劉　莉

中國人民解放軍第161中心醫(yī)院檢驗科　武漢　430010

腦梗死患者CD36抗原缺失的基因檢測及臨床意義

劉莉

中國人民解放軍第161中心醫(yī)院檢驗科武漢430010

【摘要】目的研究腦梗死患者中CD36基因缺陷及其與腦血管病危險因素之間的關(guān)系。方法選擇腦梗死患者行CD36基因缺陷篩查，觀察CD36基因缺陷比例及缺陷類型，并對比CD36缺陷患者與CD36正?；颊叩囊话闩R床資料及血糖、血脂水平。結(jié)果腦梗死患者中CD36缺陷率高于正常人群，以1228-1239del型、949ins型基因突變?yōu)橹?。且CD36基因缺陷患者伴隨有血糖、TC、LDC-C、LP(a)、ApoA1顯著升高。結(jié)論CD36基因缺陷在腦梗死的發(fā)病機制中起重要作用，其原因可能與其導(dǎo)致的血糖、血脂調(diào)節(jié)障礙有關(guān)。CD36基因可作為腦血管病防治的分子生物學靶點。

【關(guān)鍵詞】腦梗死；CD36；血糖；血脂

腦梗死(cerebralinfarction)是目前嚴重威脅人類身體健康的一種常見病、多發(fā)病。動脈粥樣硬化是腦梗死發(fā)生發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)，而血糖和血脂異常又是動脈粥樣硬化形成的危險因素。近年來遺傳因素在腦梗死發(fā)病機制中的地位越來越引起人們的重視[1]。清道夫受體CD36是一種膜糖蛋白，廣泛存在于單核巨噬細胞、脂肪細胞、血小板、肝細胞、心肌細胞和一些上皮細胞。CD36介導(dǎo)的主要功能涉及到脂質(zhì)利用、胰島素抵抗、血栓形成和炎癥反應(yīng)，因此在動脈粥樣硬化形成中起重要作用[2]。有研究顯示，日本人群中CD36缺陷患者呈現(xiàn)了嚴重的動脈硬化病變。原因可能與CD36缺陷患者吞噬細胞吞噬OX-LDL能力下降，伴胰島素抵抗、高血壓，加重了動脈粥樣硬化的形成有關(guān)[3]。上述研究多集中于心血管系統(tǒng)，而CD36基因缺陷與腦血管病變，特別是腦梗死及其相關(guān)危險因素的關(guān)系卻未見有文獻報道。為了解決這些問題，我們對腦梗死患者進行CD36基因缺陷篩查，并觀察相應(yīng)的血糖、血脂改變，為腦血管病的早期診斷、危險人群的篩選和基因治療提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1研究對象2015-09-2015-12在161中心醫(yī)院就診的動脈粥樣硬化性腦梗死患者121例，男90例，女31例，入選者均為發(fā)病72h內(nèi)；經(jīng)頭顱CT或MRI診斷為腦梗死，經(jīng)頸部彩超證實存在頸部動脈粥樣硬化斑塊。排除標準：病人年齡<18歲或>80歲；心源性栓塞、動脈炎、外傷、血液病、藥物、腫瘤等其他原因引起的腦梗死患者；感染、炎癥性疾病，肝腎功能不全、血液病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、甲狀腺疾病和使用免疫抑制劑者。所有入選者在入組前1個月均未服用他汀類藥物。

1.2臨床資料及生化指標采集對所有患者進行身高、體質(zhì)量、血壓、體質(zhì)量指數(shù)等一般指標測量與計算，記錄患者高血壓史、冠心病史和糖尿病史等腦血管病危險因素。采集清晨空腹血進行血細胞分析和空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等生化指標測定。(1)性別；(2)年齡；(3)發(fā)病時間；(4)生命體征(體溫、血壓)；(5)血管危險因素(有無高血壓、糖尿病、血脂異常、吸煙史、飲酒史)；(6)前期治療(有無使用降壓藥物、降糖藥物)；(7)神經(jīng)功能缺損評分(NIHSS評分)；(8)實驗室檢查指標(血糖、血脂、血小板計數(shù)、白血球計數(shù))。

