胡夢楠 梁泰剛*（山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，山西 太原 030001）

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羅布麻總黃酮的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

胡夢楠 梁泰剛*
（山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，山西 太原 030001）

【摘要】目的 初步評價(jià)羅布麻總黃酮的安全性。方法 小鼠一次性灌胃給藥，連續(xù)觀察14 d，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)判斷測定半數(shù)致死量（LD50）的可能性，據(jù)此測定其LD50或最大耐受量（MTD）。結(jié)果 小鼠口服羅布麻總黃酮最大耐受量為10.24 g/kg。結(jié)論 羅布麻總黃酮對小鼠急性毒性低，安全性較高。

【關(guān)鍵詞】羅布麻；總黃酮；急性毒性；最大耐受量

羅布麻（Apocynum venetum L.）為夾竹桃科羅布麻屬植物羅布麻的干燥全草，又名紅麻、茶葉花等，具有降壓、強(qiáng)心、利尿、降血脂、延緩衰老、抗輻射、增強(qiáng)免疫等功效。臨床用于治療高血壓、高血脂、慢性心功能不全、腎炎水腫、防治感冒等?，F(xiàn)代藥理研究表明羅布麻總黃酮是其降血壓、降血脂和抗血小板聚集、鎮(zhèn)靜、利尿的有效部位之一［1］。為保證臨床用藥的安全性，合理開發(fā)利用羅布麻總黃酮提取物資源提供可靠的安全性資料，本實(shí)驗(yàn)對羅布麻總黃酮提取物進(jìn)行了急性毒性評價(jià)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 受試藥物：稱取適量羅布麻，加入10倍量65%乙醇，70 ℃回流提取2次，每次2 h［2］，過濾，合并濾液，回收乙醇至無乙醇味，濃縮至適量體積獲得棕黃色羅布麻總黃酮粗提物。粗提物經(jīng)HPD-400型樹脂，以1 BV/h吸附流速上樣，純化水沖洗2 BV，60%乙醇洗脫3 BV，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑獲得純化后的羅布麻總黃酮有效部位［3］。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品通過紫外分光光度法計(jì)算得出提取物中總黃酮的含量為25.4%。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠140只（SPF級），雌雄各半，6～7周齡，體質(zhì)量18～25 g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號：SCXK（晉）2009-0001，動(dòng)物房合格證號：醫(yī)動(dòng)字070102 號。

1.3 實(shí)驗(yàn)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室溫度23～27 ℃，相對濕度50%～70%，雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由攝食和飲水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果［4-5］

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)：取小鼠40只，隨機(jī)分成2組，每組20只，雌雄各半。分為對照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組以最大給藥濃度，最大給藥劑量（0.4 mL/10 g）。一次灌胃，連續(xù)觀察14 d，期間觀察小鼠死亡數(shù)和一般情況。對照組灌胃等量0.5% CMC溶液，余同給藥組。若死亡數(shù)≥30%，則進(jìn)行半數(shù)致死量（LD50）測定，否則測定最大耐受量（MTD）。

2.2 最大耐受量測定：取小鼠100只，隨機(jī)分成5組，每組20只，雌雄各半。分別為溶劑對照組（0.5% CMC-Na組）和羅布麻總黃酮組（4組，按劑量由高到低依次為16.00、12.08、10.24、8.20 g/kg組）。相鄰兩組劑量成等比級數(shù)，比值1.25：1。給藥前隔夜禁食12 h，自由飲水。按劑量一次灌胃給藥，對照組給予0.5% CMC-Na，給藥容積均為0.4 mL/10 g BW。給藥后2 h自由飲食，詳細(xì)觀察給藥后4 h內(nèi)動(dòng)物的反應(yīng)情況，然后每天觀察1次。記錄小鼠死亡情況和體質(zhì)量變化，觀察期限14 d。第14天時(shí)稱量各組小鼠體質(zhì)量后，剖檢存活小鼠，觀察主要臟器病變情況。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，小鼠以最大給藥濃度和最大給藥劑量灌胃后，觀察14 d，死亡數(shù)＜30%，因此測不出LD50，所以進(jìn)行最大耐受量（MTD）測定。按實(shí)驗(yàn)劑量分別進(jìn)行灌胃給予羅布麻總黃酮提取物，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，灌胃給藥后部分小鼠出現(xiàn)自主活動(dòng)減少，呼吸短促，尿量增加，甚至出現(xiàn)死亡。灌胃后的小鼠連續(xù)觀察14 d。小鼠灌胃后的死亡情況，體質(zhì)量、行為活動(dòng)、呼吸、排泄、精神狀態(tài)、飲食情況見表1、2。

