曹偉麗, 陳 紅

(武漢大學(xué)中南醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖北 武漢 430071)

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·臨床研究·

EMT患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、炎性細(xì)胞因子水平的變化及意義

曹偉麗, 陳 紅

(武漢大學(xué)中南醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖北 武漢 430071)

目的 探討子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMT)患者血清及腹腔液中CA125、VEGF及其炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義。方法 選擇取2011年1月至2015年6月均經(jīng)病理證實(shí)為EMT的109例患者為EMT組(r-AFS Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期64例),選擇同期病理確診為婦科良性病變患者79例為對(duì)照組。檢測(cè)并分析EMT組、對(duì)照組患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化。結(jié)果 EMT組患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且隨著r-AFS分期的增加,EMT Ⅲ～Ⅳ患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 EMT患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α均明顯高表達(dá),且隨著r-AFS分期的增加,患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均提高。

子宮內(nèi)膜異位癥； 血清； 腹腔液

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMT)指子宮內(nèi)膜組織在子宮腔被覆內(nèi)膜及子宮肌層以外的部位生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及反復(fù)出血,形成結(jié)節(jié)或包塊,具有侵襲性和易復(fù)發(fā)等特點(diǎn),臨床引起疼痛和不育等,是育齡期婦女常見婦科良性病變,其發(fā)病率為10%～15%,嚴(yán)重影響婦女身心健康和生活質(zhì)量[1]。此病臨床表現(xiàn)多樣,早期診斷多困難,約25%病例無(wú)任何癥狀,僅在腹腔鏡或開腹手術(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn),臨床上常引起誤診。研究[2]指出,EMT為一種血管生成依賴性疾病,內(nèi)膜的種植過程是免疫應(yīng)答異常、產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)和新生血管的過程,患者血清和腹腔液中巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯增多,活性增強(qiáng),分泌的細(xì)胞因子活性物質(zhì)增加,且血清和腹腔液中CA125及TNF-α的濃度與正常人存在明顯差異。本研究探討EMT患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2015年1月在武漢大學(xué)中南醫(yī)院婦產(chǎn)科行腹腔鏡手術(shù),術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)為EMT的109例患者為EMT組,年齡23～44歲,平均(31±2)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)平均為(22.9±2.5)kg/m2,平均生育次數(shù)為(2±1)次,盆腔手術(shù)史為(2±2)次；根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(r-AFS)進(jìn)行分期,其中Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期64例。將r-AFⅠ～Ⅱ期45例分為EMT重癥組,Ⅲ～Ⅳ期64例為EMT輕癥組。另選取同期在我院行腹腔鏡手術(shù)治療,且術(shù)后病理確診為婦科良性病變女性患者79例為對(duì)照組,年齡23～47歲,平均(34±4)歲,BMI為(23.1±2.4)kg/m2；平均生育次數(shù)為(1±1)次,盆腔手術(shù)史為(1±1)次。兩組患者年齡、BMI、平均生育次數(shù)、盆腔手術(shù)史差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),均簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn): 符合相關(guān)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；無(wú)嚴(yán)重肝腎疾病；平素月經(jīng)規(guī)則；無(wú)子宮內(nèi)膜癌；無(wú)盆腔炎；無(wú)其他嚴(yán)重腦部器質(zhì)性病變。排除標(biāo)準(zhǔn): 內(nèi)分泌疾病者；近3個(gè)月內(nèi)接受激素治療者；免疫疾病患者；子宮腺肌患者；代謝性疾病患者；子宮肌瘤患者；生殖道結(jié)核患者；卵巢癌患者；有其他嚴(yán)重精神疾病者；有酒精藥物濫用史。

1.3 方法

兩組患者均于術(shù)前空腹抽取外周靜脈血,常溫下靜置,離心半徑10cm,3000r/min,離心12min,取上清液置-80℃冰箱凍存待測(cè)。EMT組和對(duì)照組患者均在全身麻醉下行腹腔鏡手術(shù),通過穿刺針或注射器直視下抽取子宮膀胱陷凹和子宮直腸陷凹腹腔液,常溫下靜置,離心半徑10cm,3000r/min,離心12min,取上清液置于-80℃冰箱凍存待測(cè)。

