曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城　242000)

HPLC法測定糠酸莫米松乳膏中的有關(guān)物質(zhì)

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城242000)

摘要：目的建立糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。方法采用HPLC法對(duì)艾洛松中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測定。以Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱為固定相；乙腈-水(53∶47)為流動(dòng)相；流速為1 mL·min-1；檢測波長為254 nm；進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果各單個(gè)雜質(zhì)不超過1.0%,總雜質(zhì)不超過2.0%。該方法對(duì)5個(gè)批次糠酸莫米松乳膏中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了測定，其限度均為單個(gè)雜質(zhì)不超過1.0%,總雜質(zhì)不超過2.0%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，可作為糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有關(guān)物質(zhì)的測定方法。

關(guān)鍵詞：糠酸莫米松;色譜法,高壓液相

糠酸莫米松(商品名：艾洛松 )是美國MERCK SHARP & DOHME公司開發(fā)的一種高效糖皮質(zhì)激素藥，該藥于1987年5月6日獲得美國FDA批準(zhǔn)上市，劑型為乳膏劑，規(guī)格0.1%，用于濕疹、神經(jīng)性皮炎、異位性皮炎及皮膚瘙癢癥[1-7]。糠酸莫米松乳膏于2007年4月26日經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)口。目前在國內(nèi)有7家藥企仿制生產(chǎn)上市，其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)[8]為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-025)-2004Z，該標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。歐洲藥典7.0版收載的該藥物原料藥中含有結(jié)構(gòu)類似丙酸倍氯米松的九種有關(guān)物質(zhì)[9](主要是工藝雜質(zhì)、氧化降解或水解雜質(zhì))，并規(guī)定了限度范圍，美國藥典34版Mometasone Furoate Cream中規(guī)定了上述六種有關(guān)物質(zhì)限度范圍[10]。因此，通過對(duì)糠酸莫米松乳膏中有關(guān)物質(zhì)測定方法的研究[11-12],完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制該仿制藥生產(chǎn)工藝過程所引入的工藝雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，保證該仿制藥與原研藥的質(zhì)量一致性，提高其臨床療效。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，UV檢測器，Chemstation色譜工作站；METTLER TOLEDO電子天平。

1.2試藥糠酸莫米松對(duì)照品(美國藥典委，批號(hào):H0E009)，丙酸倍氯米松對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院 批號(hào)∶100119-200603)；糠酸莫米松乳膏(共5批，批號(hào)：121101、121102、121103、11CNGFA046、11CNGFA042)；輔料：丙二醇(由南京威爾化工有限公司提供，批號(hào)：121002)單、雙硬脂酸甘油酯(由湖南爾康制藥有限公司提供，批號(hào)：120905)；乙腈為色譜純；水由Milli-Q系統(tǒng)制備。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水(53∶47)；流速：1 mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長為254 nm；進(jìn)樣量為20 μL?？匪崮姿杀Ａ魰r(shí)間為(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留時(shí)間為(22±1.0)min，糠酸莫米松峰與丙酸倍氯米松峰之間分離度應(yīng)不小于6；理論板數(shù)按糠酸莫米松對(duì)照品色譜峰計(jì)算不低于1 000。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液取糠酸莫米松對(duì)照品與丙酸倍氯米松對(duì)照品適量，精密稱定，用乙腈溶解并定容，制成每1 mL中含0.2 mg的糠酸莫米松和0.6 mg的丙酸倍氯米松對(duì)照品儲(chǔ)備液。再取上述儲(chǔ)備液適量，加乙腈稀釋成含糠酸莫米松0.05 mg和丙酸倍氯米松0.015 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液取艾洛松樣品，精密稱定，置10 mL量瓶中，加乙腈適量，置80 ℃水浴加熱使融化，強(qiáng)力振搖2 min，放冷，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，置冰浴冷卻1 h，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.2.3對(duì)照溶液精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2.2.4陰性對(duì)照溶液取其他輔料，按處方制備不含糠酸莫米松的陰性樣品，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液，作陰性干擾性試驗(yàn)和專屬性考察。

