張立秀吉林省白山市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林白山　134300

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吉林省白山市2013
—2015年初治、復(fù)治結(jié)核病患者藥敏檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析

張立秀
吉林省白山市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林白山134300

［摘要］目的通過(guò)對(duì)比分析吉林省白山地區(qū)痰抗酸染色陽(yáng)性的初、復(fù)治肺結(jié)核病人（含初治失敗轉(zhuǎn)為復(fù)治的病人）及涂陰培陽(yáng)病人對(duì)抗結(jié)核藥物的耐藥性，指導(dǎo)臨床結(jié)核病患者的合理用藥。方法選取2013年1月—2015年12月在白山市傳染病醫(yī)院住院及門診的就診，年齡在16～60歲患者394例痰培養(yǎng)陽(yáng)性患者，其中男性287例，女性107例。用珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的中性及藥物培養(yǎng)基，對(duì)白山地區(qū)394株有藥物敏感性試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)）結(jié)核菌的耐藥情況進(jìn)行結(jié)果對(duì)比分析。結(jié)果394例患者中，初治患者對(duì)一線藥耐藥的占8.05%，復(fù)治患者對(duì)一線藥耐藥的占20.25%；初治患者多耐藥的占2.54%、復(fù)治患者多耐藥的占10.13%；初治患者耐多藥的占5.51%、復(fù)治患者耐多藥的占13.29%。結(jié)論復(fù)治患者耐藥比例明顯高于初治患者，目前臨床常用的異煙肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），鏈霉素（SM）、氧氟沙星5種抗結(jié)核菌的藥物均存在一定的耐藥性，臨床應(yīng)給予重視，依據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果制定更為合理的化療方案。

［關(guān)鍵詞］白山市；結(jié)核桿菌；耐藥性；結(jié)果分析

結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康和生命安全的疾病，自20世紀(jì)90年代以來(lái)，抗結(jié)核化療藥物的應(yīng)用使得大部分肺結(jié)核患者可以被治愈，然而近年來(lái)耐藥結(jié)核分枝桿菌的流行加上抗結(jié)核新藥和疫苗研發(fā)的滯后，使得結(jié)核病控制面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。全球結(jié)核病疫情回升，其中耐多藥結(jié)核病MADR TB是疫情回升主要原因之一［1］。2012年，全球肺結(jié)核發(fā)病860萬(wàn)例，其中45萬(wàn)例為耐多藥結(jié)核病［2］，因此該地區(qū)自2013年對(duì)初復(fù)治肺結(jié)核病人（含初治失敗轉(zhuǎn)為復(fù)治的病人），進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)，對(duì)2013年1月—2015年12月，培養(yǎng)陽(yáng)性的394例患者分離出的結(jié)核菌進(jìn)行了抗菌藥物敏感性測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

白山結(jié)防所代管城區(qū)（包括渾江區(qū)、江源區(qū)、靖宇縣、臨江市、長(zhǎng)白縣共5個(gè)區(qū)），結(jié)核病診治工作分離自2013年1月—2015年12月住院及門診的就診者患者，年齡16～60歲其中男性287例，女性107例，共394例痰培養(yǎng)陽(yáng)性患者

1.2結(jié)核分枝桿菌的分離培養(yǎng)

痰涂片鏡檢后，將陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)。

（1）標(biāo)本選?。喝?jī)膳啵?］：①3份痰標(biāo)本均為陽(yáng)性：選取陽(yáng)性級(jí)別高的2份痰標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。②3份痰標(biāo)本2份陽(yáng)性：選取2份陽(yáng)性痰標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。③3份痰標(biāo)本1份陽(yáng)性：選取陽(yáng)性標(biāo)本和1份質(zhì)量好的陰性標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。

（2）培養(yǎng)基的保存和準(zhǔn)備：培養(yǎng)基應(yīng)在4℃下密封避光保存。試驗(yàn)前從冰箱取出所需的培養(yǎng)基恢復(fù)至室溫，在斜面的背面用記號(hào)筆標(biāo)注進(jìn)行培養(yǎng)的痰標(biāo)本號(hào)、病人姓名、接種日期，待用。

（3）前處理：吸取1～2 mL痰標(biāo)本至前處理管中，視樣本性狀，加入1～2倍體積4%氫氧化鈉前處理液，置渦旋振蕩器上振蕩30～60 s至標(biāo)本充分混勻，室溫放置15 min。

