周　寧　曲顏麗　唐　勇

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院消化科，新疆　烏魯木齊　830000)

樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

周寧曲顏麗唐勇

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院消化科，新疆烏魯木齊830000)

〔摘要〕目的探討樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(DC-CIK)治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。方法隨機(jī)抽取該院收治的老年中晚期食道癌患者8例，分別采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，在體外誘導(dǎo)產(chǎn)生DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞，分3次回輸給對(duì)應(yīng)的患者，觀察治療效果，分別在第1次回輸1 w前以及每次回輸結(jié)束后1個(gè)月采集患者的外周血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者淋巴細(xì)胞亞群的變化狀況。結(jié)果經(jīng)過治療，有4例完全緩解，3例部分緩解，1例出現(xiàn)輕微體溫升高；同時(shí)各患者外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)，以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著。結(jié)論采用DC-CIK細(xì)胞方法治療老年中晚期食道癌效果顯著，可有效改善患者免疫抑制狀態(tài)，提高機(jī)體免疫效應(yīng)，同時(shí)淋巴細(xì)胞亞群中各指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn)，無嚴(yán)重不良反應(yīng)。

〔關(guān)鍵詞〕樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞； 中晚期食道癌；淋巴細(xì)胞亞群

目前治療食道癌的方法成效并不顯著，藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的分辨能力差，容易產(chǎn)生各種不良反應(yīng)，而且腫瘤細(xì)胞極易產(chǎn)生毒性，損害機(jī)體的免疫功能。最大程度保存患者免疫細(xì)胞的活性是治療老年中晚期食道癌的核心。過繼細(xì)胞治療中晚期食道癌中最具代表性的就是樹突細(xì)胞(DC)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)。有研究〔1〕指出應(yīng)用DC或者CIK治療老年食道癌能起到免疫性和非免疫性雙重抵抗腫瘤細(xì)胞的功效。本研究旨在探究DC-CIK細(xì)胞治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。

1對(duì)象與方法

1.1一般資料選取新疆腫瘤醫(yī)院消化內(nèi)科收治的老年中晚期食道癌患者8例，男5例，女3例，年齡64～75 歲，TNM分期：Ⅲ期3例，Ⅳ期5例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有經(jīng)電子胃鏡檢查活檢明確病理組織學(xué)診斷確切，食道鋇餐、淺表淋巴結(jié)彩超及胸部CT等檢查診斷為中晚期食道癌；②治療前1個(gè)月內(nèi)未行放化療及免疫治療；③患者年齡≥60歲，預(yù)計(jì)生存期>5個(gè)月；④無嚴(yán)重的細(xì)菌、病毒感染；⑤患者本人和家屬均知情同意；⑥KPS評(píng)分〔2〕≥60分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①正在接受放療、化療或其他全身性抗腫瘤治療方式者；②同時(shí)有其他惡性腫瘤或傳染性疾病者；③經(jīng)過手術(shù)，傷口并未完全愈合者；④對(duì)生物制品過敏者；⑤實(shí)驗(yàn)指標(biāo)異常者。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑倒置顯微鏡(日本Olympus公司)；流式細(xì)胞儀(型號(hào)為FACS Vantage SE，美國(guó)Thermo公司)；生物安全柜和細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó)BD公司)；GT-T551(日本Takara公司)；臨床使用標(biāo)準(zhǔn)rGM-CSF、LTS1077、和rIL-4(天津?yàn)笊镏破酚邢薰?；淋巴細(xì)胞分離液(杭州四季青生物工程材料有限公司)；人血清蛋白(美國(guó)Qiagen公司)。

1.2.2DC和CIK細(xì)胞分離及培養(yǎng)方法①利用細(xì)胞分離機(jī)在無菌的環(huán)境下取患者全血50～60 ml，加入淋巴細(xì)胞分離液來制備單個(gè)核細(xì)胞；②在37℃恒溫條件下，CO2含量為5%左右培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞大約3 h，收集培養(yǎng)箱中的懸浮細(xì)胞，準(zhǔn)備培養(yǎng)CIK細(xì)胞；③取貼壁細(xì)胞加入白細(xì)胞介素(IL)-4 500 U/ml、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)1 000 U/ml，放在37℃恒溫以及飽和濕度條件下，CO2含量約5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d，更換培養(yǎng)液，加入腫瘤壞死因子(TNF)-α 100 ng/ml培養(yǎng)3 d〔3〕，懸浮的成熟DC細(xì)胞備用；④將步驟②中收集到的懸浮細(xì)胞按照1×106/ml的密度種在培養(yǎng)瓶中，加入IL-4 2 500 U/ml、干擾素(IFN)-γ 100 ng/ml，24 h后加入Anti-CD3 單抗50 ng/ml〔4〕，在第11天收集成熟的CIK細(xì)胞備用。

1.2.3DC-CIK治療方法所有患者均在采集細(xì)胞后的第7、9、11、13天分6次予1 ml DC細(xì)胞液進(jìn)行相應(yīng)注射，分別為雙側(cè)鎖骨下、雙側(cè)腋下以及雙側(cè)腹股溝區(qū)，每位患者注射的總DC細(xì)胞數(shù)為3×107～10×107，在采集細(xì)胞后的第11、13天靜脈回輸2×109～15×109的CIK細(xì)胞。

