韓鴻彬　王公平　陳　曄　金燦輝

(河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，河南　洛陽　471003)

食管胃結合部癌表皮生長因子-2基因擴增及蛋白表達與臨床病理的關系

韓鴻彬王公平陳曄金燦輝

(河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，河南洛陽471003)

〔摘要〕目的探討表皮生長因子-2(Her-2)在胃食管結合部癌中的蛋白表達和基因擴增情況及其與胃食管結合部癌患者的臨床病理關系。方法采用免疫組織化學法(IHC)和熒光原位雜交技術(FISH)檢測80例手術切除的胃食管結合部癌組織中HER-2的蛋白表達和基因擴增情況，并分析與胃食管結合部癌的病理分化程度、浸潤深度、臨床分期和淋巴結轉移的關系。結果應用FISH技術檢測顯示在胃食管結合部癌組織中Her-2的蛋白陽性表達率22.5%，應用IHC技術檢測其在癌組織表達率為15%，Her-2基因擴增和蛋白陽性表達與胃食管結合部癌的分化程度和臨床TNM分期有關(P<0.05)，而與年齡、性別和浸潤深度及淋巴結轉移無相關性。結論Her-2蛋白過表達和基因擴增是胃食管結合部癌患者的一個預后指標，與其發(fā)生發(fā)展有關，聯(lián)合檢測HER-2蛋白表達水平及基因擴增程度對于胃食管結合部癌的治療和預后評估有一定指導意義。

〔關鍵詞〕胃食管結合部癌；表皮生長因子-2；免疫組織化學；熒光原位雜交

胃食管結合部是指食管末段和近側胃相連接的部位。胃食管結合部癌是指腫瘤中心位于解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的腺癌〔1，2〕。近年來胃食管結合部癌發(fā)病率在我國逐年增高，關于其發(fā)病率及發(fā)病機制的研究尚少。本研究通過檢測胃食管結合部腺癌組織中的表皮生長因子-2(Her-2)蛋白表達和基因擴增情況探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集2009年12月至2012年12月在鄭州大學附屬洛陽市中心醫(yī)院手術切除并經(jīng)病理組織學確診的胃食管結合部腺癌組織蠟塊標本80例。所有病例術前未行化療或放療等抗腫瘤治療。男51例，女29例；年齡41～82歲，中位年齡61歲；分化程度為低分化50例，中-高分化30例；有淋巴結轉移62例，無淋巴結轉移18例；按AJCC(2010)病理學分期(pTNM):Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期27例。

1.2實驗方法

1.2.1免疫組化染色(IHC法)手術切除標本經(jīng)鄭州大學附屬洛陽中心醫(yī)院病理科用10%甲醛溶液固定。常規(guī)石蠟包埋、存檔。選取需要的蠟塊，使用切片機連續(xù)3～5 μm厚度切片，將組織切片置入56℃溫箱，烘片45 min，供免疫組化染色。運用二步法免疫組織化學檢測，按二步法免疫組化檢測試劑盒說明書進行操作。鼠抗人Her-2單克隆抗體用已知Her-2陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照，用PBS液代替一抗作為陰性對照。結果判定標準由兩位病理科醫(yī)師雙盲法進行。評分標準:-：無染色或<10%腫瘤細胞有膜染色；+:≥10%腫瘤細胞膜有微弱或勉強可見的膜，或細胞只有部分膜染色；:≥10%腫瘤細胞有弱到中度的完全或基底外側膜染色；:≥10%腫瘤細胞有中等到強的完全或基地外側膜染色，-、+為陰性,為可疑陽性、為陽性，IHC判定為Her-2陽性。

1.2.2熒光原位雜交GLP Her-2/CEP17雙色熒光探針及雜交緩沖液，購自北京金菩嘉公司。切片65℃烘烤過夜，甲醛固定液固定10 min,梯度乙醇脫水。①切片置于78℃甲酰胺變性液中變性15 min,依次置于-20℃預冷的70%、85%、100%乙醇脫水；②用16 μl GLP Her-2/CEP17探針和4 μl雜交緩沖液混勻制成探針混合液，78℃變性5 min后，45℃水浴箱中備用。切片自然干燥，加探針，置濕盒42℃恒溫箱雜交過夜，0.3%NP40和0.1%NP40分別洗滌后，DAPI復染，熒光顯微鏡下觀察結果。Her-2評判標準：高倍油鏡下計數(shù)20個腫瘤細胞，紅色信號為Ratio>2.2判定為陽性。上述結果均由兩名病理醫(yī)師依據(jù)以上標準進行雙盲法判定。

