉癲癇慢性期表現(xiàn)，包括特征性海馬病理變化(膠質(zhì)化、苔蘚纖維芽發(fā)和海馬膠質(zhì)化)和自發(fā)性反復(fù)性癲癇發(fā)作[6]。因此，本研究選擇癲癇持續(xù)狀態(tài)2月后作為研究的起始點(diǎn)。我們選擇BrdU標(biāo)記6周以后觀察新生細(xì)胞的分化，是因?yàn)檫@些新生細(xì)胞需要4～6周的時(shí)間才能分化成為成熟的神經(jīng)元[7]。本研究選擇BrdU單次標(biāo)記，避免了多次標(biāo)記方案中標(biāo)記期間新生細(xì)胞的存活和標(biāo)記細(xì)胞處于不同年齡階段對(duì)研究結(jié)果的干擾。

新生細(xì)胞分化是神經(jīng)再生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，本研究著重觀察CA3區(qū)細(xì)胞丟失對(duì)SGZ新生細(xì)胞向成熟神經(jīng)元轉(zhuǎn)化的影響。采用BrdU+NeuN免疫雙標(biāo)染色發(fā)現(xiàn)，BrdU標(biāo)記6周后，Ⅰ型組動(dòng)物齒狀回雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量雖然較Ⅱ型組動(dòng)物明顯增多，但雙標(biāo)細(xì)胞占各組BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞的比例卻較為一致。這一結(jié)果提示，雖然Ⅱ型組動(dòng)物海馬新生成熟神經(jīng)元較少，但CA3區(qū)細(xì)胞丟失可能并不影響新生細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的分化能力，而Ⅰ型組動(dòng)物較多的BrdU+NeuN雙標(biāo)細(xì)胞可能是由于SGZ細(xì)胞增殖和(或)新生細(xì)胞的存活能力增強(qiáng)所造成的。我們首先進(jìn)行了DCX染色。DCX陽(yáng)性細(xì)胞代表出生后10 d左右的未成熟神經(jīng)元[8]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ⅰ型組和Ⅱ型組動(dòng)物SGZ區(qū)域DCX免疫陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量沒(méi)有明顯差異。這一結(jié)果表明，存活障礙可能是Ⅱ型組動(dòng)物海馬新生成熟神經(jīng)元減少的主要原因。我們又分別在BrdU標(biāo)記2 h(觀察SGZ細(xì)胞增殖)和6周后(觀察新生細(xì)胞的存活能力)BrdU免疫染色進(jìn)行進(jìn)一步分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BrdU標(biāo)記2 h后，SGZ的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量在Ⅰ型和Ⅱ型組動(dòng)物之間無(wú)顯著性差異。這一結(jié)果和DCX染色結(jié)果一致，表明CA3區(qū)細(xì)胞丟失程度對(duì)SGZ的細(xì)胞增殖并無(wú)明顯影響；而B(niǎo)rdU標(biāo)記6周后，Ⅱ型組動(dòng)物齒狀回存留的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，證明CA3區(qū)細(xì)胞丟失程度對(duì)SGZ新生細(xì)胞的存活能力造成了損害。因此，本研究結(jié)果表明Pilocarpine誘導(dǎo)的顳葉癲癇慢性期造成的CA3區(qū)細(xì)胞丟失可能通過(guò)影響齒狀回新生細(xì)胞，包括新生未成熟神經(jīng)元的存活能力而降低神經(jīng)元的新生。

CA3錐體細(xì)胞是齒狀回顆粒細(xì)胞的投射區(qū)，嚙齒類動(dòng)物齒狀回的新生細(xì)胞在數(shù)周時(shí)間就可以向CA3區(qū)形成軸突投射[9]。生理情況下，50%～70%的海馬新生細(xì)胞可以存活并分化成神經(jīng)元[10]，說(shuō)明海馬新生細(xì)胞即使在正常環(huán)境中也存在投射競(jìng)爭(zhēng)。我們新近的研究發(fā)現(xiàn)，顳葉癲癇慢性期CA3區(qū)細(xì)胞丟失并沒(méi)有改變齒狀回局部神經(jīng)再生環(huán)境[9]。因此，顳葉癲癇CA3區(qū)細(xì)胞丟失使得海馬新生細(xì)胞失去投射區(qū)可能是造成新生細(xì)胞存活能力下降的重要原因。但其中的分子機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

我們的研究發(fā)現(xiàn)顳葉癲癇慢性期海馬新生神經(jīng)元絕大部分形成了正確的結(jié)構(gòu)整合[9]。很多研究者也認(rèn)為促進(jìn)顳葉癲癇慢性期海馬神經(jīng)再生對(duì)海馬神經(jīng)構(gòu)筑具有修復(fù)作用，并可能改善疾病的轉(zhuǎn)歸[11-12]。因此，本研究不僅證實(shí)了齒狀回以外的區(qū)域也參與癲癇慢性期海馬神經(jīng)再生的調(diào)控，也為建立促進(jìn)顳葉癲癇慢性期海馬神經(jīng)再生策略提供線索。

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(編輯邱芬)

收稿日期：2016-03-03修回日期：2016-03-17

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目資助(No.81171232, 81371427)

通訊作者：劉建新. E-mail: liujianxin@mail.xjtu.edu.cn

中圖分類號(hào)：R322.8

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI:10.7652/jdyxb201604002

Effect of cell loss in the CA3 area on hippocampal neurogenesis in chronically epileptic mice

HU Ming1,2, ZHU Kun1, ZHANG Jian-shui2, LIU Jian-xin1

(1. Institute of Neurobiology, 2. Department of Human Anatomy, Histology and Embryology, School of Basic Medical Sciences, Xi’an Jiaotong University Health Science Center, Xi’an 710061, China)

ABSTRACT:ObjectiveTo study the influence of cell loss in the CA3 area on hippocampal neurogenesis in mice with temporal lobe epilepsy. MethodsNewly born cells in the subgranular zone (SGZ) of dentate gyrus were labeled by the proliferation marker bromodeoxyuridine (BrdU) at 2 months after pilocarpine-induced status epilepticus. Double labeling of BrdU+NeuN was carried out to compare neuronal differentiation between type Ⅰ and Ⅱ mice, which represented partial cell loss and almost complete cell loss in the CA3 area, respectively. DCX and BrdU single staining were made to analyze the proliferation of progenitor cells in SGZ and the survival of the newly born cells. ResultsWhen compared with that of the type Ⅱ mice, the number of double labeled cells of BrdU+NeuN in the subgranular zone-granule cell layer (SGZ-GCL) in the type Ⅰ mice increased significantly (P<0.05). However, the percentages of double labeled cells in all the BrdU+ cells were found to be similar between the two groups (P>0.05). No significant difference in the number of DCX+ cells in SGZ was found between the type Ⅰ and Ⅱ mice (P>0.05). At 6 weeks after BrdU labeling, more remaining BrdU+ cells were found in the SGZ-GCL in the type Ⅰ mice when compared with their counterparts in the type Ⅱ mice (P<0.05). ConclusionThe cell loss in the CA3 area of pilocarpine-induced epileptic mice contributes to the declined hippocampal neurogenesis by exerting negative effects on the survival of newly born cells.

KEY WORDS:temporal lobe epilepsy; hippocampus; dentate gyrus; neurogenesis; neuron

Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.81171232 and 81371427)

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160608.0857.004.html(2016-06-08)