周 寧 曲顏麗 唐 勇
(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院消化科,新疆 烏魯木齊 830000)
樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響
周寧曲顏麗唐勇
(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院消化科,新疆烏魯木齊830000)
〔摘要〕目的探討樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(DC-CIK)治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。方法隨機(jī)抽取該院收治的老年中晚期食道癌患者8例,分別采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞,在體外誘導(dǎo)產(chǎn)生DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞,分3次回輸給對(duì)應(yīng)的患者,觀察治療效果,分別在第1次回輸1 w前以及每次回輸結(jié)束后1個(gè)月采集患者的外周血,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者淋巴細(xì)胞亞群的變化狀況。結(jié)果經(jīng)過治療,有4例完全緩解,3例部分緩解,1例出現(xiàn)輕微體溫升高;同時(shí)各患者外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn),以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著。結(jié)論采用DC-CIK細(xì)胞方法治療老年中晚期食道癌效果顯著,可有效改善患者免疫抑制狀態(tài),提高機(jī)體免疫效應(yīng),同時(shí)淋巴細(xì)胞亞群中各指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn),無嚴(yán)重不良反應(yīng)。
〔關(guān)鍵詞〕樹突細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞; 中晚期食道癌;淋巴細(xì)胞亞群
目前治療食道癌的方法成效并不顯著,藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的分辨能力差,容易產(chǎn)生各種不良反應(yīng),而且腫瘤細(xì)胞極易產(chǎn)生毒性,損害機(jī)體的免疫功能。最大程度保存患者免疫細(xì)胞的活性是治療老年中晚期食道癌的核心。過繼細(xì)胞治療中晚期食道癌中最具代表性的就是樹突細(xì)胞(DC)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)。有研究〔1〕指出應(yīng)用DC或者CIK治療老年食道癌能起到免疫性和非免疫性雙重抵抗腫瘤細(xì)胞的功效。本研究旨在探究DC-CIK細(xì)胞治療老年中晚期食道癌的效果及對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。
1對(duì)象與方法
1.1一般資料選取新疆腫瘤醫(yī)院消化內(nèi)科收治的老年中晚期食道癌患者8例,男5例,女3例,年齡64~75 歲,TNM分期:Ⅲ期3例,Ⅳ期5例。納入標(biāo)準(zhǔn):①所有經(jīng)電子胃鏡檢查活檢明確病理組織學(xué)診斷確切,食道鋇餐、淺表淋巴結(jié)彩超及胸部CT等檢查診斷為中晚期食道癌;②治療前1個(gè)月內(nèi)未行放化療及免疫治療;③患者年齡≥60歲,預(yù)計(jì)生存期>5個(gè)月;④無嚴(yán)重的細(xì)菌、病毒感染;⑤患者本人和家屬均知情同意;⑥KPS評(píng)分〔2〕≥60分。排除標(biāo)準(zhǔn):①正在接受放療、化療或其他全身性抗腫瘤治療方式者;②同時(shí)有其他惡性腫瘤或傳染性疾病者;③經(jīng)過手術(shù),傷口并未完全愈合者;④對(duì)生物制品過敏者;⑤實(shí)驗(yàn)指標(biāo)異常者。
1.2方法
1.2.1儀器與試劑倒置顯微鏡(日本Olympus公司);流式細(xì)胞儀(型號(hào)為FACS Vantage SE,美國Thermo公司);生物安全柜和細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國BD公司);GT-T551(日本Takara公司);臨床使用標(biāo)準(zhǔn)rGM-CSF、LTS1077、和rIL-4(天津?yàn)笊镏破酚邢薰?;淋巴細(xì)胞分離液(杭州四季青生物工程材料有限公司);人血清蛋白(美國Qiagen公司)。
1.2.2DC和CIK細(xì)胞分離及培養(yǎng)方法①利用細(xì)胞分離機(jī)在無菌的環(huán)境下取患者全血50~60 ml,加入淋巴細(xì)胞分離液來制備單個(gè)核細(xì)胞;②在37℃恒溫條件下,CO2含量為5%左右培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞大約3 h,收集培養(yǎng)箱中的懸浮細(xì)胞,準(zhǔn)備培養(yǎng)CIK細(xì)胞;③取貼壁細(xì)胞加入白細(xì)胞介素(IL)-4 500 U/ml、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)1 000 U/ml,放在37℃恒溫以及飽和濕度條件下,CO2含量約5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d,更換培養(yǎng)液,加入腫瘤壞死因子(TNF)-α 100 ng/ml培養(yǎng)3 d〔3〕,懸浮的成熟DC細(xì)胞備用;④將步驟②中收集到的懸浮細(xì)胞按照1×106/ml的密度種在培養(yǎng)瓶中,加入IL-4 2 500 U/ml、干擾素(IFN)-γ 100 ng/ml,24 h后加入Anti-CD3 單抗50 ng/ml〔4〕,在第11天收集成熟的CIK細(xì)胞備用。
1.2.3DC-CIK治療方法所有患者均在采集細(xì)胞后的第7、9、11、13天分6次予1 ml DC細(xì)胞液進(jìn)行相應(yīng)注射,分別為雙側(cè)鎖骨下、雙側(cè)腋下以及雙側(cè)腹股溝區(qū),每位患者注射的總DC細(xì)胞數(shù)為3×107~10×107,在采集細(xì)胞后的第11、13天靜脈回輸2×109~15×109的CIK細(xì)胞。
