高志剛，袁永紅，詹建華，潘開宇

(杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 兒科，浙江 杭州 311200)

1,25二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對哮喘CD4+CD25+T細(xì)胞、TGF-β1及VEGF影響研究

高志剛Δ，袁永紅，詹建華，潘開宇

(杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 兒科，浙江 杭州 311200)

目的 探討1,25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對哮喘患者CD4+CD25+T細(xì)胞、TGF-β1及VEGF的影響。方法 收集56例支氣管哮喘患者，隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各28例，分別給予相應(yīng)的藥物治療，治療結(jié)束后，對所有患者的靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平、血清TGF-β1、VEGF水平、ACT評分及肺功能情況進(jìn)行檢測。結(jié)果 治療后，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平較高(P<0.05)；血清TGF-β1水平較高(P<0.05)；血清VEGF水平較低(P<0.05)；FEV1%、FEV1/ FVC值較高(P<0.05)；ACT評分較高(P<0.05)。結(jié)論 1,25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力，改善肺功能和治療效果。

1,25二羥維生素D3；脾氨肽口服凍干粉；哮喘；CD4+CD25+T細(xì)胞；TGF-β1；VEGF

全世界約有3億哮喘患者[1]，發(fā)病率以每10年20%～50%的比率增長，我國約有1000萬～3000萬哮喘患者[2]，患病率為0.31%～3.38%，并且有不斷增加的趨勢。現(xiàn)有對哮喘的治療臨床多用布地奈德吸入療法，雖然糖皮質(zhì)激素的作用比較明顯，但是其作用是非特異性的，長期使用可以引起機(jī)體一系列的代謝及內(nèi)分泌的紊亂。隨著現(xiàn)代分子免疫學(xué)及遺傳學(xué)方面研究的進(jìn)展，人們認(rèn)為免疫因素在哮喘的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作[3]，治療上加用免疫調(diào)節(jié)相關(guān)藥物可以取得更好的療效。研究顯示，脾氨肽佐治哮喘能更有效地控制哮喘癥狀[4]。本研究探討1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對哮喘患兒的影響。

1 資料與方法

1.1.1 臨床資料：收集杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院兒科2013年12月～2015年7月的確診為支氣管哮喘的患兒56例。將所有患者按照隨機(jī)數(shù)字表分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各28例患者，實(shí)驗(yàn)組男性13例，女性15例，年齡5～10歲，平均年齡(7.14±0.91)歲，病程0.5～4.1年，平均病程(3.31±0.80)年；對照組男性14例，女性14例，年齡5～10歲，平均年齡(7.12±0.99)歲，病程0.6～4.2年，平均病程(3.20±0.78)年。2組患兒的年齡分布、性別組成、病程等一般臨床資料方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《兒童支氣管哮喘的診斷及治療》[5]的5～10歲兒童，存在咳嗽、喘息、呼吸困難等臨床表現(xiàn)，并經(jīng)X線等影像學(xué)檢查排除其他肺部感染及占位性病變。本研究獲得患者知情同意，且得到本院倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個月內(nèi)合并感染性疾病，應(yīng)用任何類型或劑量的抗生素、糖皮質(zhì)激素等治療的患兒；②合并先天性免疫功能缺陷或近期服用影響免疫功能的藥物的患兒；③存在心血管系統(tǒng)疾病或嚴(yán)重肝腎功能不全等基礎(chǔ)疾病的患兒。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有患者均嚴(yán)格按照全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA方案)治療。對照組患者給予1，25-二羥維生素D3 800 IU/d口服。實(shí)驗(yàn)組患者在對照組基礎(chǔ)上給予脾氨肽口服凍干粉(商品名：復(fù)可托，浙江豐安生物制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H1097021)4 mg，1次/天睡前涼開水沖服。1個月為1個周期，2組患者均治療2個周期。

1.2.2 血液指標(biāo)檢測：酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)水平，試劑盒購買于羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司；雙抗體蛋白夾心法檢測CD4+CD25+T細(xì)胞水平，試劑盒購買于羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司。DG5033A全自動酶標(biāo)儀(華東電子)。

1.2.3 肺功能及ACT評分檢測：采用HI-101肺功能檢測儀(北京裕天醫(yī)療技術(shù))，分別于治療前后對患者第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比( FEV1% )以及FEV1/ FVC值；根據(jù)哮喘控制測試(ACT評分)表[6]，在治療前后對患者進(jìn)行評分，來評估對哮喘病情的控制情況：未控制：≤19分，部分控制：20～24分，控制良好：≥25分。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者血CD4+CD25+T細(xì)胞及TGF-β1水平比較 治療后2組患者ACT、血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1水平均明顯改善，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者ACT、血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1水平較高(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后2組患者ACT 、CD4+CD25+T、TGF-β1水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清VEGF水平比較 治療后2組患者的血清VEGF水平均明顯下降，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者血清VEGF水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

組別 例數(shù)時間VEGF(pg/mL) 對照組28治療前261 54±30 95治療后175 34±20 17?實(shí)驗(yàn)組28治療前253 44±32 54治療后102 43±12 33?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值比較 治療后2組患者的肺功能均明顯改善，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值明顯升高(P<0.05)。見表3。

組別 例數(shù)時間FEV1%FEV1/FVC(%)對照組28治療前64 71±7 2952 84±6 32治療后77 54±11 02?65 56±8 36?實(shí)驗(yàn)組28治療前64 36±7 3752 58±6 85治療后89 74±10 28?#72 15±9 47?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