2.3測定法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液、對(duì)照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。對(duì)照品溶液糠酸莫米松保留時(shí)間為(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留時(shí)間為(22±1.0)min，糠酸莫米松峰與丙酸倍氯米松峰之間分離度應(yīng)不小于6，否則調(diào)整流動(dòng)相乙腈濃度。供試品溶液、對(duì)照溶液色譜圖至主峰保留時(shí)間2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，扣除輔料峰，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液的主峰面積的2倍(2.0%)。低于對(duì)照峰面積0.1倍的峰忽略不計(jì)。供試品溶液、對(duì)照溶液圖譜見圖1。各雜質(zhì)峰相對(duì)保留時(shí)間見表1。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1專屬性考察取供試品溶液、對(duì)照溶液以及陰性對(duì)照溶液，按下列條件進(jìn)行破壞性試驗(yàn)后進(jìn)樣測定，記錄峰面積，結(jié)果見表2。各條件適度破壞后，主峰與雜質(zhì)峰分離度均達(dá)基線分離，各雜質(zhì)峰在此條件下均有一定的響應(yīng)值。各陰性按相同方式破壞后，各降解產(chǎn)物峰在主峰位置上無任何雜質(zhì)峰。說明本法的專屬性良好。

壞條件：干熱:置200℃油浴鍋放置5 min；強(qiáng)酸:加稀鹽酸0.4 mL，置沸水浴放置4 h后，加氫氧化鈉試液0.8 mL中和；強(qiáng)堿:加氫氧化鈉試液0.4 mL，置沸水浴放置2 min后，加稀鹽酸0.2 mL中和；氧化:加30%過氧化氫0.4 mL，置沸水浴放置2 h；金屬:加新制0.1 mol·L-1氯化亞鐵中性混懸液(氫氧化鈉試液調(diào)pH值至7.0)0.4 mL，置116 ℃熱壓4 h；光照:貼于40 W冷光燈管(照度5萬Lx)10 d；濕熱:加水5 mL，置116 ℃熱壓4 h。

2.4.2檢測限試驗(yàn)取供試品溶液，用乙腈定量稀釋100倍，再逐級(jí)稀釋制成不同濃度的溶液。取最低濃度的溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，記錄基線最大噪音峰面積與主峰面積。以信噪比3∶1的供試品溶液濃度作為儀器檢測限，測定其檢測限為0.36 ng。

2.4.3定量限試驗(yàn)取供試品溶液，用乙腈定量稀釋100倍，再逐級(jí)稀釋制成不同濃度的溶液，取最低濃度的溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，記錄基線最大噪音峰面積與主峰面積。以信噪比10∶1的供試品溶液濃度作為儀器定量限，測定其定量限為1.44 ng。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取艾洛松(批號(hào)：121101)，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，精密量取供試品溶液適量，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制成對(duì)照溶液。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，計(jì)算RSD值，結(jié)果見表3。試驗(yàn)結(jié)果說明該方法重復(fù)性良好。

A對(duì)照品溶液

B供試品溶液

C對(duì)照溶液

圖1　各溶液HPLC圖

注：各雜質(zhì)名稱和結(jié)構(gòu)參考?xì)W洲藥典7.0版糠酸莫米松原料藥標(biāo)準(zhǔn)收載項(xiàng)以及各雜質(zhì)對(duì)照品溶液、樣品強(qiáng)制降解試驗(yàn)研究結(jié)果確定，目的進(jìn)行本品的雜質(zhì)定量分析，而不作定性考察。以樣品中各雜質(zhì)峰的相應(yīng)響應(yīng)值作對(duì)比研究。

表2　專屬性試驗(yàn)結(jié)果

表3　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果/%

注：單個(gè)雜質(zhì)= 單個(gè)雜質(zhì)峰面積÷對(duì)照峰面積×1%；總雜質(zhì)=(總峰面積—主峰面積)÷對(duì)照峰面積×1%。

2.4.5溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液和對(duì)照溶液，室溫自然光條件下放置，在0～24 h內(nèi)，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、1、2、4、8、24 h進(jìn)樣測定，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。計(jì)算RSD值，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h時(shí)內(nèi)不穩(wěn)定，最好臨用新制。