由表1和表2可知，存活動(dòng)物中對照組小鼠：行為活動(dòng)、呼吸、排泄、精神狀態(tài)、飲食均無異常，未有動(dòng)物死亡。羅布麻總黃酮組：隨著給藥劑量的升高，小鼠表現(xiàn)為活動(dòng)減少，中毒小鼠表現(xiàn)為呼吸短促、尿量增多等。16.00 g/kg 劑量組給藥后24 h內(nèi)死亡3只；12.08 g/kg劑量組給藥后24 h內(nèi)死亡1只；10.24 g/kg和8.20 g/kg 劑量組均未有動(dòng)物死亡。未死亡小鼠3～7 d各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)正常。14 d后處死受試小鼠并解剖尸檢，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，各實(shí)驗(yàn)組臟器外觀均未見異常改變。結(jié)果，小鼠口服羅布麻總黃酮MTD 為10.24 g/kg。相當(dāng)于臨床成人日用量的161倍（成人每日口服生藥量15 g，成人體質(zhì)量60 kg計(jì)）。

3 實(shí)驗(yàn)討論

羅布麻富含黃酮等活性物質(zhì)，具有較高的藥理活性和食療保健作用［6-7］。總黃酮作為羅布麻的主要活性成分，具有降壓、強(qiáng)心、利尿和降脂等作用。深化羅布麻總黃酮的研究將有助于進(jìn)一步開發(fā)羅布麻總黃酮在食品保健和作為降壓，強(qiáng)心，利尿等治療藥物方面的應(yīng)用前景，帶來更大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

本研究制備了羅布麻總黃酮提取物，通過羅布麻總黃酮對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)：口服給藥未能測出羅布麻總黃酮的LD50，口服一次的MTD為10.24 g/（kg·d），相當(dāng)于臨床成人日用量的161倍，表明羅布麻總黃酮口服給藥較為安全。但其安全性評價(jià)還應(yīng)結(jié)合長期毒性實(shí)驗(yàn)做進(jìn)一步驗(yàn)證，以全面保證臨床用藥的安全性。

表1 羅布麻總黃酮急性毒性試驗(yàn)小鼠死亡及反應(yīng)情況

表2 羅布麻總黃酮小鼠急性毒性試驗(yàn)小鼠體質(zhì)量（g，±s，n=20）

表2 羅布麻總黃酮小鼠急性毒性試驗(yàn)小鼠體質(zhì)量（g，±s，n=20）

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別　　實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量　禁食后體質(zhì)量　1 d體質(zhì)量　3 d體質(zhì)量　5 d體質(zhì)量　7 d體質(zhì)量　9 d體質(zhì)量　11 d體質(zhì)量　14 d體質(zhì)量1　23.27±1.74　21.22±1.23　21.59±2.03* 22.07±1.65* 22.45±1.62* 23.43±1.38* 24.03±1.08* 25.11±1.45* 26.10±1.39* 2　23.24±1.13　20.98±1.05　22.18±1.32* 22.53±1.66* 22.69±1.32* 23.58±1.2* 24.25±1.45* 25.57±1.63* 26.89±1.30 3　23.66±1.25　20.86±1.73　22.98±1.80　23.29±1.6　23.71±1.57　24.96±1.28　25.13±1.27　26.95±1.35　27.97±1.12 4　23.15±1.61　21.23±0.96　23.34±1.22　23.8±1.73　24.06±1.49　24.98±1.37　25.75±1.33　27.46±1.63　27.66±1.49對照組　23.46±1.23　20.71±1.05　23.72±1.67　24.06±2.0　24.35±1.65　25.16±1.30　25.84±1.56　27.05±1.36　28.15±1.55

參考文獻(xiàn)

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中圖分類號：R282.710.7

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）15-0037-02

*通訊作者