亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        川芎嗪對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞磷酸化Bad蛋白和Survivin蛋白表達(dá)的影響

        2016-06-30 01:17:24宋慶嬌榮光影柳朝陽
        中國(guó)老年學(xué)雜志 2016年11期
        關(guān)鍵詞:細(xì)胞凋亡

        張 濤 宋慶嬌 榮光影 柳朝陽 汪 悅

        (佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

        川芎嗪對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞磷酸化Bad蛋白和Survivin蛋白表達(dá)的影響

        張濤宋慶嬌榮光影1柳朝陽2汪悅3

        (佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江佳木斯154007)

        〔摘要〕目的研究川芎嗪(TMP)對(duì)Hela細(xì)胞磷酸化Bad(p-Bad)蛋白和Survivin蛋白表達(dá)的影響。方法四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測(cè)TMP對(duì)Hela細(xì)胞增殖的抑制作用;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western印跡法檢測(cè)p-Bad和Survivin蛋白的表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組相比TMP可抑制Hela細(xì)胞的增殖(P<0.01);增加Hela細(xì)胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01);降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。結(jié)論TMP可抑制Hela細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡,降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表達(dá),這可能是TMP誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。

        〔關(guān)鍵詞〕川芎嗪;宮頸癌;細(xì)胞凋亡;磷酸化Bad蛋白;Survivin蛋白

        川芎嗪(TMP)是中藥川芎根莖中的生物堿單體,臨床上主要用于治療多種心血管疾病〔1,2〕。目前報(bào)道,TMP的抗腫瘤〔3~7〕作用主要見于對(duì)肺癌、白血病、黑色素細(xì)胞瘤和胃癌的抑制作用,TMP對(duì)宮頸癌的抑制及其作用機(jī)制國(guó)內(nèi)外暫無報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在探討TMP誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。

        1材料與方法

        1.1材料細(xì)胞株:Hela細(xì)胞株購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所細(xì)胞庫。 藥物和試劑:TMP純品購(gòu)于Sigma-Aldrich公司。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)購(gòu)于北京拜爾迪生物技術(shù)公司。AV-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒、兔抗人Survivin抗體和抗人β-actin抗體、Bad蛋白磷酸化(p-Bad)抗體購(gòu)于艾美捷科技有限公司。

        1.2方法

        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)Hela細(xì)胞復(fù)蘇后,RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng),37℃、5% CO2培養(yǎng),選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.2.2MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖胰酶消化調(diào)整細(xì)胞濃度為1×104/ml,接種于96孔板,100 μl/孔,培養(yǎng)24 h,分別給予不同濃度的TMP(0,0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 mg/ml)處理,每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔。分別處理(24、48、72)后進(jìn)行檢測(cè),加入MTT溶液(5 mg/ml)20 μl培養(yǎng)4 h,每孔加入200 μl DMSO,于490 nm處檢測(cè)吸光度(OD)值。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組,有細(xì)胞,無藥物。細(xì)胞增殖抑制率(IR)=(1-實(shí)驗(yàn)組OD均值/對(duì)照組OD均值)×100%。

        1.2.3膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin-V FITC)染色流式細(xì)胞儀觀察Hela細(xì)胞凋亡Hela細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中常規(guī)培養(yǎng),24 h后加入TMP(0,0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 mg/ml),培養(yǎng)24 h。根據(jù)試劑盒說明書操作,流式細(xì)胞儀檢測(cè),利用FCSExpress 3.0軟件分析細(xì)胞凋亡。

        1.2.4Western印跡法檢測(cè)Survivin及p-Bad蛋白表達(dá)收集對(duì)照組及TMP(1.0,1.5,2.0 mg/ml)處理的Hela細(xì)胞,提取總蛋白,用Bradford法測(cè)定各組蛋白質(zhì)含量。蛋白上樣后,進(jìn)行凝膠電泳,移膜,4℃用5%脫脂牛奶封閉1 h后加入兔抗人抗體(1∶100),過夜,加二抗(1∶10 000),雜交1 h。采用ECL法分析檢測(cè)結(jié)果,以β-actin為對(duì)照蛋白,各組蛋白條帶進(jìn)行灰度分析,計(jì)算Survivin和p-Bad蛋白表達(dá)水平。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.3軟件進(jìn)行單因素方差分析及LSD檢驗(yàn)。

        2結(jié)果

        2.1TMP抑制Hela細(xì)胞增殖MTT法結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,不同濃度的TMP作用于Hela細(xì)胞可明顯抑制細(xì)胞的增殖(P<0.01);各時(shí)間點(diǎn)均以2.0 mg/ml濃度的抑制率最高,具有劑量依賴性和時(shí)間依賴性。見表1。