支氣管哮喘的發(fā)生與遺傳因素、性別、肥胖、種族、變應(yīng)原暴露、呼吸道感染、空氣污染、社會環(huán)境等因素有關(guān)，其中環(huán)境因素是哮喘發(fā)生發(fā)展的重要原因[7]，其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，免疫相關(guān)機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)。研究認(rèn)為[8]，哮喘患者在受到過敏原刺激后，B7和CD28細(xì)胞結(jié)合，激活T淋巴細(xì)胞細(xì)胞，產(chǎn)生氣道免疫炎癥反應(yīng)；外周血中存在組成性的不依賴抗原刺激的Th1異常表達(dá)，Th1/Th2合成分泌失衡，機(jī)體免疫功能受損，刺激炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，是哮喘發(fā)病的基礎(chǔ)；氣道炎癥反應(yīng)反復(fù)、慢性發(fā)作，刺激細(xì)胞外基質(zhì)聚集、新生血管生成、平滑肌細(xì)胞增殖，并最終形成氣道重塑，導(dǎo)致氣道阻塞和非特異性氣道高反應(yīng)。脾氨肽口服凍干粉是一種免疫體調(diào)節(jié)劑，含有多種免疫調(diào)節(jié)因子和氨基酸，用于免疫缺陷、免疫功能低下、自身免疫功能紊亂等疾病的治療，已有研究顯示[9]，對小兒哮喘具有較好的療效，并能調(diào)節(jié)患兒免疫功能平衡,其能夠通過免疫信息傳遞、淋巴細(xì)胞活化及受體調(diào)節(jié)等3個環(huán)節(jié)來發(fā)揮作用；通過加強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的殺傷效應(yīng)、協(xié)同效應(yīng)、增強(qiáng)效應(yīng)和復(fù)制效應(yīng)，來提高機(jī)體的免疫功能，從而發(fā)揮排斥抗原性改變的自身細(xì)胞及抗細(xì)菌、霉菌和病毒性細(xì)胞內(nèi)感染的作用。1，25-(OH)2-VitD3是維生素D3的活性形式，維生素D具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠降低細(xì)胞通透性，減少過敏物質(zhì)透過損傷氣道上皮細(xì)胞，對哮喘患者氣道起到保護(hù)作用。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1與對照組比較明顯升高(P<0.05)，證實(shí)了1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠改善患者的免疫功能。CD4+CD25+T細(xì)胞分為效應(yīng)性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞兩種，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)及免疫耐受介導(dǎo)作用的調(diào)節(jié)細(xì)胞，由胸腺合成分泌，具有免疫抑制和免疫無能性功能。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與哮喘的發(fā)生關(guān)系密切。TGF-β1具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的作用，能夠促進(jìn)損傷氣道的修復(fù)，抑制炎癥細(xì)胞表達(dá)，減輕氣道炎癥，還對Th2具有促進(jìn)和抑制雙重作用，具有免疫調(diào)節(jié)功能。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者血清VEGF水平與對照組比較明顯降低(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠防止哮喘患者的氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是指哮喘患者的氣道、平滑肌不可逆性的增厚，是氣道功能減退的基礎(chǔ)。VEGF屬于血小板生長因子家族，能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、生長，促進(jìn)新生血管形成，對上皮細(xì)胞的生長也有促進(jìn)作用。在支氣管哮喘發(fā)生過程中，VEGF能夠刺激嗜酸性粒細(xì)胞活化、趨化以及新生血管形成來增強(qiáng)氣道炎癥反應(yīng)，同時使呼吸道粘膜血管化、通透性增加，加速血管重構(gòu)過程。FEV1%降低與呼氣性的呼吸困難有關(guān)，是反映兒童支氣管哮喘嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[11]，實(shí)驗(yàn)組患者的FEV1%、FEV1/ FVC是氣道阻塞的肺量測定，比值越小，提示肺功能越差。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較明顯升高(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠提高哮喘患者的肺功能。

本實(shí)驗(yàn)通過對56例支氣管哮喘患者進(jìn)行分析，1，25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力。

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(編校：譚玲)

Effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF-β1 and VEGF in patients with asthma

GAO Zhi-gangΔ, YUAN Yong-hong, ZHAN Jian-hua, PAN Kai-yu

(Department of Pediatrics, The First People’s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou City, Hangzhou 311200, China)

ObjectiveTo analysis the effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF- β1 and VEGF in patients with asthma.Methods56 patients who were diagnosed with bronchial asthma were randomly divided into experiment group and control group, 28 cases in each group. Patients were given the appropriate drug treatment, after the treatment,the venous blood level of CD4+CD25+T cells, the serum levels of TGF-β1 and VEGF, the ACT score and pulmonary function were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the venous blood level of CD4+CD25+T cells was higher in the experiment group(P<0.05);the serum TGF-β1 level was higher(P<0.05);the serum VEGF level was lower(P<0.05); the FEV1% and FEV1/ FVC were higher(P<0.05); the ACT score was higher(P<0.05).ConclusionThe 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder can improve significantly the venous blood level of CD4+CD25+T cells and the serum TGF-β1 level, reduce serum VEGF level in patients with bronchial asthma, improve immunity, ameliorate lung function and treatment effect.

1,25-(OH)2-VitD3; spleen ammonia peptide oral freeze dry powder; asthma; CD4+CD25Tcells; TGF- β1; VEGF

高志剛，通信作者，男，本科，主治醫(yī)生，研究方向：小兒呼吸，E-mail：gaozhiganghz15@163.com。

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1005-1678(2016)02-0094-03