1.3統(tǒng)計學方法應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行χ2檢驗。

2結果

2.1IHC法檢測Her-2蛋白表達情況IHC法檢測80例胃食管結合部癌組織標本中，20例Her-2表達-，44例表達+，4例表達，12例表達，HER-2蛋白表達陽性率為15%。見圖1。

圖1　胃食管結合部癌組織Her-2蛋白表達(IHC法，×400)

2.2FISH法檢測Her-2的擴增情況FISH法檢測80例胃食管結合部癌標本，62例無基因擴增，18例呈點狀或簇狀擴增，與IHC對應表達的12例相對應的FISH檢測均Her-2基因擴增，陽性率為22.5%。

圖2　胃食管結合部癌組織Her-2擴增檢測(FISH法,×1 000)

2.4Her-2的表達與胃食管結合部癌的臨床病理體征的關系Her-2蛋白表達與患者的性別、年齡、浸潤深度、淋巴結有無轉移無明顯相關性(P<0.05)，而與腫瘤分化程度及臨床分期明顯相關(P<0.05)。見表1。

表1　Her-2的蛋白表達與胃食管結合部癌臨床

3討論

Her-2定位于人17號染色體，屬于表皮生長因子受體家族成員，毗鄰于拓撲異構酶Ⅱa基因旁，Her-2調(diào)節(jié)基因對各種蛋白的表達來影響細胞分化、增殖和生存，從而可以促進腫瘤生長并誘導其惡性轉變〔3〕。在一些胃癌的研究中已顯示HER-2在胃腺癌中有過表達，并且與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關〔4〕。其高表達與胃癌的預后和侵襲有關。在乳腺癌研究中已經(jīng)證實有15%～25%的病例發(fā)生Her-2基因的擴增和Her-2蛋白的過表達，這類患者往往是腫瘤惡性程度高、進展迅速的病例，且化療緩解期短，對標準化療和內(nèi)分泌治療易產(chǎn)生耐藥，患者的無病生存和總生存期縮短，針對Her-2的抗腫瘤靶向治療藥物,批準用于胃癌臨床的有Her-2抑制劑郝賽汀，主要針對胃癌組織Her-2高表達的患者，并在臨床治療應用中取得了一定的療效〔5,6〕。

目前世界許多國家和地區(qū)均出現(xiàn)胃遠端腫瘤發(fā)病率降低，而近端胃癌特別是胃食管結合部腺癌的發(fā)病率卻呈上升的趨勢，而且近年來的研究表明胃食管癌結合部腺癌的預后較單純食管癌和胃癌都差，示兩者生物學行為存在顯著差異〔7,8〕。Tanner等〔9〕認為在解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的胃癌發(fā)生率要遠高于胃部的胃癌，兩者Her-2的陽性表達率為24%vs12%，有顯著差異性。但在國內(nèi)也有研究表明：Her-2的陽性表達率和腫瘤的發(fā)生部位無關〔10〕。另有文獻報道Her-2蛋白在食管癌組織中的表達與分化程度相關，而與性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、遠處轉移、浸潤深度和臨床分期等臨床指標之間，均未見明顯相關性〔11〕。

本研究結果表明IHC法檢測Her-2在癌旁組織中無表達，而在胃食管結合部癌組織中過表達陽性率為15%，采用FISH檢驗的HER-2蛋白表達陽性率為22.5%，這與國內(nèi)和一些國外研究結果基本一致〔12〕。本文通過用FISH檢測法和IHC法檢測Her-2基因擴增情況結果顯示，胃食管結合部癌IHC檢測為的病例完全不需再行FISH檢測即可判定為陽性病例，IHC檢測-和+的病例無需再行FISH檢測可判定為陰性病例，IHC的病例歸為可疑類型，需再行FISH檢測。此外本結果研究還顯示：Her-2蛋白表達與食管胃結合部腺癌的發(fā)生有密切關系，說明Her-2參與了食管胃結合部腺癌的增殖、侵襲、轉移等行為〔13〕。

綜上所述，Her-2蛋白過表達及基因擴增可能有助于胃食管結合部癌惡性程度的判斷和預后情況的初步評估，隨著對胃食管結合部癌疾病的發(fā)生、發(fā)展的深入研究，Her-2在胃食管結合部癌的作用機制、蛋白表達和基因擴增狀況會進一步明確，這將為胃食管結合部癌的個體化治療提供更多的理論基礎和臨床依據(jù)。

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〔2015-01-10修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

〔中圖分類號〕R735.2

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2678-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.050

第一作者：韓鴻彬(1970-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸道腫瘤的臨床及基礎研究。