1.3基因檢測及分組收取所有符合研究條件的腦出血患者清晨空腹外周血5mL，并分裝、編號。用于PCR-SSP法測定有無CD36缺陷基因型。按既往報道設(shè)計CD36突變引物(見表1)，這些突變位點是亞洲人群中導(dǎo)致CD36表達缺失的常見位點[4-5]。共篩選出19例CD36缺陷患者，我們以篩查出CD36缺陷患者為基準，從102例CD36正?；颊咧刑暨x出19例相同部位、相同神經(jīng)功能缺損評分的患者作為正常對照組。見表1。

表1　檢測CD36基因缺陷的探針

C268T：在268位點堿基C替代堿基T；329-330del：在329-330位點刪除GC堿基；619-624ins：在619-624位點刪除ACTGCA堿基并且插入AAAC堿基；949ins：在949位點插入A；1 228-1 239del：在1 228-1 239位點刪除ATTGTGCCTATT堿基。

2結(jié)果

2.1CD36缺陷患者的篩查與分型將入組腦梗死患者126例，首先利用PCR-SSP技術(shù)進行CD36缺陷的篩查，典型的PCR電泳圖見圖1。共篩選出CD36缺陷患者21例，占腦梗死患者人數(shù)14.88%。其中有一種基因缺陷型15例，包括C268T型2例，329-330del型1例，1228-1239del型8例，949ins型2例，619-624ins型2例；合并有兩種基因缺陷型4例，分別為C268T+1228-1239del型1例，949ins+1228-1239del型3例；合并有三種基因缺陷型2例，均為619-624ins+949ins+1228-1239del型。

圖1　典型的CD36缺陷患者PCR電泳圖

2.2CD36缺陷與CD36正常腦梗死患者入院時臨床資料我們以篩查出CD36缺陷患者為基準，從105例CD36正?；颊咧刑暨x出18例相同部位、相同神經(jīng)功能缺損評分的患者作為正常對照組。并分析2組入院時一般臨床資料(見表2)。結(jié)果顯示，2組入院時臨床基本資料無顯著差異。

2.3CD36缺陷與CD36正常腦梗死患者血糖血脂水平糖尿病和高脂血癥是動脈粥樣硬化形成的重要危險因素。CD36主要功能涉及到脂質(zhì)利用、糖代謝等，通過對比CD36缺陷與CD36正常腦梗死患者血糖、血脂水平，以進一步了解CD36基因在動脈粥樣硬化過程中的作用。見表3。

表2　CD36缺陷/CD36正常患者的一般臨床資料

表3　CD36缺陷與CD36正常腦梗死血糖血脂水平比較

注：*P<0.05；**P<0.01

3討論

隨著人們生活飲食方式的改變、老齡化社會的來臨，腦血管病已成為影響人類健康的首要疾病。近年來，對于腦血管病發(fā)生相關(guān)基因的研究已越來越受到人們的重視，并發(fā)現(xiàn)了大量與腦血管疾病發(fā)生相關(guān)的基因位點，有望為腦血管病診斷提供方便可行的分子標記，以早期預(yù)測高風險人群并指導(dǎo)其一級預(yù)防[1]。

CD36是一種細胞表面的單鏈糖蛋白，屬B類清道夫受體，CD36廣泛存在于單核巨噬細胞、血小板、血管內(nèi)皮細胞中，CD36通過與多種配體結(jié)合，參與機體復(fù)雜的生理病理過程。目前，CD36的清道夫受體功能已被人們廣泛研究。如CD36促進巨噬細胞識別和內(nèi)化氧化低密度脂蛋白，導(dǎo)致脂質(zhì)超載形成“泡沫細胞”和動脈粥樣硬化斑塊。在機體代謝方面，CD36結(jié)合長鏈脂肪酸，促進它們進入細胞，從而參與了肌肉脂肪利用率、脂肪能量存儲和腸道吸收脂肪過程，并在代謝疾病如糖尿病和肥胖癥的發(fā)病機制中起作用[2]。