（4）接種：前處理完成后，以無(wú)菌吸管吸取前處理液0.1 mL，均勻接種在2支酸性羅氏培養(yǎng)基斜面上。保持斜面水平向上37℃培養(yǎng)24 h后，直立放置37℃繼續(xù)培養(yǎng)。

（5）觀察和結(jié)果報(bào)告：接種后第3和7日觀察培養(yǎng)情況，此后每周觀察1次，并按下列標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果（見(jiàn)表1）。

表1　觀察和結(jié)果報(bào)告

所有陽(yáng)性培養(yǎng)物應(yīng)保存4℃冰箱內(nèi)，在藥敏實(shí)驗(yàn)前不得打開(kāi)培養(yǎng)管。

（6）培養(yǎng)后應(yīng)將痰標(biāo)本放置于-20℃冰箱暫時(shí)保存，以備發(fā)生污染的培養(yǎng)管重新培養(yǎng)用。

1.3藥物敏感性測(cè)定［4］

（1）首先進(jìn)行涂片抗酸染色，確定為抗酸菌者應(yīng)作抗結(jié)核藥物敏感性測(cè)定。（2）藥物敏感性測(cè)定采取比例法，檢測(cè)的藥物有：異煙肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），鏈霉素（SM）、氧氟沙星。每種藥物在培養(yǎng)基中的終濃度（見(jiàn)表2）。（3）含藥培養(yǎng)基制備：水溶性藥物以滅菌蒸餾水溶解，脂溶性藥物經(jīng)少量二甲基甲酰胺溶解，以滅菌蒸餾水定容至所需的工作液濃度。準(zhǔn)確吸取1 mL工作液加入到100 mL制備好的無(wú)淀粉改良羅氏培養(yǎng)液中，混勻后分裝試管，經(jīng)培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌箱85 ℃50 min凝固滅菌。4℃保存，1個(gè)月內(nèi)使用。（4）菌液制備：新鮮菌落制成1.0 mg/mL菌懸液，依次稀釋至10-2mg/mL和10-4mg/mL。（5）接種：分別取10-2mg/mL和10-4mg/mL菌液各0.01 mL接種至對(duì)照及含藥培養(yǎng)基斜面上，最終接種量為10-4和10-6mg。（6）培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)4周。（7）結(jié)果的判讀、解釋和報(bào)告：計(jì)算耐藥百分比，即含藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)與無(wú)藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)相比的百分比。小于1%報(bào)告敏感，大于或等于1%報(bào)告耐藥。（8）注意事項(xiàng)，所有操作均在生物安全柜中操作，分離培養(yǎng)陽(yáng)性的痰標(biāo)本以及發(fā)生污染的培養(yǎng)管應(yīng)經(jīng)過(guò)高壓滅菌后處理［5］。