        2.2TMP對(duì)Hela細(xì)胞凋亡率的影響不同濃度的TMP作用于Hela細(xì)胞24 h后,與對(duì)照組相比,隨著藥物濃度的增加,早期凋亡率、晚期凋亡率或壞死細(xì)胞逐漸上升(P<0.05,P<0.01)(0.25 mg/ml組除外),具有濃度依賴性,見表2。

        2.3TMP對(duì)Hela細(xì)胞p-Bad蛋白及Survivin蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組相比,不同濃度的TMP作用于Hela細(xì)胞48 h后,可見隨藥物濃度的增高,p-Bad蛋白及Survivin蛋白的表達(dá)逐漸降低,呈一定的濃度依賴性,見表3。

        表1 不同濃度的TMP對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響

        與對(duì)照組比較:1)P<0.01

        表2 TMP對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響

        與對(duì)照組比較:1)P<0.05,2)P<0.01

        表3 TMP對(duì)Hela細(xì)胞磷酸化Bad蛋白和Survivin

        與對(duì)照組比較:1)P<0.01;與TMP 0.25 mg/ml組比較:2)P<0.01;與TMP 1.0 mg/ml組比較:3)P<0.05

        3討論

        宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女生命健康的惡性腫瘤之一,死亡率占女性癌癥的第二位〔8〕。研究證明,500 mg/L TMP對(duì)人胃低分化腺癌有一定殺傷作用,抑制率約為24.4%~28.5%〔3〕;TMP能輕度抑制敏感性白血病K562細(xì)胞的DNA合成〔4〕;≥250 mg/L的TMP對(duì)體外培養(yǎng)的B16-FIO黑色素瘤細(xì)胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成具有抑制作用,并存在劑量依賴關(guān)系〔5〕;TMP對(duì)肺癌A549細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用,機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)的〔6〕;TMP通過誘導(dǎo)Bel-7402肝癌細(xì)胞株分化抑制細(xì)胞增殖〔7〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TMP能夠抑制Hela細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

        Bad是 Bcl-2家族中的促凋亡基因。Bad在多種細(xì)胞中表達(dá),研究表明Bad可通過與Caspase家族成員的相互作用和作用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與細(xì)胞凋亡全過程。接受細(xì)胞凋亡信號(hào)刺激后,鈣調(diào)磷酸酶可誘導(dǎo) Bad去磷酸化,去磷酸化的游離 Bad 通過易位等細(xì)胞活動(dòng)促進(jìn)凋亡的發(fā)生〔9〕。

        Bad蛋白對(duì)凋亡的調(diào)控與其磷酸化-去磷酸化修飾有關(guān),生理狀態(tài)下,p-Bad一方面與 14-3-3 蛋白結(jié)合成復(fù)合物穩(wěn)定存在于胞質(zhì)中發(fā)揮抗凋亡效應(yīng);另一方面,p-Bad與bcl-2解聚,而游離的bcl-2發(fā)揮抗凋亡作用〔10〕。

        Survivin是抗凋亡蛋白家族(IAP)中最小的一個(gè)抗凋亡基因,在正常組織(子宮內(nèi)膜等少數(shù)組織除外)不表達(dá),而在多種腫瘤組織中呈周期依賴性的表達(dá)〔11〕。

        Survivin通過抑制細(xì)胞色素C從線粒體的釋放從而在上游就阻斷了凋亡信號(hào)的傳導(dǎo);Survivin能夠阻止Caspase-9前體構(gòu)象的改變,進(jìn)而阻止下游Caspases分子前體蛋白的分解,且Survivin可與Caspase-3和Caspase-7結(jié)合并抑制其活性,進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡〔12〕。本研究結(jié)果提示TMP誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡、抑制其增殖,與其降低抗凋亡蛋白p-Bad和Survivin表達(dá)有關(guān)。

        4參考文獻(xiàn)

        1李金柱,李偉.川芎嗪的結(jié)構(gòu)改造及其生物活性研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2008;3(1):137-8.

        2姜宏,施廣飛,朱珠.川芎嗪對(duì)心血管作用研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)臨床藥理與治療學(xué),2007;12(5):484-6.

        3張振玉,王祟文,祝金泉,等.川芎嗪及聯(lián)用化療藥物對(duì)胃癌細(xì)胞殺傷作用的研究〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2009;9(1):68-9.

        4謝佐福,沈世仁.川芎嗪和羥基脲對(duì)阿霉素K562細(xì)胞株DNA合成的影響〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志,2008;73(9):559-60.

        5劉錦蓉,葉松柏.川芎嗪抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制〔J〕.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2011;7(2):149-52.