在人群存在著CD36缺陷。在歐美白人中極少有CD36缺陷，但在亞非人種中CD36缺陷比例超過2%[6]，而日本CD36缺陷患者高達3～11%[7]。據(jù)報道，國內(nèi)深圳和廣西地區(qū)人群CD36抗原缺失型頻率分別為3.19%和4.80%[8-9]。有研究顯示，腦出血病人中CD36缺陷比例高于正常人中CD36缺陷比例[10]，所以我們篩查的CD36缺陷率達14.88%，其原因也可能與選取的都是腦梗死患者有關(guān)。有研究顯示CAD病人中CD36缺陷比例高于正常人中CD36缺陷比例[11]，與之類似，我們研究發(fā)現(xiàn)在腦梗死患者中CD36缺陷率也遠高于正常人群，其原因可能與CD36缺陷導(dǎo)致血脂異常、血糖升高，這些均為腦血管病的獨立危險因素，從而導(dǎo)致發(fā)病率的提高。有研究顯示，CD36基因可能與心肌梗死發(fā)病年齡提前有關(guān)[12]，我們研究顯示，與CD36正常患者相比，CD36缺陷患者腦梗死的發(fā)病年齡也有所提前，雖然沒有統(tǒng)計學意義，但仍提示CD36基因缺陷可能與腦梗死發(fā)病有關(guān)，需要進一步大樣本研究。此外，我們發(fā)現(xiàn)與腦出血患者CD36缺陷以C268T型、329-330del型、1228-1239del型基因突變?yōu)橹鞑煌琜10]。我們的研究結(jié)果顯示腦梗死患者以1228-1239del型、949ins型基因突變?yōu)橹?，且有多個患者同時存在多個位點的基因突變型，這提示CD36基因的不同突變類型可能產(chǎn)生不同的發(fā)病機制，導(dǎo)致不同的疾病譜。以上研究說明，CD36基因在腦血管病發(fā)病中起保護作用，CD36基因缺陷可能導(dǎo)致較高的的腦血管發(fā)病率。

動脈粥樣硬化是腦梗死發(fā)生發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)，而血糖和血脂異常又是動脈粥樣硬化形成的危險因素。有研究顯示CD36缺陷患者呈現(xiàn)了嚴重的動脈硬化病變，原因可能與CD36缺陷患者吞噬細胞吞噬OX-LDL能力下降，伴有高血壓，加重了動脈粥樣硬化的形成有關(guān)。但也有研究提示CD36基因突變沒有增加動脈硬化及其并發(fā)癥(缺血性心臟病等)的風險。這些研究結(jié)果不一致，可能與地域差異、種族、研究樣本量等因素有關(guān)。我們研究結(jié)果顯示，與CD36正常患者相比，CD36缺陷患者出現(xiàn)血糖、TC、LDL-C、LPa、ApoA顯著升高，而HDL-C、ApoB顯著降低，這與Yuasa-KawaseM等人結(jié)果一致，其原因與CD36缺陷人群存在糖代謝異常、血脂代謝紊亂有關(guān)。而糖尿病、高脂血癥是腦血管病的重要危險因素，CD36缺陷的人群存在較高的糖尿病、高脂血癥發(fā)病率，可能會導(dǎo)致腦血管病發(fā)病率升高。

總之，我們的研究提示CD36基因缺陷在腦梗死的發(fā)病機制中起重要作用，其原因可能與其導(dǎo)致的血糖、血脂調(diào)節(jié)障礙有關(guān)。對CD36基因深入了解有助于研究腦血管病變的發(fā)生機制和防治措施，CD36基因可作為治療腦梗死的潛在靶點以進行藥物篩選、基因治療等，為新藥的研究發(fā)明提供新的思路。

4參考文獻

[1]ElbazA，AmarencoP.Geneticsusceptibilityandischaemicstroke[J].CurrOpinNeurol，1999，12(1)：47-55

[2]SilversteinRL，F(xiàn)ebbraioM.CD36，ascavengerreceptorinvolvedinimmunity，metabolism，angiogenesis，andbehavior[J].Scisignal，2009，2(72)：re3.