1.3檢測(cè)指標(biāo)分別在細(xì)胞回輸治療前1 w和治療后1個(gè)月抽取患者外周血2 ml(需要進(jìn)行抗凝處理)，采用流式細(xì)胞檢測(cè)儀測(cè)定淋巴細(xì)胞的免疫功能指標(biāo)： CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2的動(dòng)態(tài)變化。同時(shí)對(duì)本組患者治療后出現(xiàn)的異常體征如惡心、嘔吐、體溫升高、頭暈?zāi)垦５冗M(jìn)行分析。

1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)兩組患者治療1個(gè)月后行CT掃描診斷，評(píng)估疾病狀態(tài)和治療效果；3個(gè)月后再一次進(jìn)行評(píng)估，之后每3個(gè)月復(fù)查一次。在此過程中，如果患者出現(xiàn)異常反應(yīng)，隨時(shí)復(fù)查。按照腫瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)〔5〕分為：完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、 病情穩(wěn)定(SD)、 病情進(jìn)展(PD)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2、t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1療效評(píng)價(jià)本組患者DC-CIK細(xì)胞的治療效果(CR 4例、PR 31例、SD 0例，PD 1例)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)治療效果(CR 1例、PR 1例、SD 2例、PD 4例；χ2=38.56,2.486,4.861,3.568；均P<0.05)。

2.2治療前后淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)變化情況外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)治療前和治療3個(gè)療程后變化顯著(P<0.05)。見表1。

2.3不良反應(yīng)8例患者經(jīng)過DC-CIK治療后，1例患者出現(xiàn)體溫升高現(xiàn)象，經(jīng)物理降溫，短時(shí)間內(nèi)體溫恢復(fù)正常，無其他嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。

表1　外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)變化±s)

3討論

食道癌起病隱匿，多數(shù)患者就診時(shí)已是中晚期。盡管治療食道癌的方式不斷改進(jìn)，但是食道癌患者5～10年存活率仍在25%以下，通過手術(shù)治療后的復(fù)發(fā)率高達(dá)約65%。有資料稱〔6〕，DC療法是目前一種很有前途的惡性腫瘤治療手段。有文獻(xiàn)報(bào)道〔7〕，使用DC疫苗治療12例胃腸道惡性腫瘤患者后，患者病情均有明顯的好轉(zhuǎn)。還有研究表明〔8〕，DC細(xì)胞是已知的功能最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，能分泌出很多種細(xì)胞因子，誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生毒性，增強(qiáng)B細(xì)胞的增殖活性，激活淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答系統(tǒng)功能，對(duì)腫瘤免疫發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

CIK細(xì)胞是在體外經(jīng)過多種培養(yǎng)細(xì)胞因子激活后所獲得的對(duì)腫瘤細(xì)胞具有巨大殺傷力的T細(xì)胞，具有非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性、高效、廣譜殺死腫瘤細(xì)胞活性的免疫作用，它的主要作用機(jī)制是殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖、激活淋巴細(xì)胞免疫功能等。在惡性腫瘤的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，CIK細(xì)胞可以較好地控制疾病的發(fā)展和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。理論上，DC細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞可以產(chǎn)生非特異性免疫和特異性免疫的雙重抵抗腫瘤細(xì)胞作用。本研究結(jié)果表明， DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合治療中晚期食道癌效果顯著，無明顯不良反應(yīng)，淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)也有明顯好轉(zhuǎn)，其中以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著，可以適當(dāng)推廣。文中不足之處在于樣本選取稍少，而且DC和CIK細(xì)胞培養(yǎng)過程中，受到很多限制。

4參考文獻(xiàn)

1蔡艷榮.DC-CIK聯(lián)合化療在晚期腎癌患者中的綜合應(yīng)用價(jià)值〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2015；30(4):559-62.

2譚潔,王彬,何志潔,等.自體DC-CIK細(xì)胞治療晚期腎細(xì)胞癌的療效〔J〕.中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2013；20(6):711-6.

3殷先堯,鄭美娟,徐元宏.T細(xì)胞亞群與慢性丙型肝炎病毒相關(guān)性分析〔J〕.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014；49(3)：327-30.

4張國(guó)慶，焦順昌，溫新宇，等.大腸癌患者與正常健康人淋巴細(xì)胞表型差異分析〔J〕.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2012；28(7)：735-7.

5何立香,蔣思卿,彭大為.DC-CIK治療惡性腫瘤的研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2013；19(1):59-62.

6羅芳,石君.術(shù)后輔助化療聯(lián)合免疫治療對(duì)結(jié)腸癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的影響〔J〕.臨床合理用藥雜志,2015；8(2C):111-2.

7張國(guó)慶，趙宏，溫新宇，等.大腸癌患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群變化〔J〕.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2013；35(2):155-60.

8楊蕾,莊蕓,錢錫峰,等.老年免疫性血小板減少癥患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)及其臨床意義〔J〕.臨床血液學(xué)雜志,2015；(3):384-8，391.

〔2015-10-15修回〕

(編輯滕欣航)

基金項(xiàng)目：新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No.XJC201384)；新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金(No.2013211A067)

通訊作者：唐勇(1968-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。

〔中圖分類號(hào)〕R614

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)11-2692-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.056

第一作者：周寧(1980-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。