        6彭安,葉紅軍.川芎嗪誘導(dǎo)Bel-7402人肝癌細(xì)胞惡性表型逆轉(zhuǎn)的研究〔J〕.臨床肝膽雜志,2009;18(3):157-8.

        7劉寶瑞,徐修禮,劉文超,等.4種中藥制劑對(duì)人肺癌A549細(xì)胞增殖的影響〔J〕.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2006;18(1):94-6.

        8李隆玉,李誠(chéng)信.宮頸癌的預(yù)防與普查〔J〕.中國(guó)實(shí)用婦科雜志,2009;19:151.

        9何家璇,薛榮亮.Bad 蛋白對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2007;13(3):161-3.

        10Henshall DC,Ara KIT,Schinkler CK,etal.Activation of bcl-2-associated death protein and counter-response f Akt within ceu populations during seizure-induced neuronal death〔J〕.J Neurosci,2009;22(19):8458-65.

        11謝平,阮秋蓉,李軍川.Survivin,Bcl-2在乳腺癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2004;13(2):147-50.

        12謝海洋,劉邕波.Caspase-3及Survivin與心肌細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展〔J〕.臨床醫(yī)學(xué)工程,2014;21(1):124-5.

        〔2015-10-25修回〕

        (編輯李相軍/滕欣航)

        基金項(xiàng)目:黑龍江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(H2015074);黑龍江省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(2009-336);黑龍江省普通高等學(xué)校青年學(xué)術(shù)骨干支持計(jì)劃項(xiàng)目(1252G059);佳木斯大學(xué)科技重點(diǎn)項(xiàng)目(Sz2011-009);佳木斯大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201510222026)

        通訊作者:柳朝陽(1971-),男,碩士,副主任醫(yī)師,主要從事腫瘤干細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌免疫研究。

        〔中圖分類號(hào)〕R285.5;R73-36

        〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

        〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)11-2605-03;

        doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.016

        1佳木斯大學(xué)醫(yī)政管理處2佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院

        3佳木斯大學(xué)2014級(jí)免疫學(xué)碩士

        第一作者:張濤(1971-),女,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事中草藥抗腫瘤及腫瘤免疫機(jī)制方面的研究。

        猜你喜歡
        細(xì)胞凋亡
        木犀草素對(duì)對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的L02肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
        激素性股骨頭壞死發(fā)病機(jī)制中細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展
        傳染性法氏囊病致病機(jī)理研究
        科技視界(2016年15期)2016-06-30 12:27:37
        G—RH2誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究
        運(yùn)動(dòng)對(duì)增齡大鼠骨骼肌細(xì)胞凋亡的影響研究
        E3泛素連接酶對(duì)卵巢癌細(xì)胞系SKOV3/DDP順鉑耐藥性的影響
        山東體育學(xué)院學(xué)報(bào)(2015年3期)2015-08-14 20:30:25
        Fas/FasL對(duì)糖尿病心肌病的影響
        聯(lián)合金雀異黃素和TRAIL處理對(duì)SMMC—7721肝癌干細(xì)胞樣細(xì)胞凋亡的影響
        白色念珠菌對(duì)人口腔黏膜上皮角質(zhì)細(xì)胞的作用研究
        亚洲av人片在线观看调教| 夜夜未满十八勿进的爽爽影院| 亚洲av无码一区东京热久久| 毛多水多www偷窥小便 | 日本肥老妇色xxxxx日本老妇| 人成午夜免费大片| 欧美亚洲尤物久久综合精品| 亚洲中文乱码在线视频| 久久国产人妻一区二区| 欧美日韩一区二区三区自拍| 亚洲乱码少妇中文字幕| 亚洲精品一区二在线观看| 中文字幕人乱码中文字幕| 无码熟妇人妻av在线影片| 欧美久久中文字幕| 一区二区三区日韩蜜桃| 亚洲 欧美 国产 制服 动漫| 亚洲一区二区三区播放| 亚洲va在线va天堂va手机| 国产成人夜色在线视频观看| 男女射黄视频网站在线免费观看| 欧美人与动牲交a精品| √最新版天堂资源在线| 午夜无码无遮挡在线视频| 白嫩少妇高潮喷水av| 午夜免费视频| 久久艹影院| 人妻风韵犹存av中文字幕| 看日本全黄色免费a级| 大肉大捧一进一出好爽视色大师| 日本精品一区二区三本中文| 日本大片一区二区三区| √天堂中文官网在线| 少妇的丰满3中文字幕| 男子把美女裙子脱了摸她内裤| 人妖av手机在线观看| 精品一区二区三区无码免费视频| 国产真实乱XXXⅩ视频| 国产一区二区三区成人| 少妇被粗大的猛烈进出免费视频| 亚洲av无码一区二区三区性色|