采用ELISA試劑盒檢測(cè)血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的含量,操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。檢測(cè)在相同實(shí)驗(yàn)條件下完成,均使用同一批試劑。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 EMT組與對(duì)照組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 EMT組與對(duì)照組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

2.2 EMT組與對(duì)照組患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT組患者腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

2.3 不同疾病分期EMT患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

2.4 不同疾病分期EMT患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4。

表2 EMT組與對(duì)照組患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

表3 不同疾病分期EMT患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

表4 不同疾病分期EMT患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

3 討 論

EMT為育齡期婦女婦科常見疾病，臨床表現(xiàn)為盆腔慢性疼痛、不孕等，有侵襲性生長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作及轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響婦女的身心健康，其發(fā)病機(jī)制目前還未完全闡明，主要與經(jīng)血逆流種植學(xué)說(shuō)、靜脈和淋巴播散學(xué)說(shuō)、免疫學(xué)說(shuō)等[3-4]。研究[5]發(fā)現(xiàn)，逆流經(jīng)血中的子宮內(nèi)膜細(xì)胞能夠成功異位種植和存活，與腹腔免疫功能紊亂、炎性細(xì)胞因子分泌增加及盆腔內(nèi)無(wú)菌性炎癥反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)。EMT患者血清和腹腔液中多種細(xì)胞因子參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，降低了對(duì)異位免疫的監(jiān)視，促進(jìn)血管生成，導(dǎo)致異位內(nèi)膜的種植與生長(zhǎng)。研究表明，異位內(nèi)膜本身及其周圍組織血液供應(yīng)的建立和維持是EMT的發(fā)病基礎(chǔ)。目前已發(fā)現(xiàn)許多肽類生長(zhǎng)因子以自分泌或旁分泌形式促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與分化，誘導(dǎo)新生血管形成，而EMT患者異位內(nèi)膜上血管內(nèi)皮細(xì)胞增生活躍，細(xì)胞因子水平明顯增高。正常腹腔液中存在大量巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等，其中巨噬細(xì)胞占90%以上，異位內(nèi)膜可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)細(xì)胞免疫及體液免疫，導(dǎo)致腹腔液中巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，活化程度增強(qiáng)，被激活的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)與抗感染作用。

VEGF主要由腹腔內(nèi)活化的巨噬細(xì)胞分泌，是目前發(fā)現(xiàn)特異性最高、作用最強(qiáng)的促血管生成因子，在血管生成、炎癥反應(yīng)及組織重構(gòu)中起重要作用。在EMT的發(fā)生發(fā)展中，VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，促進(jìn)毛細(xì)血管增生，為異位的腺上皮細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)支持，促進(jìn)異位內(nèi)膜的種植與生長(zhǎng)[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，EMT 患者血清和腹腔液中VEGF水平明顯高于對(duì)照組，隨著分期的增加，VEGF水平也相應(yīng)升高，說(shuō)明VEGF參與著EMT的發(fā)病過程，并與疾病的發(fā)展相關(guān)。比較腹腔液和血清中VEGF含量時(shí)發(fā)現(xiàn)， 腹腔液中VEGF 水平明顯高于血清中水平， 推測(cè)與EMT 多發(fā)生在腹腔有關(guān)，腹腔微環(huán)境改變與EMT 發(fā)病及嚴(yán)重程度相關(guān)。

CA125是一種高分子糖蛋白，存在于胚胎體腔上皮，在子宮內(nèi)膜、子宮頸管內(nèi)膜及腹膜、胸膜組織中均可檢測(cè)出[7-8]。血清CA125是上皮性卵巢腫瘤的標(biāo)志物，與子宮內(nèi)膜異位癥密切相關(guān)。在本研究中，EMT組血清和腹腔液中CA125水平均高于對(duì)照組，隨著分期的增加，CA125水平也相應(yīng)升高，說(shuō)明CA125參與EMT的發(fā)病過程。

當(dāng)子宮內(nèi)膜種植入腹腔時(shí),常引起局部炎癥環(huán)境,導(dǎo)致局部免疫功能減弱,不能清除逆流的內(nèi)膜碎片,從而引發(fā)腹腔液中炎癥反應(yīng)。在此過程中，巨噬細(xì)胞等分泌的多種細(xì)胞因子分如IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等濃度增高。