[3]JanabiM，YamashitaS，HiranoK，etal.OxidizedLDL-inducedNF-kappaBactivationandsubsequentexpressionofproinflammatorygenesaredefectiveinmonocyte-derivedmacrophagesfromCD36-deficientpatients[J].ArteriosclerThrombVascBiol，2000；20(8)：1 953-1 960.

[4]KashiwagiH，TomiyamaY，NozakiS，etal.AnalysesofgeneticabnormalitiesintypeICD36deficiencyinJapan：identificationandcellbiologicalcharacterizationoftwonovelmutationsthatcauseCD36deficiencyinman[J].Humgeneti，2001，108(6)：459-466.

[5]RacME，SafranowK，PoncyljuszW.MolecularbasisofhumanCD36genemutations[J].MolMed，2007，13(5-6)：288-296.

[6]AitmanTJ.CD36，insulinresistance，andcoronaryheartdisease[J].Lancet，2001，357(9257)：651-652.

[7]YamamotoN，IkedaH，TandonNN，etal.Aplateletmembraneglycoprotein(GP)deficiencyinhealthyblooddonors：Naka-plateletslackdetectableGPIV(CD36)[J].Blood，1990，76(9)：1 698-1 703.

[8]李大成，藍欲曉，鮑自謙，.深圳地區(qū)無償獻血者群體CD36抗原缺失型的表型分析[J].中國輸血雜志，2012，4(25)17-20.

[9]王嘉勵，葉欣，羅廣平.廣州地區(qū)無償獻血者中血小板CD36表達的篩查[J].廣州醫(yī)藥，2011，4(42)：47-49.

[10]FangH，ChenJ，LinS，etal.CD36-mediatedhematomaabsorptionfollowingintracerebralhemorrhage：negativeregulationbyTLR4signaling[J].JImmunol，2014，192(12)： 5 984-5 992.

[11]YamamotoN，IkedaH，TandonNN，etal.Aplateletmembraneglycoprotein(GP)deficiencyinhealthyblooddonors：Naka-plateletslackdetectableGPIV(CD36)[J].Blood，1990，76(9)：1698-1703.

[12]趙寧，張慧杰，王建昌.冠狀動脈疾病患者CD36基因多態(tài)性與心血管相關(guān)因素的關(guān)系[J].疑難病雜志，2015，5(14)：18-21.

(收稿2015-09-12)

GenetictestingandclinicalsignificanceofCD36antigengenedeletionincerebralinfarctionpatients

Liu Li

Department ofLaboratory，the 161 Central Hospital of PLA，Wuhan 430010，China

【Abstract】Objective To explore the CD36 gene defect in cerebral infarction patients，and its relationship with the risk factors for cerebrovascular disease.Methods Patients with cerebral infarction were screened for CD36 gene defect to observe the ratio and type of CD36 gene defect.Clinical data，blood glucose and lipid levels of CD36-deficient patients and normal patients were Compared.Results CD36 defects rate in cerebral infarction patients was higher than the normal population.The defects were predominantly 1228-1239del type and 949ins gene mutation.The glucose，TC，LDC-C，LP(a)，ApoA of CD36-deficient patients were significantly increased.Conclusion CD36 gene defect plays an important role in the pathogenesis of cerebral infarction，which might relate to the blood sugar and blood lipid regulating disorders caused by CD36.CD36 gene can be used as biological target molecule for cerebrovascular disease prevention and treatment.

【Key Words】Cerebral infarction； CD36； Blood glucose； Blood lipid

【中圖分類號】R743.33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1673-5110(2016)10-0019-03