表2　每種藥物終濃度

2　結(jié)果

394株結(jié)核菌對(duì)5種抗菌藥物的耐藥情況，見(jiàn)表3。

表3　394株結(jié)核菌對(duì)5種抗結(jié)核菌藥物不同耐藥類型的統(tǒng)計(jì)分析

3　討論

結(jié)核病是古老的傳染性疾病，疫情在引入有效化療藥物的化療時(shí)代得到了有效控制。但是，近十幾年來(lái)，由于耐藥，尤其是多藥耐藥性結(jié)核病的發(fā)生和迅速傳播等原因，全球結(jié)核病疫情急劇惡化。人類進(jìn)入21世紀(jì)后的今天，結(jié)核病仍然是嚴(yán)重威脅人民生命和健康的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題，耐藥、耐多藥結(jié)核病的控制是其中的重要挑戰(zhàn)和核心課題之一。我國(guó)是全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，結(jié)核病耐藥疫情也十分嚴(yán)重［6］，我國(guó)2000年流調(diào)結(jié)果顯示，初始耐藥率和獲得性耐藥率分別為18.6%和46.5%［7］；初始耐多藥率和獲得性耐多藥率分別為7.6%和17.1%。近年來(lái)耐藥結(jié)核桿菌的流行加上抗結(jié)核新藥和疫苗研發(fā)的滯后，使得結(jié)核病控制面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。隨著TB藥物的廣泛使用，它的耐藥率仍在不斷升高，開(kāi)展藥敏試驗(yàn)，選擇最敏感的抗生素治療，是臨床治療TB病的重要方法。全世界2/3的結(jié)核病患者處于發(fā)生MDRTB的危險(xiǎn)之中，MDRTB呈增加趨勢(shì)，MDRTB的治療是廣大結(jié)核病防治工作者面臨的最為棘手的難題之一，各國(guó)學(xué)者正致力于尋找對(duì)其進(jìn)行治療的良策，其中新藥的研制和應(yīng)用是重要的一環(huán)，開(kāi)發(fā)一種新的抗結(jié)核藥物既需要財(cái)力和時(shí)間還要評(píng)估在體外、體內(nèi)和臨床的效果，并非易事，可謂任重而道遠(yuǎn)。但抗結(jié)核藥物的發(fā)展前景比幾十年前大大開(kāi)闊，我們或許能從中得到點(diǎn)啟示，致力于其中，在眾多研究者的不斷積極探索中，會(huì)有新的發(fā)現(xiàn)，以最終達(dá)到控制結(jié)核病的目的。但實(shí)現(xiàn)真正的新藥上市，最早可能也要到21世紀(jì)的20年代?；熑允侵委烳DRTB的主要手段，所以這段時(shí)間的對(duì)耐藥、耐多藥結(jié)核病的治療是在現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物中選擇，力求完善DOTS，適當(dāng)輔以免疫治療，介入治療等方法。

［參考文獻(xiàn)］

［1］張國(guó)欽，商健，張玉華，等.天津市城區(qū)肺結(jié)核患者對(duì)吡嗪酰胺耐藥的現(xiàn)狀及特征［J］.中國(guó)防癆雜志，2015（5）：508-513.

［2］Word Health Organization.Global TB report，2013.Gebeva：Word Health Organization［Z］.2013.

［3］趙雁林，逄宇，等.分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程［Z］.2015.

［4］王宇，趙雁林，王黎霞，等結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)［Z］.

［5］王宇，趙雁林，王黎霞，等.結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)［Z］.

［6］趙明剛，王宇，肖東樓，等.中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃實(shí)施工作指南［Z］.

［7］丁北川，萬(wàn)康林，成詩(shī)明，等.中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)［Z］.

Comparison and Analysis of Drug Sensitivity Test Results of 2013—2015 and TB Patients in Baishan City，Jilin Province，in the Beginning of the Year

ZHANG Li-xiu
Hospital of Infectious Diseases in Jilin of Baishan City Province，Baishan，Jilin Province，134300 China

［Abstract］Objective Through the comparative analysis in Baishan region，Jilin Province sputum acid fast staining positive initial and retreatment pulmonary tuberculosis patients（with initial treatment failure turn for retreatment of patients）and smear negative and culture positive patients anti tuberculosis drug resistance to guide rational use of drugs in clinical TB patients.Methods In December 2015 January 2013 in Baishan City infectious disease hospital inpatient and outpatient clinic patients，aged 60 to 16 years old 394 cases of sputum culture positive patients，including male 287 cases，female 107 cases.Take proportion method and medium with Zhuhai beisuo Biological Technology Co.，Ltd.is the production of neutral and drug，of Baishan region of 394 strains have drug sensitivity test（referred to as drug sensitivity test）of Mycobacterium tuberculosis drug resistance were analyzed.Results 394 patients naive patients on first-line drug resistance 8.05%.Retreatment of patients on first-line drug resistance（20.25%for initial treatment of patients with multi drug resistant （2.54%and retreatment patients with multi drug resistant（10.13%patients with newly diagnosed resistance multidrug accounted for 5.51%，retreatment patients resistant to many drugs accounted for 13.29%.Conclusion Analysis results show that the retreatment of the proportion of resistant cases were significantly higher than those in untreated patients，at present the clinical commonly used isoniazid（INH），rifampicin（RFP），ethambutol（EMB），streptomycin（SM），ofloxacin 5 kinds of anti TB drugs there are certain antibiotic resistance，clinical should pay more attention to，according to drug susceptibility test results to develop a more reasonable chemotherapy.

［Key words］Baishan City；Mycobacterium tuberculosis；Drug resistance

［中圖分類號(hào)］R7

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1672-5654（2016）04（a）-0113-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.10.113

［作者簡(jiǎn)介］張立秀（1973.11-），女，本科，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。

收稿日期：（2016-01-07）