1.3檢測(cè)指標(biāo)分別在細(xì)胞回輸治療前1 w和治療后1個(gè)月抽取患者外周血2 ml(需要進(jìn)行抗凝處理),采用流式細(xì)胞檢測(cè)儀測(cè)定淋巴細(xì)胞的免疫功能指標(biāo): CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2的動(dòng)態(tài)變化。同時(shí)對(duì)本組患者治療后出現(xiàn)的異常體征如惡心、嘔吐、體溫升高、頭暈?zāi)垦5冗M(jìn)行分析。
1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)兩組患者治療1個(gè)月后行CT掃描診斷,評(píng)估疾病狀態(tài)和治療效果;3個(gè)月后再一次進(jìn)行評(píng)估,之后每3個(gè)月復(fù)查一次。在此過程中,如果患者出現(xiàn)異常反應(yīng),隨時(shí)復(fù)查。按照腫瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)〔5〕分為:完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、 病情穩(wěn)定(SD)、 病情進(jìn)展(PD)。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2、t檢驗(yàn)。
2結(jié)果
2.1療效評(píng)價(jià)本組患者DC-CIK細(xì)胞的治療效果(CR 4例、PR 31例、SD 0例,PD 1例)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)治療效果(CR 1例、PR 1例、SD 2例、PD 4例;χ2=38.56,2.486,4.861,3.568;均P<0.05)。
2.2治療前后淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)變化情況外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)治療前和治療3個(gè)療程后變化顯著(P<0.05)。見表1。
2.3不良反應(yīng)8例患者經(jīng)過DC-CIK治療后,1例患者出現(xiàn)體溫升高現(xiàn)象,經(jīng)物理降溫,短時(shí)間內(nèi)體溫恢復(fù)正常,無其他嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。
表1 外周血淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)變化±s)
3討論
食道癌起病隱匿,多數(shù)患者就診時(shí)已是中晚期。盡管治療食道癌的方式不斷改進(jìn),但是食道癌患者5~10年存活率仍在25%以下,通過手術(shù)治療后的復(fù)發(fā)率高達(dá)約65%。有資料稱〔6〕,DC療法是目前一種很有前途的惡性腫瘤治療手段。有文獻(xiàn)報(bào)道〔7〕,使用DC疫苗治療12例胃腸道惡性腫瘤患者后,患者病情均有明顯的好轉(zhuǎn)。還有研究表明〔8〕,DC細(xì)胞是已知的功能最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞,能分泌出很多種細(xì)胞因子,誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生毒性,增強(qiáng)B細(xì)胞的增殖活性,激活淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答系統(tǒng)功能,對(duì)腫瘤免疫發(fā)揮至關(guān)重要的作用。
CIK細(xì)胞是在體外經(jīng)過多種培養(yǎng)細(xì)胞因子激活后所獲得的對(duì)腫瘤細(xì)胞具有巨大殺傷力的T細(xì)胞,具有非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性、高效、廣譜殺死腫瘤細(xì)胞活性的免疫作用,它的主要作用機(jī)制是殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖、激活淋巴細(xì)胞免疫功能等。在惡性腫瘤的臨床研究中發(fā)現(xiàn),CIK細(xì)胞可以較好地控制疾病的發(fā)展和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。理論上,DC細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞可以產(chǎn)生非特異性免疫和特異性免疫的雙重抵抗腫瘤細(xì)胞作用。本研究結(jié)果表明, DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合治療中晚期食道癌效果顯著,無明顯不良反應(yīng),淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)也有明顯好轉(zhuǎn),其中以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著,可以適當(dāng)推廣。文中不足之處在于樣本選取稍少,而且DC和CIK細(xì)胞培養(yǎng)過程中,受到很多限制。
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〔2015-10-15修回〕
(編輯滕欣航)
基金項(xiàng)目:新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No.XJC201384);新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金(No.2013211A067)
通訊作者:唐勇(1968-),男,碩士,主任醫(yī)師,主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。
〔中圖分類號(hào)〕R614
〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A
〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)11-2692-02;
doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.056
第一作者:周寧(1980-),女,碩士,主治醫(yī)師,主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。