表4　溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.6耐用性試驗(yàn)取同一份供試品溶液和對(duì)照溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在三根不同型號(hào)、品牌色譜柱上進(jìn)樣分析。色譜圖見圖2。結(jié)果表明，本法測定糠酸莫米松乳膏有關(guān)物質(zhì)適合用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(柱長250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，填料粒徑5 μm)。

2.4.7陰性干擾性試驗(yàn)取糠酸莫米松原料、供試品溶液、對(duì)照溶液以及陰性對(duì)照溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，色譜圖見圖3。在陰性對(duì)照溶液色譜圖中與糠酸莫米松原料及供試品溶液相應(yīng)保留時(shí)間上無任何色譜峰，結(jié)果表明，該方法檢測本處方樣品陰性無干擾。

2.5樣品測定取艾洛松樣品，按“2.2.2和2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品液和對(duì)照液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，結(jié)果見表5。

Amethyst C18-P Agilent zorbax ODS Amethyst C18-H

圖2不同型號(hào)、品牌HPLC色譜圖

陰性對(duì)照溶液 原料 供試品溶液

圖3　陰性干擾性試驗(yàn)HPLC圖

3討論

本文中所制的乳膏樣品原料藥均為國產(chǎn)原料(浙江仙琚制藥公司生產(chǎn))且國內(nèi)仿制制劑生產(chǎn)廠家也大多采用此原料藥。由于糠酸莫米松原料自身所含有的工藝雜質(zhì)或氧化降解雜質(zhì)較多以及在制劑生產(chǎn)工藝過程中不可避免地引入其他降解產(chǎn)物，如乳膏劑大多是W/O型，溶解度較小的原料大多采用二甲基亞砜、丙二醇水浴助溶，以提高原料在制劑中的分散均勻度。水溶一般在80～85℃之間，糠酸莫米松對(duì)熱、濕均較不穩(wěn)定，有降解產(chǎn)物H產(chǎn)生。同時(shí)藥物強(qiáng)制降解破壞性試驗(yàn)結(jié)果也表明有降解產(chǎn)物，且在濕熱條件下出現(xiàn)了相對(duì)主峰保留時(shí)間相同的水解產(chǎn)物H。因此，有必要對(duì)糠酸莫米松乳膏中九種有關(guān)物質(zhì)的測定法進(jìn)行研究，以控制制劑中相關(guān)物質(zhì)限度，保證其安全有效。

歐洲藥典7.0版收載的該原料藥和美國藥典34版糠酸莫米松乳膏中有關(guān)物質(zhì)的限度測定均采用高效液相色譜法，色譜條件相似，均以乙腈-水(50∶50)為流動(dòng)相，以十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)為固定相，檢測波長為254 nm，不同的是校正因子的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)不同，分別是丙酸倍氯米松與鄰苯二甲酸二乙酯。本文結(jié)合制劑工藝采用乙腈-水(53∶47)為流動(dòng)相，以丙酸倍氯米松為內(nèi)標(biāo)物，可以有效提高糠酸莫米松溶解性能，使有關(guān)物質(zhì)與主峰有效分離，并進(jìn)行柱效評(píng)價(jià)。

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Determination of the related substances in Mometasone Furoate Cream by HPLC

Cao Yu-ming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCom.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

Abstract:ObjectiveTo develop a method for the related substances in mometasone furoate cream(Eloson).MethodsHPLC was adopted for the limits determination of the related substances.An Amethyst C18-P column(250 mm × 4.6 mm,5 μm)was used as the stationary phase,with a mobile phase of acetonitrile-water solution(53∶47),the flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 254 nm and the injection volume was 20 μL.ResultsFor each impurity was not more than 1.0%,the total was not more than 2.0%.Five batches of Eloson were analyzed under the established method,all of results were that for each impurity was not more than 1.0% and the total was not more than 2.0%.ConclusionThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the limit control of the related substances in Eloson.

Key words:Mometasone Furoate Cream;Chromatography,High Pressure Liquid

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.015

(收稿日期：2016-01-26，修回日期：2016-03-11)