IL-1家族包括IL-1α、IL-1β及IL-1Ra，其中IL-1β多出現(xiàn)在血循環(huán)中，促進(jìn)免疫應(yīng)答,參與炎癥反應(yīng)。IL-6 可由表皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞表達(dá)，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及組織修復(fù)過程中起重要作用。IL-8 可由巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，具有多重作用，既可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)過程，亦可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)血管生成。腹膜間皮細(xì)胞和異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞可合成IL-8 并大量釋放入腹腔液中；在腹腔炎癥環(huán)境中， 巨噬細(xì)胞亦可大量釋放IL-8，IL-8 的高表達(dá)可誘導(dǎo)異位內(nèi)膜基底部毛細(xì)血管的形成， 進(jìn)而誘導(dǎo)異位內(nèi)膜的增殖和浸潤(rùn)。IL-8可在EMT 機(jī)體子宮內(nèi)膜中高表達(dá)，當(dāng)經(jīng)血逆流至腹腔，子宮內(nèi)膜中的IL-8 可被帶至腹腔，進(jìn)一步提高腹腔液中IL-8 的含量[9]。TNF-α是一種由中性粒細(xì)胞、活化的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK 細(xì)胞分泌的多功能的細(xì)胞因子，它參與多種生理和免疫過程，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、炎癥介導(dǎo)、細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡等作用。越來(lái)越多的證據(jù)表明，免疫功能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病和發(fā)展中扮演著重要的角色。TNF-α的雙重生物學(xué)活性使得它在正常情況下具有抗腫瘤、抗感染等作用，對(duì)機(jī)體有利，但釋放過多或與其他細(xì)胞因子的關(guān)系失調(diào)時(shí)又會(huì)引起機(jī)體一系列病理?yè)p傷，參與疾病的發(fā)病機(jī)制[10]。在本研究中，EMT組血清和腹腔液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于對(duì)照組，隨著分期的增加，IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平也相應(yīng)升高，說(shuō)明IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α參與EMT的發(fā)病過程。

目前，腹腔鏡檢查是診斷EMT的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但因其存在的有創(chuàng)傷、價(jià)格昂貴、手術(shù)并發(fā)癥等缺點(diǎn)，無(wú)法普及，同時(shí)對(duì)一些盆腔重度粘連的患者，腹腔鏡檢查也效果不佳。經(jīng)陰道超聲僅對(duì)卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫有較高的檢出率，對(duì)于盆腔子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔粘連及深度浸潤(rùn)型子宮內(nèi)膜異位癥檢出率不高。且目前沒有一種腫瘤標(biāo)志物可作為早期診斷子宮內(nèi)膜異位癥的獨(dú)立指標(biāo)，因此尋求更多的聯(lián)合檢測(cè)指標(biāo)成為新的研究方向。所以，探討EMT患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義， 同時(shí)參考病史、臨床癥狀、體征及其他輔助檢查方法，可以為早期發(fā)現(xiàn)并診斷EMT提供新的思路。

本研究病例數(shù)較少，一定程度上可能影響研究的結(jié)果和精確性。同時(shí)，沒有分析各種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏性和特異性，需要將來(lái)進(jìn)一步的深入研究。

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CA125 and cytokines levels in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis

CAOWei-li,CHENHong

(Dept. of Obstetrics and Gynecology, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, Hubei Province, China)

Objective To investigate the CA125 and cytokines levels in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis (EMT), and their clinical significance. Methods One hundred and nine EMT patients, including 45 cases of stage Ⅰ-Ⅱ and 64 cases of stage Ⅲ-Ⅳ were enrolled from 2011 January to 2015 August; 64 patients with benign gynecological diseases were also enrolled as control group. The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, IL-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid were measured by ELISA method. Results The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid of EMT patients were significantly higher than those in control group(allP<0.05). The level of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid of EMT Ⅲ-Ⅳ group were significantly higher than those in EMT Ⅰ-Ⅱ group(allP<0.05). Conclusion The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid are increased in EMT patients and the levels are increasing with the disease stages.

endometriosis; serum; peritoneal fluid

10.16118/j.1008-0392.2016.01.018

2015-10-15

曹偉麗(1984—),女,主治醫(yī)師,學(xué)士.E-mail: 2544944770@qq.com

陳 紅.E-mail: chen.hong888@126.com

R 711.71

A

1008-0392(2016)01-0085-04